Name: Beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit Reporter Bioassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-13T14:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 21 s
Description: Leer een snelle ADCC-bioassay voor kankerimmunotherapie met therapeutische antilichamen. Dit protocol biedt resultaten binnen één dag met hoge signaal-ruisverhouding voor nauwkeurige evaluatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Schildklierkankercellen als effectoren in een ADCC-bioassay voor kankerimmunotherapie

<ol><li>Zahavi, D., AlDeghaither, D., O'Connell, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity%3A+a+strategy+for+improving+antibody-based+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Antib+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhancing antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: a strategy for improving antibody-based immunotherapy.</a> Antib Ther. 1 (1), 7-12 (2018).</li>
<li>Fenis, A., Demaria, O., Gauthier, L., Vivier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+immune+cell+engagers+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">New immune cell engagers for cancer immunotherapy.</a> Nat Rev Immunol. 24 (7), 471-486 (2024).</li>
<li>Pinto, S., Pahl, J., Schottelius, A., Carter, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reimagining+antibody-dependent+cellular+cytotoxicity+in+cancer%3A+the+potential+of+natural+killer+cell+engagers%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Reimagining antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer: the potential of natural killer cell engagers.</a> Trends Immunol. 43 (11), 932-946 (2022).</li>
<li>Ochoa, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-dependent+cell+cytotoxicity%3A+immunotherapy+strategies+enhancing+effector+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Antibody-dependent cell cytotoxicity: immunotherapy strategies enhancing effector NK cells.</a> Immunol Cell Biol. 95 (4), 347-355 (2017).</li>
<li>Wang, W., Erbe, A. K., Hank, J. A., Morris, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cell-mediated+antibody-dependent+cellular+cytotoxicity+in+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">NK cell-mediated antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer immunotherapy.</a> Front Immunol. 6, 368(2015).</li>
<li>Chung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+in+vitro+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+activity+of+therapeutic+antibodies+-+impact+of+effector+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterization of in vitro antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activity of therapeutic antibodies - impact of effector cells.</a> J Immunol Methods. 407, 63-75 (2014).</li>
<li>Shimasaki, N., Jain, A., Campana, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cells+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">NK cells for cancer immunotherapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 19 (3), 200-218 (2020).</li>
<li>Cheng, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+robust+reporter-based+ADCC+assay+with+frozen%2C+thaw-and-use+cells+to+measure+Fc+effector+function+of+therapeutic+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies.</a> J Immunol Methods. 414, 69-81 (2014).</li>
<li>Parekh, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+an+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity-reporter+gene+assay%5BTitle%5D)+AND+%22MAbs%22%5BJournal%5D)">Development and validation of an antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity-reporter gene assay.</a> MAbs. 4 (3), 310-318 (2012).</li>
<li>Hogarth, P. M., Pietersz, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fc+receptor-targeted+therapies+for+the+treatment+of+inflammation%2C+cancer+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Fc receptor-targeted therapies for the treatment of inflammation, cancer and beyond.</a> Nat Rev Drug Discov. 11 (4), 311-331 (2012).</li>
<li>Chung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+fucose+reducing+effects+in+a+humanized+antibody+on+Fcgamma+receptor+binding+and+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+activities%5BTitle%5D)+AND+%22MAbs%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of fucose reducing effects in a humanized antibody on Fcgamma receptor binding and antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activities.</a> MAbs. 4 (3), 326-340 (2012).</li>
<li>Promega. ADCC Reporter Bioassay Core Kit Technical Manual. , 
 <a target="_blank" href="https://www.promega.sg/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/adcc-reporter-bioassay-core-kit-protocol.pdf?rev=bec36264c0b6470591ded081377d207d&sc_lang=en">https://www.promega.sg/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/adcc-reporter-bioassay-core-kit-protocol.pdf?rev=bec36264c0b6470591ded081377d207d&sc_lang=en</a> (2023).</li>
<li>Miller, A. S., Tejada, M. L., Gazzano-Santoro, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+measuring+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for measuring antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in vitro.</a> Methods Mol Biol. 1134, 59-65 (2014).</li>
<li>Lo Nigro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK-mediated+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+in+solid+tumors%3A+biological+evidence+and+clinical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">NK-mediated antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in solid tumors: biological evidence and clinical perspectives.</a> Ann Transl Med. 7 (5), 105(2019).</li>
<li>Gómez Román, V. R., Murray, J. C., Weiner, L. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aG%C3%B3mez+Rom%C3%A1n%2C+VR+%22Antibody+Fc%22">Antibody Fc</a>. Ackerman, M. E., Nimmerjahn, F. , Academic Press. 1-27 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5% Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>15400-054</td><td>Verdunn 10x in PBS om 0,05% Trypsin te maken</td></tr><tr><td>1x Tris Buffer Saline (TBS)</td><td>1st BASE</td><td>BUF-3030-1X1L</td><td>Voor het wassen van membranen in western blotting</td></tr><tr><td>1.5 M Tris Buffer, pH 8.8</td><td>1st BASE</td><td>BUF-1419-1L-pH8.8</td><td>Voor SDS-gel bereiding</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M7522-100ML</td><td>Voor monsters voorbereiden voor western blotting</td></tr><tr><td>30% Acrylamide/Bis oplossing</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610158</td><td>Voor SDS-gel bereiding</td></tr><tr><td>4x Laemmli Buffer</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610747</td><td>Voor monsters voorbereiden voor western blotting</td></tr><tr><td>96-well witte polystyreen microplaat met doorzichtige platte bodem</td><td>Corning Incorporated</td><td>3610</td><td>Voor ADCC-test</td></tr><tr><td>ADCC Bioassay Effector cellen (0,65 mL)</td><td>Promega</td><td>G7011</td><td>Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 1 vial</td></tr><tr><td>ADCC reporter bioassay core kit</td><td>Promega</td><td>G7010</td><td>Aangeduid als ADCC bioassay kit voor ADCC-test in dit experiment</td></tr><tr><td>Ammonium Persulfate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3678-25G</td><td>Voor SDS-gel bereiding</td></tr><tr><td>Bevacizumab (Humanized Anti VEGF-antilichaam)</td><td>MVASI</td><td>-</td><td>Gebruik als negatief controle-antilichaam in ADCC-test</td></tr><tr><td>BHT-101</td><td>Leibniz Institute DSMZ</td><td>ACC279</td><td>Menselijke anaplastische papillaire schildklierkanker cellijn</td></tr><tr><td>Bio-Glo Luciferase Assay Buffer</td><td>Promega</td><td>G7941</td><td>Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 10 mL</td></tr><tr><td>Bio-Glo Luciferase Assay Substraat (Lyofilisaat)</td><td>Promega</td><td>G7941</td><td>Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 1 vial</td></tr><tr><td>Celschraper</td><td>GenFollower</td><td>GD00235</td><td>Om cellen uit cultuurkolf te verwijderen</td></tr><tr><td>Cetuximab (Chimere anti-EGFR antilichaam)</td><td>ERBITUX</td><td>-</td><td>Gebruik als therapeutisch antilichaam in ADCC-test</td></tr><tr><td>Chemiluminescent HRP substraat</td><td>Merck Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td>Voor proteïne detectie in western blotting</td></tr><tr><td>Gedestilleerde water</td><td>Gibco</td><td>15230-162</td><td>Voor SDS-gel bereiding</td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Aanvulling voor cultuurmedium</td></tr><tr><td>iBright CL1500 beeldvormingssysteem</td><td>Thermo Scientific</td><td>2462621100038</td><td>Voor proteïne detectie in western blotting</td></tr><tr><td>L-glutamine, 200 mM</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td>Aanvulling voor cultuurmedium</td></tr><tr><td>Laag IgG Serum</td><td>Promega</td><td>G7110</td><td>Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 4 mL</td></tr><tr><td>Megafuge 8R</td><td>Thermo Scientific</td><td>42876589</td><td>Centrifuge</td></tr><tr><td>Muis anti-EGFR monoklonale antilichamen</td><td>BD Biosciences</td><td>610016</td><td>Primair antilichaam in western blotting</td></tr><tr><td>Muis anti-VEGFR monoklonale antilichamen</td><td>BD Biosciences</td><td>571194</td><td>Primair antilichaam in western blotting</td></tr><tr><td>Niet-enzymatische celdissociatie buffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C5789-100ML</td><td>Voor celoogst uit T75 kolf</td></tr><tr><td>Penicilline-Streptomycine</td><td>PAN Biotech</td><td>P06-07100</td><td>Antibacterieel voor cultuurmedium</td></tr><tr><td>Fosfaat Gebufferde Saline (PBS), pH 7,2, Sterieel gefilterd</td><td>1st BASE</td><td>CUS-2048-1x1L</td><td>Gebruik als wasoplossing voor cellen</td></tr><tr><td>Pierce BCA assay kit</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>Om proteïneconcentratie te meten</td></tr><tr><td>Protease en fosfatase remmer</td><td>Thermo Scientific</td><td>A32959</td><td>Voor proteïne vertering in monsters voorbereiden voor western blotting</td></tr><tr><td>PVDF membraan (Immobilin-P)</td><td>Merck Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>Voor proteïne overdracht in western blotting</td></tr><tr><td>Konijn anti-muis IgG, Fcγ HRP-geconjugeerd secundair antilichaam</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>315-035-046</td><td>Secundair antilichaam in western blotting</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medium</td><td>Capricorn Scientific</td><td>RPMI-XA</td><td>Cellen cultuurmedium</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Promega</td><td>G7080</td><td>Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 36 mL</td></tr><tr><td>Mager melkpoeder</td><td>Merck Millipore</td><td>70166-500G</td><td>Voor membraan blokkering in western blotting</td></tr><tr><td>Natrium Dodecyl Sulfaat</td><td>1st BASE</td><td>BIO-2050-500g</td><td>Voor SDS-gel bereiding</td></tr><tr><td>SW-1736</td><td>Cytion</td><td>300453</td><td>Menselijke schildklier kwaadaardige plaveiselcel canker cellijn</td></tr><tr><td>T75 kweekkolven</td><td>SPL Lifesciences</td><td>70075</td><td>Celcultuurkolf</td></tr><tr><td>Tecan Multimode Reader model Spark 10M</td><td>Tecan</td><td>1607000294</td><td>voor luminescente kwantificering</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610801</td><td>Voor SDS-gel bereiding</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Promega</td><td>H5151</td><td>Voor membraan wassen in western blotting</td></tr><tr><td>Vi-cell XR celvitaliteitsanalyzer</td><td>Beckman Coulter</td><td>AL15072</td><td>Celteller</td></tr></tbody></table>

beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit reporter bioassay

Assessing Antibody-dependent, Cell-mediated Cytotoxicity in Cancer Cells using Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity Reporter Bioassay

Beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit Reporter Bioassay

The method for antibody-dependent, cell-mediated cytotoxicity (ADCC) represents an important tool to assess the efficacy of therapeutic antibodies in ...

assessing-antibody-dependent-cell-mediated-cytotoxicity-cancer-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Cel-gemedieerde lymphocytotoxicity (CML) testen kunnen worden gebruikt voor het autoreactieve reacties en onderzoek naar mechanismen van celdood in vitro test. Echter, met behulp van live-cell confocale microscopische beeldvorming technieken met fluorescente kleurstoffen, het type en de kinetiek van celdood en gebruik gemaakt van de paden worden bestudeerd in meer detail.

Methoden om Beta Cell Death gemedieerd beoordelen door cytotoxische T lymfocyten

Het chromium afgifte assay, een gemeenschappelijke test voor het detecteren cytotoxische T-celactiviteit, heeft verschillende beperkingen. Gebruikmakende van antigeen-specifieke CD8 + T-cellen en humane borsttumor lijn, SKBR3, in dit artikel is een impedantie-gebaseerde aanpak onderzocht kan detecteren celdoding.

Het bepalen van optimale cytotoxische activiteit van de mens Her2neu Specifieke CD8 T cellen door vergelijking van de Cr51 afgifte test aan de xCELLigence System

This video demonstrates an assay measuring the antibody-mediated activation of T cell effector functions. Adding an influenza virus hemagglutinin (HA)-specific monoclonal antibody to transfected mammalian cells expressing HA results in the formation of immune complexes with HA. Upon introducing engineered T cells expressing Fc receptors and a luciferase reporter, the T cells are activated by the antibody-HA complexes, and this activation is detected by adding a luciferase substrate and...

Measuring the Activation of Fc-Mediated Effector Functions by HA Antibodies

Dit protocol beschrijft een gevoelige, cel-gebaseerde cytotoxiciteit assay. Door het tellen van de afname in frequentie van levende doelwit CD4+ T-cellen in aanwezigheid van een toenemend aantal effector CD8+ T-cellen, staat deze assay toe de directe beoordeling van de cytolytische activiteit van antigeen-specifieke CD8+ T-cellen.

Celgebaseerde flowcytometrie-test om cytotoxische activiteit te meten

De volbloed cytotoxiciteit assay (WCA) is een cytotoxiciteit assay ontwikkeld door het opnemen van high-throughput cell technologie voor plaatsbepaling met fluorescentie microscopie en geautomatiseerde beeldverwerking. Hier beschrijven we hoe lymfoomcellen behandeld met een anti-CD20 antilichaam kan worden geanalyseerd real-time in humaan volbloed kwantitatieve cellulaire cytotoxiciteit analyse.

Real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed

We beschrijven een kwantitatieve real-time in vitro cytolysis assay systeem om de potentie van chimere antigeen receptor T-cellen gericht op vloeibare en solide tumorcellen te evalueren. Dit protocol kan worden uitgebreid om andere immuuneffector cellen te beoordelen, evenals combinatie behandelingen.

Een real-time potentie test voor Chimerische antigeen receptor T-cellen gericht op vaste en hematologische kankercellen

Dit protocol presenteert een geautomatiseerde, op afbeeldingen gebaseerde high-throughput-techniek om verbindingen te identificeren die natural killer cel-gemedieerde borstkankerceldoding moduleren in de aanwezigheid van een therapeutisch anti-HER-2-antilichaam.

High-Content screening assay voor de identificatie van antilichaam-afhankelijke cellulaire cytotoxiciteit modificerende verbindingen

Het gebruik van referentiereagentia voor cytokine-afgifte zorgt voor meer reproduceerbare en gestandaardiseerde in vitro veiligheidsprofielen van immunotherapeutische monoklonale antilichamen. Hier beschrijven we hoe cytokine-afgiftetests kunnen worden gebruikt naast een referentiereagenspanel om de veiligheid van sommige therapeutische monoklonale antilichamen te voorspellen.

Gebruik van referentiereagentia om de robuustheid van cytokine-afgiftetests te bevestigen voor de voorspelling van de veiligheid van monoklonale antilichamen

Hier presenteren we een methode om verbindingen te identificeren die het ADCC-mechanisme moduleren, een belangrijk kankerceldodend mechanisme van antitumorantilichamen. Het cytotoxische effect van NK-cellen wordt gemeten in sferoïden van borstkankercellen in aanwezigheid van Trastuzumab. Beeldanalyse identificeert levende en dode killer- en doelcellen in sferoïden.

Kwantificering van antilichaamafhankelijke cellulaire cytotoxiciteit in een tumorsferoïde model: aanvraag voor ontdekking van geneesmiddelen

Hier beschrijven we een methode voor het maken van dubbele emulsiedruppeltjes die één T-cel en een kankerdoelcel inkapselen om celdoding op eencellig niveau te onderzoeken. Deze methode maakt dubbele kwantificering mogelijk van zowel cytotoxische moleculen als apoptose van doelcellen binnen een grote populatie T-cellen.

Op druppels gebaseerde cytotoxiciteitstest om chimere antigeenreceptor-T-cellen op eencellig niveau te beoordelen

Leer een snelle ADCC-bioassay voor kankerimmunotherapie met therapeutische antilichamen. Dit protocol biedt resultaten binnen één dag met hoge signaal-ruisverhouding voor nauwkeurige evaluatie.

Beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit Reporter Bioassay (Video) | JoVE Journal

Beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit Reporter Bioassay

Meer video's verkennen