Name: Vooruitgang in door mensen geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide chimere antigeenreceptor-expressie natuurlijke killercellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Leer een protocol voor differentiatie en expansie van CAR-NK-cellen afkomstig van menselijke iPSCs met verbeterde antitumoractiviteit. Deze methode maakt schaalbare productie mogelijk voor klinische toepassingen in kankerimmunotherapie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>aAPC&nbsp;</td><td>Dean A. Lee lab&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>a-MEM culture medium&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Cat#12634</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-DYKDDDDK (FLAG Tag)</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#637308</td><td></td></tr><tr><td>APC-anti-human TRA-1-81&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>17-8883-42&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD16</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#302015</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD43&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 560198&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD45&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 555485&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>APC-GPC3</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#DB100B</td><td></td></tr><tr><td>APC-NKG2D&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat# 558071&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent&nbsp;</td><td>Thermo fisher&nbsp;</td><td>Cat#C10423</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Violet Cell Proliferation Kit&nbsp;</td><td>Thermo fisher&nbsp;</td><td>Cat#C34571</td><td>Cell tracing fluorescent dye&nbsp;</td></tr><tr><td>CryoStor solution&nbsp;</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>https://www.stemcell.com/products/cryostor-cs10.html</td><td>Cryopreservation medium</td></tr><tr><td>CTS NK Xpander</td><td>Gibco</td><td>A5019001</td><td></td></tr><tr><td>CTS NK-Xpander Medium</td><td>Life Technologies</td><td>Cat#A5019001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965084</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, high glucose, GlutaMAX Supplement, pyruvate</td><td>Gibco</td><td>10569010</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Human NK Cell Enrichment Kit&nbsp;</td><td>StemCell Technologies, Inc.&nbsp;</td><td>Cat#19055</td><td></td></tr><tr><td>Ethanolamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9508</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Cat# 10437010</td><td></td></tr><tr><td>FITC-CD94&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#555888</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>GolgiPlug&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#555029</td><td></td></tr><tr><td>GolgiStop&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#554724</td><td></td></tr><tr><td>Ham's F-12 Nutrient Mix, GlutaMAX Supplement</td><td>Gibco</td><td>31765035</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Cat#16050130</td><td></td></tr><tr><td>Human Serum&nbsp;</td><td>AB Sigma-Aldrich</td><td>Cat#BP2525100</td><td></td></tr><tr><td>Human Stem Cell NucleofectorTM Kit&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>Cat# VPH-5012</td><td></td></tr><tr><td>Human: HePG2 cells&nbsp;</td><td>ATCC&nbsp;</td><td>Cat#HB-8065</td><td></td></tr><tr><td>Human: HePG2-td-tomato-luc cells&nbsp;</td><td>Dan S. Kaufman lab</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Human: iPS cells&nbsp;</td><td>Dan S. Kaufman lab&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Human: SNU-449 cells&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>Cat#CRL-2234</td><td></td></tr><tr><td>Human: SNU-449-td-tomato-luc cells&nbsp;</td><td>Dan S. Kaufman lab</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>IncuCyte Caspase-3/7 Green Apoptosis Assay&nbsp;</td><td>Essenbioscience&nbsp;</td><td>Cat#4440</td><td></td></tr><tr><td>L-Ascorbic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>MP Biomedicals&nbsp;Human Serum, Type AB</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN2938249</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR plus</td><td>StemCell Technologies, Inc.&nbsp;</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>NovoExpress software&nbsp;</td><td>ACEA Biosciences&nbsp;</td><td>https://www.agilent.com/en/product/research-flow-cytometry/flow-cytometry-software/novocyte-novoexpress-software-1320805</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 anti-human SSEA-4 Antibody&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>330420</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD16&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#560995&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD226</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#559789</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD34&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 555822&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat# 555483&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD94&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#555888&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-cy7-CD56&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>Cat# 318318&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-FAS Ligand&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#564261&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp30</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 558407</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp44&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#558563&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp46</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#331908</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp46&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#557991&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Peripheral blood buffy coat&nbsp;</td><td>San Diego Blood Bank (https://www. sandiegobloodbank.org/)&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>PE-TRAIL&nbsp;</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Cat#565499&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>pKT2-mCAG-IRES-GFP-ZEO&nbsp;</td><td>Branden Moriarity lab&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>pMAX-GFP plasmid</td><td>Lonza</td><td>N/A</td><td>GFP positive control&nbsp;</td></tr><tr><td>Prism 9</td><td>Graphpad&nbsp;</td><td>Version 9</td><td></td></tr><tr><td>pSpCas9&nbsp;</td><td>GenScript</td><td>PX165</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lysis Buffer (10x)</td><td>Biolegend</td><td>Cat#420301</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human bFGF basic&nbsp;</td><td>R&amp;D Systems&nbsp;</td><td>Cat#4114-TC</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human BMP-4&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat#120-05</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human FLT-3 Ligand&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 300-19</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human IL-15&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 200-15</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human IL-2&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat#

vooruitgang in door mensen geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide chimere antigeenreceptor-expressie natuurlijke killercellen

Advances in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Chimeric Antigen Receptor-Expressing Natural Killer Cells

Vooruitgang in door mensen geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide chimere antigeenreceptor-expressie natuurlijke killercellen

Natural killer (NK) cells are innate immune cells that play a crucial role in the body's defense against tumors and viral infections. The generation of ...

advances-human-induced-pluripotent-stem-cell-derived-chimeric-antigen

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Hier beschrijven we een werkwijze voor het activeren en uitbreiden menselijke NKT cellen van bulk T-celpopulaties met kunstmatige antigen presenterende cellen (AAPC). Het gebruik van CD1d gebaseerde AAPC een gestandaardiseerde werkwijze voor het genereren van grote aantallen functionele NKT cellen.

Kunstmatige antigeen presenterende cel (AAPC) gemedieerde activering en uitbreiding van Natural Killer T-cellen

This video demonstrates a technique for the ex vivo generation of tumor antigen-specific chimeric antigen receptor (CAR) T cells. Retroviral vectors carrying transgenic RNA are mixed with spleen cells in a medium supplemented with interleukin-2 to promote T-cell survival and proliferation. The mixture is then transferred to a plate coated with recombinant human fibronectin fragments and centrifuged to facilitate the fusion of the virus with the cell, allowing the RNA to integrate into the host...

An Ex Vivo Technique to Generate Tumor-Specific Chimeric Antigen Receptor T Cells

Een eenvoudige en betrouwbare werkwijze is beschreven om een ​​set van NK celfuncties zoals degranulatie cytokine en chemokine productie in verschillende NK cel subsets te analyseren.

Flowcytometrie-gebaseerde test voor het toezicht op NK celfuncties

We beschrijven een kwantitatieve real-time in vitro cytolysis assay systeem om de potentie van chimere antigeen receptor T-cellen gericht op vloeibare en solide tumorcellen te evalueren. Dit protocol kan worden uitgebreid om andere immuuneffector cellen te beoordelen, evenals combinatie behandelingen.

Een real-time potentie test voor Chimerische antigeen receptor T-cellen gericht op vaste en hematologische kankercellen

Hier beschrijven we een in vitro co cultuur methode recursief uitdaging tumor-gerichte T-cellen, die het mogelijk voor fenotypische en functionele analyse van antitumorale T cel activiteit maakt.

In Vitro Tumor cel Rechallenge voor voorspellende evaluatie van chimeer antigeen Receptor T cel antitumorale functie

Hier presenteren we een protocol voor genbewerking in primaire menselijke T-cellen met behulp van CRISPR Cas-technologie om CAR-T-cellen te wijzigen.

Productie van menselijke CRISPR-engineered CAR-T-cellen

Hier presenteren we een methode om perifere bloed natural killer (PBNK), NK-cellen uit leverweefsels en chimere antigeenreceptor (CAR) -NK-cellen afgeleid van perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC's) of navelstrengbloed (CB) uit te breiden. Dit protocol demonstreert de uitbreiding van NK- en CAR-NK-cellen met behulp van 221-mIL-21-feedercellen naast de geoptimaliseerde zuiverheid van geëxpandeerde NK-cellen.

Natural Killer (NK) en CAR-NK-celuitbreidingsmethode met behulp van membraangebonden-IL-21-gemodificeerde B-cellijn

Het huidige protocol laat zien hoe CD3−/CD45+CD56+ cellen met milde cytotoxiciteit kunnen worden onderscheiden van humane expanded potential stamcellen (hEPSC's) onder zowel 3D- als 2D-kweekomstandigheden. Dit maakt routinematige fenotypische validatie mogelijk zonder de vernietiging van de complexe micro-omgeving.

Generatie van Natural Killer Cellen uit Human Expanded Potential Stamcellen

Dit protocol biedt een gestroomlijnde workflow voor het genereren en testen van menselijke chimere antigeenreceptorregulerende T-cellen (CAR Tregs).

Generatie van menselijke chimere antigeenreceptorregulerende T-cellen

We schetsen een transfectieprotocol voor het produceren van chimere antigeenreceptor-natural killer (CAR-NK) cellen die zich richten op schimmelpathogenen met behulp van het niet-virale Doornroosje-transposonsysteem. Om de antigeenspecifieke activering te beoordelen, hebben we de gemanipuleerde cellen samen gekweekt met Aspergillus fumigatus-kiembuizen en de IFN-γ secretie gemeten.

Engineering van chimere antigeenreceptor-natuurlijke killercellen die zich richten op schimmelinfecties met behulp van het niet-virale Sleeping Beauty Transposon-systeem

Dit protocol biedt een gestandaardiseerde in vitro. workflow voor consistente meting van natuurlijke, chimere antigeenreceptor-gemedieerde en antistofafhankelijke cytotoxiciteit van menselijke natuurlijke moordenaars met behulp van live-cell imaging en flowcytometrie.

Kwantificatie van NK-cel cytotoxiciteit versterkt door chimerische antigeenreceptoren en therapeutische antilichamen met behulp van live-cell imaging en flowcytometrie

Leer een protocol voor differentiatie en expansie van CAR-NK-cellen afkomstig van menselijke iPSCs met verbeterde antitumoractiviteit. Deze methode maakt schaalbare productie mogelijk voor klinische toepassingen in kankerimmunotherapie.

Vooruitgang in door mensen geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide chimere antigeenreceptor-expressie natuurlijke killercellen (Video) | JoVE Journal

Vooruitgang in door mensen geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide chimere antigeenreceptor-expressie natuurlijke killercellen

Meer video's verkennen