Name: Detectie van anti-MDA5 auto-antilichamen met behulp van HeLa-cellen en immunocytochemie met lichtmicroscopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-31T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Leer een immunocytochemische methode om anti-MDA5 auto-antilichamen te detecteren met behulp van HeLa-cellen. Deze techniek verbetert de diagnostiek van interstitiële longziekte bij myositis-patiënten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+managing+anti-MDA5+dermatomyositis%2C+including+potential+COVID-19+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry.</a> Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).</li>
<li>Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+and+juvenile+dermatomyositis%3A+are+the+distinct+clinical+features+explained+by+our+current+understanding+of+serological+subgroups+and+pathogenic+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms.</a> Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).</li>
<li>Fujisawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+myositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Management of myositis-associated interstitial lung disease.</a> Medicina. 57 (4), 347(2021).</li>
<li>Sasaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+initiation+of+plasma+exchange+therapy+for+a+patient+with+anti-MDA5+autoantibody-positive+dermatomyositis+developing+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Rheumatol+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease.</a> Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).</li>
<li>Go, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+benefit+associated+with+early+cyclosporine+treatment+for+dermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).</li>
<li>Tsuji, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+prospective+study+of+the+efficacy+and+safety+of+combined+immunosuppressive+therapy+with+high-dose+glucocorticoid%2C+tacrolimus%2C+and+cyclophosphamide+in+interstitial+lung+diseases+accompanied+by+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5-positive+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).</li>
<li>Hozumi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+assessment+of+myositis-specific+autoantibodies+in+polymyositis%2Fdermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Respir Med. 122, 1-8 (2016).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Koga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diagnostic+utility+of+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5+antibody+testing+for+predicting+the+prognosis+of+Japanese+patients+with+DM%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM.</a> Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).</li>
<li>Fuzzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-MDA5+dermatomyositis%3A+an+update+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside.</a> Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reliability+of+immunoassays+to+detect+autoantibodies+in+patients+with+myositis+is+dependent+on+autoantibody+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity.</a> Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).</li>
<li>Chen, Y. L., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).</li>
<li>Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+performance+of+an+indirect+immunofluorescence+assay+for+the+detection+of+anti-MDA5+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies.</a> Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24-well plates (1.9 cm&sup2;/well)</td><td>Corning</td><td>354541</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic-antimycotic</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>beakers</td><td>PYREX</td><td>1000-600</td><td></td></tr><tr><td>Conical tubes (15 mL)</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>Conical tubes (50 mL)</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Deionized distilled water</td><td></td><td></td><td>Ons gedeïoniseerd gedistilleerd water wordt in eigen beheer geproduceerd met behulp van een Milli-Q-systeem (kolom 1: Quantum TEX, SN: F4EB53476; kolom 2: Prepak, SN: F1CB11442)</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum Characterized</td><td>Cytiva</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>graduated cylinders (50 mL)</td><td>VITLAB</td><td>64804</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin Gill II</td><td>Leica</td><td>3801522</td><td></td></tr><tr><td>Hyclone Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium with high glucose</td><td>Cytiva</td><td>SH30243.02</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamin 2000 transfection reagent</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Transfectiereagens</td></tr><tr><td>MDA-5 (D74E4) Rabbit mAb</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>5321</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes (1.5 mL Eppendorf tubes)</td><td>AXYGEN</td><td>142503</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I reduced serum medium</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>Orbital shaker (optioneel)</td><td>FIRSTEK</td><td>S300R</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>4% in 1x PBS</td></tr><tr><td>PBS</td><td>PRO TECH</td><td>ME222605</td><td></td></tr><tr><td>pENTER-MDA5</td><td>Vigene Biosciences Inc.</td><td>CH863586</td><td></td></tr><tr><td>Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>109-035-003</td><td></td></tr><tr><td>pipette controller</td><td>Thermo Scientific</td><td>130165</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes&nbsp;</td><td>GILSON</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettes and pipette tips (10 &micro;L)</td><td>QSP</td><td>104-Q</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes and pipette tips (200 &micro;L)</td><td>QSP</td><td>T090-Q</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes and pipette tips (1000 &micro;L)</td><td>QSP</td><td>111-Q</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipettes (5 mL)</td><td>SPL</td><td>91005</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipettes (10 mL)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipettes (25 mL)</td><td>SPL</td><td>91025</td><td></td></tr><tr><td>SignalStain DAB substrate kit</td><td>Cellsignaling</td><td>8059</td><td>0.3% in PBS</td></tr></tbody></table>

detectie van anti-mda5 auto-antilichamen met behulp van hela-cellen en immunocytochemie met lichtmicroscopie

Detection of Anti-MDA5 Autoantibodies Using HeLa Cells and Immunocytochemistry with Light Microscopy

Detectie van anti-MDA5 auto-antilichamen met behulp van HeLa-cellen en immunocytochemie met lichtmicroscopie

Anti-MDA5 autoantibodies are critical biomarkers for dermatomyositis (DM), amyopathic dermatomyositis (CADM), and polymyositis (PM), particularly in ...

detection-anti-mda5-autoantibodies-using-hela-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

In de afgelopen jaren zijn levende celgebaseerde proeven met succes gebruikt om antilichamen tegen oppervlak en conformationele antigenen. Hier beschrijven we een werkwijze met hoge doorvoer flowcytometrie waardoor de analyse van grote patiëntencohorten. Detectie van nieuwe antilichamen verbetert diagnose en behandeling van immuun-gemedieerde aandoeningen.

High-throughput flowcytometrie-Cell gebaseerde test voor opsporing van antilichamen tegen N-methyl-D-aspartaat receptor of dopamine-2 receptor in het menselijk serum

Hier beschrijven we twee assays voor het meten van complement activatie geïnduceerd door antilichamen tegen rode bloedcellen. Het grote voordeel boven de huidige assays is de kwantitatieve en eenvoudig te interpreteren natuur.

Methoden voor de kwantitatieve detectie van antilichaam-geïnduceerde complement activatie op de rode bloedcellen

Is beschreven het protocol tot zelf-reactieve CD4 T-cellen te detecteren in de hersenen en het hart door directe kleuring met hoofdhistocompatibiliteitscomplex klasse II dextramers in dit rapport. Voor uitgebreide analyse is een betrouwbare methode om de frequentie van antigeen-specifieke CD4 + T-cellen in situ sommen ook ontwikkeld.

In Situ Detectie van autoreactieve CD4 T-cellen in de hersenen en het hart met behulp van Hoofdhistocompatibiliteitscomplex Klasse II Dextramers

Het begrijpen van de conformatie van virale oppervlakte-antigenen is noodzakelijk om antilichaamneutralisatie te evalueren en het ontwerp van effectieve vaccin-immunogenen te begeleiden. Hier beschrijven we een cel-gebaseerde ELISA-test die de studie van de herkenning van trimeer HIV-1 Env, tot expressie gebracht aan het oppervlak van getransfecteerde cellen, door specifieke anti-Env antilichamen mogelijk maakt.

Conformationele Evaluatie van HIV-1 Trimere envelop glycoproteïnen met een cel-gebaseerde ELISA test

Intact klasse I HLA / peptide complexen worden vergoten door kankercellen, wat neerkomt op een potentieel relevante kanker biomarker. Met behulp labelvrije sensortechnologie en T-cel receptor nabootsen monoklonale antilichamen, detectie van stal MIF / HLA-A * 02: 01 complexen in MDA-MB-231 cel supernatanten, spiked humaan serum en plasma van een patiënt wordt aangetoond, waardoor de ontwikkeling van een nieuwe kankertherapie diagnostisch platform.

Detectie van Humaan leukocytenantigeen Biomarkers bij Borstkanker Gebruikmakend-Label gratis biosensortechnologie

We beschrijven hier een methode om aanpasbare antigeen-microarrays te genereren die kunnen worden gebruikt voor de gelijktijdige detectie van serum IgG en IgM auto-antilichamen van mensen en muizen. Deze arrays maken een doorvoer en kwantitatieve detectie mogelijk van antilichamen tegen willekeurige antigenen of epitopen van belang.

Genereren van tweekleurige Antigen Microarrays voor de simultane detectie van IgG en IgM Autoantistoffen

Wij hebben ectopically NR1 subeenheid van NMDA receptor gelabeld met groen fluorescent proteïne in menselijke embryonale cellen (HEK293) als antigeen te detecteren autoantilichamen tegen NMDA receptor in het bloed van patiënten verdacht met auto-immune encefalitis. Deze eenvoudige methode kan geschikt voor screeningonderzoek in klinische instellingen zijn.

Een eenvoudige cel-gebaseerde immunofluorescentie Assay voor het detecteren van Autoantibody tegen de N-Methyl-D-aspartaat (NMDA)-Receptor in het bloed

DFS70 autoantilichamen nabootsen gemeenschappelijk ziekte-geassocieerde antinuclear antilichaam patronen maken nauwkeurige interpretatie uitdaging bij het gebruik van conventionele HEp-2 substraten. Het protocol beschrijft de voordelen van roman gemanipuleerde HEp-2 substraat ten opzichte van conventionele HEp-2 in ANA screening en het registratienummer van de DFS70 patronen met hoge vertrouwen in zowel monospecifieke als gemengde ANA positieve gevallen.

Gelijktijdige onderscheid van monospecifieke en gemengde DFS70 patronen tijdens ANA Screening met een roman HEp-2 ELITE/DFS70 Knockout substraat

We beschrijven een in vivo immunisatie, translationeel hepatitismodel in BALB / c-muizen dat kan worden gebruikt om de pathogenese van door geneesmiddelen geïnduceerde auto-immune hepatitis te bestuderen, inclusief geslachtsverschillen die bij deze ziekte worden waargenomen. We zullen beschrijven hoe dit model reproduceerbare analyses demonstreert met behulp van in vivo en in vitro experimentele technieken.

Inductie van geneesmiddel-geïnduceerde, auto-immune hepatitis bij BALB / c-muizen voor de studie van de pathogene mechanismen

Dit artikel biedt een gedetailleerde methodologie voor de meting van isolevuglandinen in weefsels door immunofluorescentie met behulp van alkalische fosfatase-geconjugeerde ScFv D11-antilichamen. Hypertensiemodellen bij zowel muizen als mensen worden gebruikt om de stapsgewijze procedures en fundamentele principes uit te leggen die verband houden met isolevuglandinemeting in weefselmonsters.

Directe detectie van isolevuglandinen in weefsels met behulp van een D11 scFv-alkalisch fosfatasefusie-eiwit en immunofluorescentie

Bij Mycoplasma pneumoniae-infectie kunnen serologische tests goede resultaten opleveren, maar met een lage specificiteit vanwege immunologische kruisreactie. De in-house antigeenvangst ELISA, beschreven in dit artikel, garandeert een hoge soortspecificiteit en is een betrouwbare screeningstest gebleken voor een nauwkeurige diagnose van M. pneumoniae.

Antigeen-Capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay voor specifieke detectie van Mycoplasma pneumoniae

Leer een immunocytochemische methode om anti-MDA5 auto-antilichamen te detecteren met behulp van HeLa-cellen. Deze techniek verbetert de diagnostiek van interstitiële longziekte bij myositis-patiënten.

Detectie van anti-MDA5 auto-antilichamen met behulp van HeLa-cellen en immunocytochemie met lichtmicroscopie

Meer video's verkennen