Name: Engineering van chimere antigeenreceptor-natuurlijke killercellen die zich richten op schimmelinfecties met behulp van het niet-virale Sleeping Beauty Transposon-systeem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Leer de ontwikkeling van CAR-NK-cellen tegen schimmelinfecties met het Sleeping Beauty transposon-systeem. Deze niet-virale methode biedt een schaalbare aanpak voor celtherapie tegen Aspergillus fumigatus.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Sleeping Beauty-benadering om CAR-NK-cellen te verkrijgen voor het aanpakken van schimmelpathogenen

<ol><li>Fang, W., Latgé, J. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbe+profile%3A+Aspergillus+fumigatus%3A+A+saprotrophic+and+opportunistic+fungal+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+%28Reading%29%22%5BJournal%5D)">Microbe profile: Aspergillus fumigatus: A saprotrophic and opportunistic fungal pathogen.</a> Microbiology (Reading). 164 (8), 1009-1011 (2018).</li>
<li>Brown, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hidden+killers%3A+Human+fungal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Hidden killers: Human fungal infections.</a> Sci Transl Med. 4 (165), 165rv113(2012).</li>
<li>Sun, K. S., Tsai, C. F., Chen, S. C., Huang, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+outcome+and+prognostic+factors+associated+with+invasive+pulmonary+aspergillosis%3A+An+11-year+follow-up+report+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clinical outcome and prognostic factors associated with invasive pulmonary aspergillosis: An 11-year follow-up report from Taiwan.</a> PLoS One. 12 (10), e0186422(2017).</li>
<li>Meis, J. F., Chowdhary, A., Rhodes, J. L., Fisher, M. C., Verweij, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+implications+of+globally+emerging+azole+resistance+in+Aspergillus+fumigatus%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical implications of globally emerging azole resistance in Aspergillus fumigatus.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 371 (1709), 20150460(2016).</li>
<li>Seif, M., Einsele, H., Löffler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cells+beyond+cancer%3A+Hope+for+immunomodulatory+therapy+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">CAR T cells beyond cancer: Hope for immunomodulatory therapy of infectious diseases.</a> Front Immunol. 10, 2711(2019).</li>
<li>Seif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cells+targeting+Aspergillus+fumigatus+are+effective+at+treating+invasive+pulmonary+aspergillosis+in+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">CAR T cells targeting Aspergillus fumigatus are effective at treating invasive pulmonary aspergillosis in preclinical models.</a> Sci Transl Med. 14 (664), eabh1209(2022).</li>
<li>Kumaresan, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+T+cells+to+target+carbohydrate+to+treat+opportunistic+fungal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Bioengineering T cells to target carbohydrate to treat opportunistic fungal infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10660-10665 (2014).</li>
<li>Kumaresan, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+lentiviral+vector-based+approach+to+generate+chimeric+antigen+receptor+T+cells+targeting+Aspergillus+fumigatus%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">A novel lentiviral vector-based approach to generate chimeric antigen receptor T cells targeting Aspergillus fumigatus.</a> mBio. 15 (4), e0341323(2024).</li>
<li>Lu, H., Zhao, X., Li, Z., Hu, Y., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+CAR-T+cells+to+CAR-NK+cells%3A+A+developing+immunotherapy+method+for+hematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">From CAR-T cells to CAR-NK cells: A developing immunotherapy method for hematological malignancies.</a> Front Oncol. 11, 720501(2021).</li>
<li>Robertson, M. J., Ritz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+clinical+relevance+of+human+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Biology and clinical relevance of human natural killer cells.</a> Blood. 76 (12), 2421-2438 (1990).</li>
<li>Ziegler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD56+is+a+pathogen+recognition+receptor+on+human+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">CD56 is a pathogen recognition receptor on human natural killer cells.</a> Sci Rep. 7 (1), 6138(2017).</li>
<li>Esmaeilzadeh, A., Hadiloo, K., Jabbari, M., Elahi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+of+chimeric+antigen+receptor+%28car%29+t+versus+car+nk+cell+for+immunotherapy+of+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Current progress of chimeric antigen receptor (car) t versus car nk cell for immunotherapy of solid tumors.</a> Life Sci. 337, 122381(2024).</li>
<li>Zhang, J., Zheng, H., Diao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+cells+and+current+applications+of+chimeric+antigen+receptor-modified+NK-92+cells+in+tumor+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Natural killer cells and current applications of chimeric antigen receptor-modified NK-92 cells in tumor immunotherapy.</a> Int J Mol Sci. 20 (2), 317(2019).</li>
<li>Hu, Y., Tian, Z. G., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor+%28CAR%29-transduced+natural+killer+cells+in+tumor+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor (CAR)-transduced natural killer cells in tumor immunotherapy.</a> Acta Pharmacol Sin. 39 (2), 167-176 (2018).</li>
<li>Hudecek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Going+non-viral%3A+The+Sleeping+Beauty+transposon+system+breaks+on+through+to+the+clinical+side%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Going non-viral: The Sleeping Beauty transposon system breaks on through to the clinical side.</a> Crit Rev Biochem Mol Biol. 52 (4), 355-380 (2017).</li>
<li>Amberger, M., Ivics, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latest+advances+for+the+Sleeping+Beauty+transposon+system%3A+23+years+of+insomnia+but+prettier+than+ever%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Latest advances for the Sleeping Beauty transposon system: 23 years of insomnia but prettier than ever.</a> BioEssays. 42 (11), 2000136(2020).</li>
<li>Ingegnere, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+car+nk+cells%3A+A+new+non-viral+method+allowing+high+efficient+transfection+and+strong+tumor+cell+killing%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human car nk cells: A new non-viral method allowing high efficient transfection and strong tumor cell killing.</a> Front Immunol. 10, 957(2019).</li>
<li>Stacey, K. J., Ross, I. L., Hume, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+and+DNA-dependent+cell+death+in+murine+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Electroporation and DNA-dependent cell death in murine macrophages.</a> Immunol Cell Biol. 71 (Pt 2), 75-85 (1993).</li>
<li>Monjezi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+CAR+T-cell+engineering+using+non-viral+Sleeping+Beauty+transposition+from+minicircle+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Enhanced CAR T-cell engineering using non-viral Sleeping Beauty transposition from minicircle vectors.</a> Leukemia. 31 (1), 186-194 (2017).</li>
<li>Moscarelli, J., Zahavi, D., Maynard, R., Weiner, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+next+generation+of+cellular+immunotherapy%3A+Chimeric+antigen+receptor-natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Cell+Ther%22%5BJournal%5D)">The next generation of cellular immunotherapy: Chimeric antigen receptor-natural killer cells.</a> Transplant Cell Ther. 28 (10), 650-656 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 ML conical bottom tubes</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188271</td><td>PP, 17/120 MM, CELLSTAR, STERIELE</td></tr><tr><td>50 ML conical bottom tubes</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227270</td><td>PP, 30/115 MM, CELLSTAR, STERIELE</td></tr><tr><td>6- and 96-Well- Cell culture plate</td><td>Corning Inc. LifeSciences</td><td>83-3736/ 83-3474</td><td>TC-treated Multiple Well Plates, Flat bottoms, Treated for optimal cell attachment, Sterilized by gamma irradiation, Nonpyrogenic</td></tr><tr><td>7-AAD (7-Aminoactinomycin D)</td><td>BD Biosciences</td><td>559925</td><td>Ready-to-use nucleic acid dye for the exclusion of nonviable cells in flow cytometric assays</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-human EGFR Antibody</td><td>Biolegend</td><td>352918</td><td>Clone AY13</td></tr><tr><td>Anti-Biotin MicroBeads UltraPure</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-105-637</td><td>UltraPure MicroBeads conjugated to monoclonal mouse anti-biotin antibodies</td></tr><tr><td>Aspergillus fumigatus</td><td>ATCC</td><td>46645</td><td></td></tr><tr><td>Biosphere Filter Tips (20 and 100 μL)&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>70.3030.365 / 70.3030.275</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime;s Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>&nbsp;Modified, without calcium chloride and magnesium chloride, liquid, sterile-filtered, suitable for cell culture, endotoxin, tested</td></tr><tr><td>ELISA MAX Deluxe Set Human IFN-γ</td><td>Biolegend</td><td>430104</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt solution (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7889</td><td>for molecular biology, 0.5&nbsp;M in H2O, DNase, RNase, NICKase and protease, none detected, 0.2 μm filtered.</td></tr><tr><td>FACS clean</td><td>BD Biosciences</td><td>340345</td><td></td></tr><tr><td>FACS Flow Sheath Fluid</td><td>BD Biosciences</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>FACS Rinse Solution</td><td>BD Bioscience</td><td>340346</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td>sterile-filtered, suitable for cell culture, heat inactivated before use</td></tr><tr><td>Gibco, MEM α, nucleosides</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>22571020</td><td>Phenol Red, Ribonucleosides, Deoxyribonucleosides, Sodium Bicarbonate</td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16050122</td><td>Sterile-filtered, heat inactivated before use</td></tr><tr><td>Human IL-2 IS, research grade</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-742</td><td>Research grade. The ED50 is &le;0.3 ng/mL, corresponding to an activity of &ge;3 &times; 106 IU/mg.</td></tr><tr><td>Ionomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0634-1MG</td><td>from Streptomyces conglobatus, used as positive control for cytokine secretion&nbsp;</td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W368401</td><td>For cell culture</td></tr><tr><td>MACS LS Column</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>&nbsp;Columns and plungers, sterile packed</td></tr><tr><td>NK-92</td><td>DSMZ</td><td>ACC 488</td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfection System 100 μL-Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MPK10096</td><td>Resuspension Buffer R, Electrolytic Buffer E2, 100 μL Neon Tips, Neon Electroporation Tubes</td></tr><tr><td>Phorbol-12-myristat-13-acetat (PMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585-1MG</td><td>used as positive control for cytokine secretion&nbsp;</td></tr><tr><td>Polystyrene round-bottom tube, 5 mL</td><td>BD Bioscience</td><td>S-452400</td><td>used for flow cytometry</td></tr><tr><td>Reaction tube, 1.5 ML</td><td>Greiner Bio-One</td><td>7,26,90,001</td><td>PP, transparent, cap attached, with injected graduation. Sterilized before use.&nbsp;</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium, GlutaMAX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>72400021</td><td>GlutaMax I,&nbsp; Phenol Red, HEPES, Sterile-filtered</td></tr><tr><td>TipOne 1000 μL XL Graduated Filter Tip</td><td>StarLab</td><td>S1122-1730</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCalibur</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubator C60&nbsp;</td><td>Labotect</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heraeus Multifuge 3SR</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HydroFLEX microplate washer&nbsp;</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoQuant Infinite M200 Pro</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfection System</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettes&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Quadro MACS Separator&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

engineering van chimere antigeenreceptor-natuurlijke killercellen die zich richten op schimmelinfecties met behulp van het niet-virale sleeping beauty transposon-systeem

Engineering Chimeric Antigen Receptor-Natural Killer Cells Targeting Fungal Infections Using the Non-viral Sleeping Beauty Transposon System

Engineering van chimere antigeenreceptor-natuurlijke killercellen die zich richten op schimmelinfecties met behulp van het niet-virale Sleeping Beauty Transposon-systeem

Chimeric antigen receptor (CAR)-based cell therapies have shown impressive efficacy in the treatment of hematological malignancies. Recently, these ...

engineering-chimeric-antigen-receptor-natural-killer-cells-targeting

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates a technique for Cas9 ribonucleoprotein-mediated genetic modification of primary natural killer (NK) cells. A Cas9 ribonucleoprotein, consisting of a Cas9 endonuclease bound to a guide RNA (gRNA) formed by base pairing a CRISPR RNA (crRNA) and a trans-activating crRNA (tracrRNA), is introduced into primary natural killer cells via electroporation. The ribonucleoprotein targets and cleaves the host DNA at the target site, leading to gene knockout via modification of the...

A Technique for Gene Editing in Natural Killer Cells Using CRISPR Cas9

T cellen die een CD19-antigen specifieke chimere receptor (CAR) worden toegediend als onderzoek behandeling van B-cel maligniteiten in de eerste-in-humane gentherapie trials. We beschrijven genetische modificatie van T cellen met behulp van...

Klinische toepassing van<em&gt; Sleeping Beauty</em&gt; En Kunstmatige antigeen presenterende cellen genetisch te wijzigen T-cellen uit perifeer en navelstrengbloed

Het doel van deze studie was om formuleren van technologieën die het mogelijk voor succesvolle gene signaaltransductie in primaire natural killer (NK) cellen maken. De dextran-gemedieerde lentivirale transductie van mens of muis primaire NK cellen leidt tot hogere rendementen van gen expressie. Deze methode van gene transductie zal sterk verbeteren NK cel genetische manipulatie.

Dextran verbetert de efficiëntie van de lentivirale transductie van lymfkliertest en menselijke primaire NK-cellen

Dit protocol beschrijft een methode om stabiele integratie van een gen van belang in het menselijk genoom door het transcriptionally gereglementeerde Sleeping Beauty -systeem. Voorbereiding van de integratie van defecte lentivirale vectoren, de in vitro -transductie van menselijke cellen en de moleculaire test op getransduceerde cellen worden gemeld.

Een efficiënte In Vitro omzetting methode door een Transcriptionally gereglementeerde Sleeping Beauty systeem verpakt in een defecte lentivirale Vector integratie

Hier presenteren we een protocol om genetisch wijzigen van primaire of uitgebreide menselijke natural killer (NK) cellen met behulp van Cas9 Ribonucleoproteins (Cas9/RNPs). Met behulp van dit protocol, we genereerden menselijke NK cellen tekort voor Transformeren groeifactor-b receptor 2 (TGFBR2) en hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1).

Generatie van Knock-out primaire en uitgebreide menselijke NK-cellen met behulp van Cas9 Ribonucleoproteins

Hier presenteren we een methode om perifere bloed natural killer (PBNK), NK-cellen uit leverweefsels en chimere antigeenreceptor (CAR) -NK-cellen afgeleid van perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC's) of navelstrengbloed (CB) uit te breiden. Dit protocol demonstreert de uitbreiding van NK- en CAR-NK-cellen met behulp van 221-mIL-21-feedercellen naast de geoptimaliseerde zuiverheid van geëxpandeerde NK-cellen.

Natural Killer (NK) en CAR-NK-celuitbreidingsmethode met behulp van membraangebonden-IL-21-gemodificeerde B-cellijn

Hier presenteren we een methode om menselijke iPSC-afgeleide chimere antigeenreceptor (CAR)-tot expressie brengende natural killer-cellen te differentiëren en uit te breiden met verbeterde doding tegen verschillende maligniteiten. Dit protocol demonstreert de differentiatie en uitbreiding van voor natural killer (NK) geoptimaliseerde iPSC-afgeleide CAR-NK-cellen en de meting van antitumoractiviteit tegen verschillende tumorcellijnen.

Vooruitgang in door mensen geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide chimere antigeenreceptor-expressie natuurlijke killercellen

Dit protocol schetst een gedetailleerde procedure voor het genereren van voorbijgaande chimere antigeenreceptor (CAR) T-cellen met behulp van niet-integrerend mRNA voor kankerimmunotherapie en biedt betrouwbare methoden voor het evalueren van CAR-T-cellen en hun cytotoxische functie.

Een niet-virale benadering om voorbijgaande chimere antigeenreceptor-T-cellen te genereren met behulp van mRNA voor immunotherapie bij kanker

Er is een gedetailleerd protocol voorzien voor het gebruik van CRISPR/Cas9-technologie om zeer efficiënte, gerichte knock-in van grote, multicistronische constructies in primaire menselijke T-cellen te bereiken via de homologie-gemedieerde eindjoining (HMEJ) DNA-reparatieroute. T-cellen die met dit cGMP-aanpasbare protocol zijn ontwikkeld, behouden een uitstekende celexpansie, cytotoxiciteit en cytokineproductie.

Niet-virale engineering van primaire menselijke T-cellen via homologie-gemedieerde end-joining gerichte integratie van grote DNA-sjablonen

Dit protocol beschrijft de essentiële stappen voor de kweek van primaire T-cellen, waaronder hun isolatie, activatie, expansie en tijdelijke transfectie door mRNA-elektroporatie. Daarnaast worden een workflow en antilichaampanel voorgesteld voor flowcytometrische analyse van fenotype, activatiemarkers, levensvatbaarheid en chimere antigeenreceptor (CAR)-expressie.

Isolatie, cultivatie en tijdelijke transfectie van primaire menselijke T-cellen om chimerische antigeenreceptoren (CAR) T-cellen te genereren

Dit protocol biedt een gestandaardiseerde in vitro. workflow voor consistente meting van natuurlijke, chimere antigeenreceptor-gemedieerde en antistofafhankelijke cytotoxiciteit van menselijke natuurlijke moordenaars met behulp van live-cell imaging en flowcytometrie.

Kwantificatie van NK-cel cytotoxiciteit versterkt door chimerische antigeenreceptoren en therapeutische antilichamen met behulp van live-cell imaging en flowcytometrie

Leer de ontwikkeling van CAR-NK-cellen tegen schimmelinfecties met het Sleeping Beauty transposon-systeem. Deze niet-virale methode biedt een schaalbare aanpak voor celtherapie tegen Aspergillus fumigatus.

Engineering van chimere antigeenreceptor-natuurlijke killercellen die zich richten op schimmelinfecties met behulp van het niet-virale Sleeping Beauty Transposon-systeem (Video) | JoVE Journal

Engineering van chimere antigeenreceptor-natuurlijke killercellen die zich richten op schimmelinfecties met behulp van het niet-virale Sleeping Beauty Transposon-systeem

Meer video's verkennen