Een efficiënte eenpersoonstechniek voor het bemonsteren van melk van laboratoriummuizen

Dit onderzoek richt zich op het verbeteren van melkbemonsteringstechnieken in lactatieonderzoek, met name bij muizen. We presenteren een methode die uitdagingen zoals monsterverlies, beperkt volume en arbeidsintensieve processen overwint, en biedt een gestroomlijnde oplossing voor het verzamelen van knaagdiermelk en een waardevol hulpmiddel voor onderzoekers in het veld. Een van de grootste uitdagingen bij het uitvoeren van onderzoek bij muizen is hun kleine formaat, vooral als het gaat om het bemonsteren van biovloeistoffen zoals melk.

Het is moeilijk om voldoende volume te krijgen zonder monsters te bundelen of twee mensen het handmatig te laten verzamelen, wat het proces in veel gevallen minder praktisch maakt. Ons protocol vereenvoudigt het verzamelen van melk door één persoon in staat te stellen in minder dan 10 minuten voldoende volume te verzamelen met behulp van direct beschikbare laboratoriumhulpmiddelen. In tegenstelling tot andere methoden, minimaliseert het monsterverlies door continue afzuiging, waardoor melk rechtstreeks in verzamelbuisjes wordt getrokken, tijd wordt bespaard en volume voor analyse behouden blijft.

Bevestig om te beginnen het ene uiteinde van de 5/32 inch PVC-slang met binnendiameter aan de vacuümpomp en zet het hulpstuk vast met tape. Gebruik een rechte connector met weerhaken en sluit het andere uiteinde van de 5/32 inch PVC-buis met binnendiameter aan op de PVC-buis met een binnendiameter van 1/8 inch. Gebruik vervolgens een connector om het andere uiteinde van de PVC-slang met een binnendiameter van 1/8 inch aan een injectienaald van 18 gauge te bevestigen.

Knip met een schaar het uiteinde van een P200-pipetpunt af, ongeveer 0,2 centimeter, om een grotere opening te creëren. Steek de gemodificeerde P200-pipetpunt door de opening van de septumstop zodat de tip naar boven wijst en bevestig de septumstop aan een steriele opvangbuis. Prik met de 18 gauge injectienaald de septumstop door.

Zet nu de vacuümpomp aan om de zuigdruk te controleren door een gehandschoende vinger over de opening van de pipetpunt te plaatsen Scheid op de melkdag het moederdier van haar pups om melkophoping in de klieren mogelijk te maken. Houd de pups warm in een nest. Nadat je de dam hebt verdoofd, knijp je stevig in een voet van de dam om de perceptie van sensatie en pijn door het dier te beoordelen.

Breng vervolgens veterinaire oogzalf aan op de ogen van de moeder om uitdroging onder narcose te voorkomen. Plaats de verdoofde dam op haar rug op een stevige werkondergrond. Reinig de borst van de moeder voorzichtig met een steriel alcoholdoekje.

Dien één tot twee eenheden oxytocine intraperitoneaal toe tussen het vierde en vijfde paar spenen aan de kant van de peritoneale holte die geen injectie heeft gekregen. Knijp voorzichtig het nekgebied van de dam af met de niet-dominante hand. Knijp vervolgens in het borstweefsel van de basis tot de punt van de speen totdat er een druppel melk zichtbaar is.

Schakel het vacuümapparaat in door op de aan/uit-knop te drukken. Om te beginnen met melken, brengt u de omgekeerde P200 pipetpunt voorzichtig aan op een speen en gebruikt u een zachte trekkende beweging om de melk op te zuigen. Melk alle spenen totdat er voldoende melk is opgevangen.

Breng daarna de verdoofde moeder terug naar de kooi en zorg ervoor dat ze warm wordt gehouden tijdens de herstelperiode van de verdoving. 0,1 tot 0,5 milliliter melk kan comfortabel in minder dan 10 minuten van elke dam worden opgehaald. De melkvetconcentratie nam aanzienlijk toe van 174,4 gram per liter op dag twee na de bevalling tot 224,4 gram per liter op dag 10 na de bevalling.

Lactose en totale eiwitconcentraties vertoonden geen significante verschillen tussen dag twee na de bevalling en dag 10 na de bevalling. De relatieve overvloed aan alfa-S1-caseïne en weizuur eiwit was hoger in melk na de bevalling op dag 10 in vergelijking met melk na de bevalling op dag twee, terwijl bètacaseïne overvloediger was in melk na de bevalling op dag twee dan in melk na dag 10 na de bevalling. De intensiteit van de eiwitband op de elektroforesegel bevestigde visueel verschillen in relatieve hoeveelheden van individuele melkeiwitten.