Opstelling en validatie van een rattenmodel van pulmonale arteriële hypertensie geassocieerd met longfibrose

Dit onderzoek onderzoekt de pathogenese van groep drie pulmonale hypertensie, met de nadruk op moleculaire mechanismen in geval van longfibrose. In tegenstelling tot pulmonale arteriële hypertensie worden de mechanismen die ten grondslag liggen aan interstitiële longziekte geassocieerde pulmonale hypertensie nog steeds slecht begrepen. Recente ontwikkelingen op dit gebied zijn onder meer de werkzaamheid bij het omkeren van vasculaire remodellering. De ontdekking van kankerachtige endothelia-fenotypes en metabole bevindingen, die aminozuren en de ontregeling van lipiden koppelen aan de pathogenese van pulmonale hypertensie. Bulk en de single cell I-A sequencing metabolimics en functionele assays, zoals annoy case resistance testing, zijn cruciale technologieën voor het in kaart brengen van pulmonale hypertensie, heterogeniteit en het identificeren van therapeutische doelen.

[Docent] Intubeer om te beginnen de luchtpijp van de rat met behulp van een PE-50-buis, ingebracht tot een diepte van drie centimeter, wat de afstand is van de glottis tot het einde van de buis. Gebruik een spuit van één milliliter met een naald van 26 gauge om 0,2 milliliter bleomycine op te zuigen en injecteer het in de luchtwegen via een canule als een enkele dosis. Plaats de rat in rugligging om een gelijkmatige verdeling van bleomycine te garanderen. Houd de rat voorzichtig vast en draai hem langzaam, afwisselend van kant in een hoek van 30 graden tot 45 graden. Houd elke rotatie 10 tot 15 seconden vol en herhaal drie tot vier keer. Open de PFT-software en controleer of het apparaat wordt herkend. Zet nu de schakelaar van het hoofdbesturingsinstrument aan en zorg ervoor dat elke signaalversterkerschakelaar is uitgeschakeld. Om de luchtstroom in te stellen, zet u de regelmoer voor de zuigluchtstroom aan en stelt u de inspiratie in op vijf. Zet vervolgens de uitademingsmoer voor de luchtstroom aan en stel de langzame vervaldatum in op min vier. Stel de drukwaarde in op 60. Kalibreer het instrument in de volgorde van FRC-stroom, stroming, hoge stroom en longdruk met een fout van minder dan 5%. Nadat je de rat hebt verdoofd, snijd je de huid langs het midden van de nek. Scheid de spieren laag voor laag om het bovenste deel van de cervicale luchtpijp bloot te leggen. Maak een horizontale incisie tussen de tracheale kraakbeenringen. Breng de metalen canule snel in de tracheale incisie in, zorg voor de juiste positionering en zet vast met vier hechtingen zonder zijdedraad. Plaats de rat in het PFT-dierencompartiment en sluit de tracheacanule aan op de interface van het luchtstroomkanaal buiten het instrument. Klik op de startknop en onderzoek de geforceerde vitale capaciteit of FVC en dynamische longcompliantie. Voor de detectie van de systolische druk van het rechterventrikel, of RVSP, fixeert u de buik van de verdoofde rat omhoog op de experimentele bank. Maak een incisie van ongeveer vier centimeter lang aan de rechterkant van de nek met behulp van een chirurgische schaar. Scheid de uitwendige halsader voorzichtig met een microchirurgische tang en zorg ervoor dat een lengte van ongeveer een centimeter geïsoleerd is. Breng twee chirurgische lijnen in aan de distale en proximale uiteinden van de gescheiden ader. Ligaat het distale uiteinde van de uitwendige halsader met behulp van vier zijdedraad van nul nul. Til de proximale operatielijn voorzichtig op en plaats deze op de distale aderwand. Maak met een kleine schaar een kleine incisie van ongeveer 0,3 millimeter. Nadat u de PE-50-buis in de externe halsader hebt ingebracht, ligate u de PE-50-buis en -ader aan elkaar met behulp van vier zijdedraad zonder nul om bloedlekkage te voorkomen. Observeer de golfvorm van de veneuze druk op de recorder. Duw de katheter langzaam in het rechter atrium en ga deze naar de rechterventrikel om de golfvorm van de rechterventrikel weer te geven. Wanneer de druk stabiel is, registreert u de rechterventrikeldruk gedurende één minuut en slaat u de gegevens op voor analyse. Verwijder na de thoracotomie het intacte hart van de rat met een pincet. Knip het orakel en het bindweefsel bij het hart af met een schaar. Snijd de vrije wand van de rechterventrikel langs de longslagader door. Dit weefsel is de rechterventrikel en de overige weefsels zijn de linkerventrikel plus het intraventriculaire septum. Laat na scheiding het oppervlak van de rechterventrikel en de linkerventrikel plus het intraventriculaire septum leeglopen met behulp van filterpapier. Weeg de rechterventrikel en de linkerventrikel plus ventrikelseptum afzonderlijk af met een analytische balans voordat u hun gewichtsverhouding berekent. Deze figuur illustreert de hemodynamische veranderingen, pulmonale vasculaire remodellering en verminderde longfunctie die zijn waargenomen in het door bleomycine geïnduceerde PF PH-rattenmodel. De systolische druk van de rechterventrikel en de verhouding tussen rechterventrikel en linkerventrikel plus septum waren significant verhoogd in de modelgroep in vergelijking met de controlegroep. Histologische kleuring onthulde meer blauw gekleurde gebieden rond longslagaders in de modelgroep, wat wijst op een grotere collageenaccumulatie. De geforceerde vitale capaciteit en dynamische longcompliantie waren significant verminderd in de modelgroep in vergelijking met de controlegroep. Verhoudingen van de versnellingstijd van de longslagader tot de ejectietijd, de systolische excursie van het tricuspidalissenringvlak, de verandering van het rechterventrikelfractionele gebied en het hartminuutvolume waren significant verminderd in de modelgroep. De hydroxyprolineconcentratie was significant hoger in de modelgroep, wat wijst op een verhoogd collageengehalte in longweefsel. Het lever- en niergewicht verschilde niet significant tussen de controlegroep en de modelgroep.