Name: Efficiënte retrovirale transductie en competitieve homing voor het onderzoeken van GPCR-gemedieerde T-cellokalisatie in diverse weefselmicro-omgevingen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Leer retrovirale transductie en competitieve homing om GPCR-gemedieerde T-celtrafficking in diverse weefselmicro-omgevingen te bestuderen. Deze methode biedt inzicht in immuuncelpositionering.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure%2C+function+and+drug+discovery+of+GPCR+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22MolBiomed%22%5BJournal%5D)">Structure, function and drug discovery of GPCR signaling.</a> MolBiomed. 4 (1), 46(2023).</li>
<li>Lammermann, T., Kastenmuller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+GPCR-controlled+navigation+in+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Concepts of GPCR-controlled navigation in the immune system.</a> Immunol Rev. 289 (1), 205-231 (2019).</li>
<li>Fu, H., Ward, E. J., Marelli-Berg, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+t+cell+organotropism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of t cell organotropism.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (16), 3009-3033 (2016).</li>
<li>Cinalli, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+homeostasis+requires+g+protein-coupled+receptor-mediated+access+to+trophic+signals+that+promote+growth+and+inhibit+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">T cell homeostasis requires g protein-coupled receptor-mediated access to trophic signals that promote growth and inhibit chemotaxis.</a> Eur J Immunol. 35 (3), 786-795 (2005).</li>
<li>Wu, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+the+onco-GPCRome%3A+Novel+g+protein-coupled+receptor-driven+oncocrine+networks+and+targets+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Illuminating the onco-GPCRome: Novel g protein-coupled receptor-driven oncocrine networks and targets for cancer immunotherapy.</a> J Biol Chem. 294 (29), 11062-11086 (2019).</li>
<li>Wu, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GPCR-alpha%28s%29-pka+signaling+axis+promotes+T-cell+dysfunction+and+cancer+immunotherapy+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The GPCR-alpha(s)-pka signaling axis promotes T-cell dysfunction and cancer immunotherapy failure.</a> Nat Immunol. 24 (8), 1318-1330 (2023).</li>
<li>Ramezani, A., Hawley, T. S., Hawley, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+gammaretroviral+vector+expression+during+embryonic+stem+cell-derived+in+vitro+hematopoietic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Stable gammaretroviral vector expression during embryonic stem cell-derived in vitro hematopoietic development.</a> Mol Ther. 14 (2), 245-254 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Plat-E+retroviral+packaging+cells+%28RV-101%29+user+manual%22">Plat-E retroviral packaging cells (RV-101) user manual</a>. , Cell Biolabs. https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/RV-101-plat-e-retroviral-packaging-cells.pdf (2024).</li>
<li>Anderson, J., Hope, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+of+retroviral+vectors%3A+obstacles+and+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking of retroviral vectors: obstacles and advances.</a> Gene Ther. 12, 1667-1678 (2005).</li>
<li>Kim, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+analyses+of+lamina+propria+lymphocytes+from+mouse+intestines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and analyses of lamina propria lymphocytes from mouse intestines.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101366(2022).</li>
<li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161 (4), 737-749 (2015).</li>
<li>Miltenyi Biotec. CD90.1 MicroBeads mouse and rat. , https://static.miltenyibiotec.com/asset/150655405641/document_3ea1u0fdf5423ci3qg8mc8rl4c?content-disposition=inline accessed (2024).</li>
<li>Ocón, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lymphocyte+chemoaffinity+axis+for+lung%2C+non-intestinal+mucosae+and+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A lymphocyte chemoaffinity axis for lung, non-intestinal mucosae and CNS.</a> Nature. 635, 736-745 (2024).</li>
<li>Sumida, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gpr55+regulates+intraepithelial+lymphocyte+migration+dynamics+and+susceptibility+to+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gpr55 regulates intraepithelial lymphocyte migration dynamics and susceptibility to intestinal damage.</a> Sci Immunol. 2 (18), eaao1135(2017).</li>
<li>Foxman, E. F., Campbell, J. J., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multistep+navigation+and+the+combinatorial+control+of+leukocyte+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multistep navigation and the combinatorial control of leukocyte chemotaxis.</a> J. Cell Biol. 139 (5), 1349-1360 (1997).</li>
<li>Alawar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+solution+for+highly+efficient+electroporation+of+primary+cytotoxic+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A solution for highly efficient electroporation of primary cytotoxic T lymphocytes.</a> BMC Biotechnol. 24 (1), 16(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>AF647 anti mouse CD90.1-Thy1.1 (OX-7)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>202507</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD31 (DyLight 633, clone 390)</td><td>InvivoMab&nbsp;</td><td>BE0377</td><td></td></tr><tr><td>anti-mouse CD28 37.51</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>anti-mouse CD3 145-2c11</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>APCCy7 anti mouse CD3 (145-2c11)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>100329</td><td></td></tr><tr><td>BV421 anti mouse CD8b&nbsp;(Ly-3)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>126629</td><td></td></tr><tr><td>BV711 anti mouse CD4 (RM4-5)&nbsp;</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>100549</td><td></td></tr><tr><td>CD90.1 microbeads&nbsp;</td><td>Miltenyi&nbsp;</td><td>130-121-273</td><td></td></tr><tr><td>CFSE&nbsp;</td><td>Thermoscientific&nbsp;</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti mouse CD45.2 (104)</td><td>BD</td><td>AB_395041</td><td></td></tr><tr><td>mouse IL2&nbsp;</td><td>Peprotech&nbsp;</td><td>200-02-50UG</td><td></td></tr><tr><td>mouse IL7&nbsp;</td><td>Peprotech&nbsp;</td><td>&nbsp;217-17-10UG</td><td></td></tr><tr><td>Mouse T CD4 isolation kit&nbsp;</td><td>STEMCELL technologies&nbsp;</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>MSCV-IRES- Thy1.1 GPR25</td><td>Vectorbuilder&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MSCV-IRES- Thy1.1 Stuffer</td><td>Vectorbuilder&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45 (30-F11) antibody&nbsp;</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>103105</td><td></td></tr><tr><td>PECy7 anti mouse TCRb&nbsp;(H57-597)</td><td>Tonbo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PercpCy5.5 anti mouse CD45.1 (A20)</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Platinum-E (Plat-E)&nbsp;</td><td>cell Biolabs. Inc&nbsp;</td><td>RV-101</td><td></td></tr><tr><td>Yellow fluorescent dye&nbsp;</td><td>Thermoscientific&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

efficiënte retrovirale transductie en competitieve homing voor het onderzoeken van gpcr-gemedieerde t-cellokalisatie in diverse weefselmicro-omgevingen

Efficient Retroviral Transduction and Competitive Homing for Investigating GPCR-Mediated T-Cell Localization in Diverse Tissue Microenvironments

Efficiënte retrovirale transductie en competitieve homing voor het onderzoeken van GPCR-gemedieerde T-cellokalisatie in diverse weefselmicro-omgevingen

Understanding how G-protein coupled receptor (GPCR) expression affects cell positioning within diverse tissue microenvironments is essential for ...

efficient-retroviral-transduction-competitive-homing-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

We presenteren een protocol om antigeen-specifieke muis T-cellen te produceren met behulp van retrovirale...

Retrovirale Transductie van T-cel-receptoren in Mouse T-cellen

Concurrerende homing experimenten toelaten om rechtstreeks de beoordeling van de trekkende eigenschappen van twee verschillende celpopulaties in een muis. Hier hebben we illustreren deze procedure door het vergelijken van de migratie van ex vivo gegenereerde gut-tropische versus niet-gut tropische T-cellen.

Concurrerende Homing Testen om de Gut-tropische T-cel-migratie Study

Adenovirale genoverdracht in naïeve CD4 T-cellen met transgene expressie van de Coxsackie adenovirus receptor kan de moleculaire analyse van regulatoire T...

Adenovirale transductie van Naïeve CD4 T-cellen aan Treg Differentiatie Studie

We beschrijven een protocol om de radiale mobiliteit van niet-aderente immuuncellen in vitro te monitoren met behulp van een celsedimentatie manifold/slide apparaat. Celmigratie wordt gevolgd op monolagen van tumorcellen of op extracellulaire matrix-eiwitten. Onderzoek door licht- en fluorescentiemicroscopie maakt observatie van celmobiliteit en cytotoxische functionaliteit mogelijk.

Radial Mobiliteit en cytotoxische functie van retrovirale replicerende vector getransduceerde, niet-klevende Alloresponsive T-lymfocyten

We presenteren een snel en flexibel protocol voor een enkelvoudig T-celreceptor (TCR) retroviraal-gebaseerd in vivo expressiesysteem.  Retrovirale vectoren worden gebruikt om beenmerg-progenitorchellen te transduceren om T-celontwikkeling en functie van een enkele TCR in vivo te bestuderen als een alternatief voor TCR-transgene muizen.

Retrovirale Transductie van beenmerg stamcellen voor het genereren van T-cel Receptor Retrogenic Muizen

Vele experimentele systemen zijn gebruikt om de mechanismen reguleren T cel ontwikkeling en functie van een immuunrespons begrijpen. Hier een genetische benadering met behulp van retrovirale transductie wordt beschreven, dat is economisch, tijd efficiënt, en nog belangrijker, zeer informatieve bij het identificeren van de regelgeving paden.

Retrovirale Transductie van helper T-cellen als een genetische benadering om te studeren mechanismen die hun differentiatie en functie

De huidige protocol combineert eencellige gekoppeld menselijke TCR alpha en beta keten sequencing met gestroomlijnd generatie van retrovirale vectoren compatibel met in vitro en in vivo TCR expressie.

Gestroomlijnd eencellige TCR isolatie en generatie van retrovirale vectoren voor In Vitro en In Vivo expressie van menselijke TCRs

Dit protocol beschrijft confocale microscopie detectie van G-eiwit-gekoppelde receptor (GPCR) internalisatie in zoogdiercellen. Het omvat de basis-celkweek, transfectie, en confocale microscopie procedure en zorgt voor een efficiënte en gemakkelijk te interpreteren methode om de subcellulaire lokalisatie en de internalisering van-fusion uitgedrukt GPCR detecteren.

Detectie van ligand-geactiveerde G-proteïne gekoppelde receptor internalisatie door confocale microscopie

Hier beschrijven we een methode voor retrovirale overexpressie en adoptieoverdracht van murine B-1a cellen om in vivo B-1a celmigratie en lokalisatie te onderzoeken. Dit protocol kan worden uitgebreid voor diverse downstream functionele tests, waaronder kwantificering van donor B-1a cellokalisatie of analyse van donorcel-afgeleide gedesinteveneerde factoren na adoptieve overdracht.

Retrovirale overexpressie van CXCR4 op Murine B-1a Cellen en adoptieve overdracht voor gerichte B-1a celmigratie naar het beenmerg en igm productie

We presenteren een protocol voor retrovirale transductie van gids-RNA in primaire T-cellen van Cas9 transgene muizen, en bieden een efficiënt alternatief voor genbewerking bij het bestuderen van Th17-differentiatie.

Retrovirale CRISPR/Cas9-gemedieerde gentargeting voor de studie van Th17-differentiatie in vitro

Leer retrovirale transductie en competitieve homing om GPCR-gemedieerde T-celtrafficking in diverse weefselmicro-omgevingen te bestuderen. Deze methode biedt inzicht in immuuncelpositionering.

Efficiënte retrovirale transductie en competitieve homing voor het onderzoeken van GPCR-gemedieerde T-cellokalisatie in diverse weefselmicro-omgevingen (Video) | JoVE Journal

Efficiënte retrovirale transductie en competitieve homing voor het onderzoeken van GPCR-gemedieerde T-cellokalisatie in diverse weefselmicro-omgevingen

Meer video's verkennen