Name: Visualisatie van de DNA-schaderespons in Purkinje-cellen met behulp van cerebellaire organotypische culturen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T12:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Ontdek hoe de DNA-schaderespons in Purkinje-cellen wordt geanalyseerd met cerebellaire organotypische culturen van muizen. Deze methode helpt onderzoekers de mechanismen van cerebellaire degeneratie bij ataxia-telangiectasia te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Cerebellaire Purkinje-cellen: reactie op DNA-schade in organotypische culturen

<table><tbody><tr><td>Reagens en apparatuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>150 x 30 cm Petri schotel</td><td>Corning Inc.</td><td>3261</td><td></td></tr><tr><td>35 x 10 mm Petri schotel</td><td>Corning Inc.</td><td>3294</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Invitrogen</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>270725-1L</td><td></td></tr><tr><td>Zelfklevende microscoopglaasjes</td><td>Marienfeld</td><td>48187</td><td>76 x 26 x 1 mm</td></tr><tr><td>Messen voor chopper</td><td>TED PELLA</td><td>Model TC752-1</td><td>&nbsp;Style Razor Blades</td></tr><tr><td>BME</td><td>GIBCO</td><td>41010-026 500ml.&nbsp;</td><td>Geen L-Glut</td></tr><tr><td>Celcultuur inserts</td><td>Millipore</td><td>PICM0RG50</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Biological Indo.</td><td>02-015-1A</td><td></td></tr><tr><td>HBSS zonder fenol rood</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-1138-500L</td><td>Geen Ca+, Geen Mg+</td></tr><tr><td>HBSS met fenol rood</td><td>Sartorius</td><td>02-015-1A</td><td></td></tr><tr><td>Paarden serum&nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>26050088</td><td>hitte geïnactiveerd</td></tr><tr><td>Iris forceps</td><td>CellPath</td><td>GZX-0100-00A</td><td>130mm stomp gekarteld</td></tr><tr><td>Iris spatel</td><td>F.S.T</td><td>10092-12</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>41010026</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>322412-1L</td><td></td></tr><tr><td>Methanol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Montage medium zonder</td><td>GRIGENE. Ltd, Israel</td><td>K239320A</td><td></td></tr><tr><td>Paraquat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>856177-250MG</td><td>Paraquat tweechloride (Methyl viologen)</td></tr><tr><td>PARG- Poly(ADP-Ribose) Glycohydrolase remmer</td><td>Tocris Bioscience, United Kingdom</td><td>PDD 00017273</td><td>licht gevoelig&nbsp;</td></tr><tr><td>Fosfaat buffer</td><td>Biological Indo.</td><td>02-018-1A</td><td></td></tr><tr><td>Schaar, huid-weefsel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zes-well platen</td><td>Corning incorporated</td><td>CLS3516</td><td></td></tr><tr><td>Reserve snijschijven&nbsp;</td><td>TED PELLA</td><td>Model 10180-01</td><td></td></tr><tr><td>Weefsel chopper</td><td>McIlwain</td><td>Model TC752</td><td>10180-220</td></tr><tr><td>Pincet, puntig</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Urinaire bekers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antilichamen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa fluor 488 ezel anti Konijn IgG</td><td>&nbsp; Invitrogen</td><td>A21206</td><td>1:500; secundair ab; Secundaire dilutiebuffer;&nbsp; Incubatie gedurende 2 h bij kamertemperatuur</td></tr><tr><td>Anti glial fibrillair zuur proteïne</td><td>Milliphore</td><td>MAB3402</td><td>1:1500; primair ab; blokkering; Host:muis</td></tr><tr><td>Anti-calbindin-D-28K</td><td>Swant&nbsp;</td><td>CB300</td><td>1:2000; primair ab; blokkering; host: konijn&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-calbindin-D-28K</td><td>Swant</td><td>CB-38a</td><td>1:2000; primair ab; blokkering&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-pan-ADP-ribose reagens</td><td>Milliphore</td><td>MABE1016</td><td>1:800; primair ab; blokkering; incubatie gedurende 2 h bij kamertemperatuur</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidine-2'-fenylindole dihydrochloride)</td><td>Cell signaling</td><td>4084</td><td>1:1000; secundaire dilutiebuffer; incubatie gedurende 20 min bij kamertemperatuur</td></tr></tbody></table>

visualisatie van de dna-schaderespons in purkinje-cellen met behulp van cerebellaire organotypische culturen

Visualizing the DNA Damage Response in Purkinje Cells Using Cerebellar Organotypic Cultures

Visualisatie van de DNA-schaderespons in Purkinje-cellen met behulp van cerebellaire organotypische culturen

Cerebellar Purkinje cells (PCs) exhibit a unique interplay of high metabolic rates, specific chromatin architecture, and extensive transcriptional ...

visualizing-dna-damage-response-purkinje-cells-using-cerebellar

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze methode beschrijft de generatie van organotypische cerebellaire culturen en het effect van bepaalde apoptotische stimuli op de levensvatbaarheid van de verschillende cerebellaire celtypen.

Organotypische Cerebellaire culturen: apoptotische uitdagingen en Detectie

We beschrijven een protocol dat toelaat om en kwantitatief beoordelen van de morfologie van de dendritische structuur van afzonderlijke Purkinje cellen gekweekt in organotypische cerebellum slice culturen. Dit protocol is bedoeld om studies te bevorderen over de mechanismen van Purkinje cel dendritische ontwikkeling.

De Analyse van de Purkinje cel dendritische morfologie in organotypische slice culturen

This video illustrates a technique for obtaining cerebellar organotypic slices from a mouse pup's brain and culturing the slices in media supplemented with nutrients and growth factors to mimic cerebellar development in vitro. Additionally, specific cerebellar slices are treated with a test compound, and the compound's neuroprotective ability is analyzed using an immunofluorescence staining technique.

Analyzing Purkinje Cell Survival in Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Cerebellaire granule uitwendige laag is de plaats van de grootste doorvoer versterking in de zich ontwikkelende hersenen. Hier presenteren we een protocol voor genetische modificatie om deze laag te richten op het hoogtepunt van proliferatie via ex vivo elektroporatie en cultuur van cerebellaire plakjes uit embryonale dag 14 kippenembryo's.

Ex Vivo Cultuur van Chick Cerebellaire Slices en Ruimtelijk Gerichte Elektroporatie van Korrel cel precursoren

Dit protocol beschrijft een eenvoudige methode om te isoleren en primaire muisknop cerebrale submodule neuronen (CGNs) van 6-7 dag oud pups, efficiënte transductie van CGNs voor verlies en winst van functie studies, kweken en modellering NMDA-geïnduceerde neuronale excitotoxicity, lage-kalium-veroorzaakte celdood, DNA-schade en oxidatieve stress met behulp van de zelfde cultuur-model.

Modelleren van neuronale dood en degeneratie in muis primaire cerebellaire submodule neuronen

Hier presenteren we een methode ter voorbereiding organotypic segment culturen van muis cerebellum en myelineschede kleuring door immunohistochemistry geschikt voor onderzoek naar mechanismen van myelinisering en remyelination in het centrale zenuwstelsel.

Voorbereiding en immunokleuring van Myelinating Organotypic cerebellaire segment culturen

Organotypische segment culturen zijn een krachtig hulpmiddel om neuroontwikkelingsof degeneratieve/regeneratieve processen te bestuderen. Hier beschrijven we een protocol dat de neuroontwikkelingsdood van Purkinje-cellen in muizen cerebellaire segment culturen modelheeft. Deze methode kan profiteren van onderzoek in neuroprotectieve Drug Discovery.

Purkinje-celoverleving in Organotypische cerebellaire segment culturen

Techniek die nodig is voor het visualiseren van het kloppend hart in de larven en...

Het visualiseren van de Beating Heart in Drosophila</em

Dit protocol laat een eenvoudige single-molecule fluorescentie microscopie technieken voor het visualiseren van DNA-replicatie door individuele replisomes in real time.

Visualiseren van Single-molecule DNA-replicatie met fluorescentiemicroscopie

Een gedetailleerd protocol is beschreven voor de beeldvorming van de real-time vorming van DNA-herstel complexen...

Imaging mismatch repair en cellulaire reacties op DNA-schade in Bacillus subtilis</em

Ontdek hoe de DNA-schaderespons in Purkinje-cellen wordt geanalyseerd met cerebellaire organotypische culturen van muizen. Deze methode helpt onderzoekers de mechanismen van cerebellaire degeneratie bij ataxia-telangiectasia te begrijpen.

Visualisatie van de DNA-schaderespons in Purkinje-cellen met behulp van cerebellaire organotypische culturen

Meer video's verkennen