Name: Intracellulaire fosfoflowcytometrie van acute myeloïde leukemie Patiënt-afgeleide xenotransplantaties (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T15:35:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Leer fosfoflowcytometrie voor signaaltransductieonderzoek bij acute myeloïde leukemie met behulp van patiënt-afgeleide xenotransplantaties in muizen. Deze methode meet fosforyleerde eiwitten zoals p-STAT5 en p-ERK1/2.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ferrara, F., Schiffer, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukaemia+in+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukaemia in adults.</a> Lancet. 381 (9865), 484-495 (2013).</li>
<li>Döhner, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+AML+in+adults%3A+2017+ELN+recommendations+from+an+international+expert+panel%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel.</a> Blood. 129 (4), 424-447 (2017).</li>
<li>Chung, Y. R., Kim, E., Abdel-Wahab, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+bone+marrow+aspiration+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Femoral bone marrow aspiration in live mice.</a> J Vis Exp. (89), e51660(2014).</li>
<li>Haas, A., Weckbecker, G., Welzenbach, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Phospho-Flow+cytometry+reveals+novel+insights+into+TCR+proximal+signaling+events.+A+comparison+with+Western+blot%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Intracellular Phospho-Flow cytometry reveals novel insights into TCR proximal signaling events. A comparison with Western blot.</a> Cytometry A. 73 (9), 799-807 (2008).</li>
<li>Perbellini, O., Cavallini, C., Chignola, R., Galasso, M., Scupoli, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospho-specific+flow+cytometry+reveals+signaling+heterogeneity+in+t-cell+acute+lymphoblastic+leukemia+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Phospho-specific flow cytometry reveals signaling heterogeneity in t-cell acute lymphoblastic leukemia cell lines.</a> Cells. 11 (13), 2072(2022).</li>
<li>Kornblau, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+activation+of+multiple+signal+transduction+pathways+confers+poor+prognosis+in+acute+myelogenous+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Simultaneous activation of multiple signal transduction pathways confers poor prognosis in acute myelogenous leukemia.</a> Blood. 108 (7), 2358-2365 (2006).</li>
<li>Perl, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+targeted+therapy+in+the+management+of+patients+with+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Hematology+Am+Soc+Hematol+Educ+Program%22%5BJournal%5D)">The role of targeted therapy in the management of patients with AML.</a> Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2017 (1), 54µ65(2017).</li>
<li>Márton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+phosphorylation+of+signaling+proteins+in+the+prognosis+of+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol+Oncol+Res%22%5BJournal%5D)">The roles of phosphorylation of signaling proteins in the prognosis of acute myeloid leukemia.</a> Pathol Oncol Res. 30, 1611747(2024).</li>
<li>Levis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLT3+mutations+in+acute+myeloid+leukemia%3A+what+is+the+best+approach+in+2013%5BTitle%5D)+AND+%22Hematology+Am+Soc+Hematol+Educ+Program%22%5BJournal%5D)">FLT3 mutations in acute myeloid leukemia: what is the best approach in 2013.</a> Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2013, 220-226 (2013).</li>
<li>Roux, P. P., Topisirovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+involved+in+the+regulation+of+mRNA+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways involved in the regulation of mRNA translation.</a> Mol Cell Biol. 38 (12), e00070-e00118 (2018).</li>
<li>Nepstad, I., Hatfield, K. J., Grønningsæter, I. S., Reikvam, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PI3K-Akt-mTOR+signaling+pathway+in+human+Acute+Myeloid+Leukemia+%28AML%29+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The PI3K-Akt-mTOR signaling pathway in human Acute Myeloid Leukemia (AML) Cells.</a> Int J Mol Sci. 21 (8), ijms21082907(2020).</li>
<li>Jia, X., Zhou, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospho-eIF4E%3A+A+new+target+for+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protein+Pept+Sci%22%5BJournal%5D)">Phospho-eIF4E: A new target for acute myeloid leukemia.</a> Curr Protein Pept Sci. 22 (4), 328-335 (2021).</li>
<li>Ghosh, J., Kapur, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mTORC1-S6K1+signaling+pathway+in+regulation+of+hematopoietic+stem+cell+and+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Role of mTORC1-S6K1 signaling pathway in regulation of hematopoietic stem cell and acute myeloid leukemia.</a> Exp Hematol. 50, 13-21 (2017).</li>
<li>Park, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+resistance+in+acute+myeloid+leukemia+cells+is+mediated+by+a+novel+ATM%2FmTOR+pathway+regulating+oxidative+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Therapeutic resistance in acute myeloid leukemia cells is mediated by a novel ATM/mTOR pathway regulating oxidative phosphorylation.</a> Elife. 11, 79940(2022).</li>
<li>Oki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+dynamic+mTORC1+pathway+activity+in+vivo+reveals+marked+shifts+that+support+time-specific+inhibitor+therapy+in+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Imaging dynamic mTORC1 pathway activity in vivo reveals marked shifts that support time-specific inhibitor therapy in AML.</a> Nat Commun. 12 (1), 245(2021).</li>
<li>Lee, H. J., Daver, N., Kantarjian, H. M., Verstovsek, S., Ravandi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+JAK+pathway+dysregulation+in+the+pathogenesis+and+treatment+of+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The role of JAK pathway dysregulation in the pathogenesis and treatment of acute myeloid leukemia.</a> Clin Cancer Res. 19 (2), 327-335 (2013).</li>
<li>Liu, A. C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+STAT5+signaling+overcomes+resistance+to+IDH+Inhibitors+in+acute+myeloid+leukemia+through+suppression+of+stemness%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting STAT5 signaling overcomes resistance to IDH Inhibitors in acute myeloid leukemia through suppression of stemness.</a> Cancer Res. 82 (23), 4325-4339 (2022).</li>
<li>Sung, P. J., Sugita, M., Koblish, H., Perl, A. E., Carroll, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+cytokines+mediate+resistance+to+targeted+therapy+in+FLT3-ITD+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic cytokines mediate resistance to targeted therapy in FLT3-ITD acute myeloid leukemia.</a> Blood Adv. 3 (7), 1061-1072 (2019).</li>
<li>Song, P., Yang, F., Jin, H., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regulation+of+protein+translation+and+its+implications+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">The regulation of protein translation and its implications for cancer.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 68(2021).</li>
<li>This Standard Operating Procedure (SOP) describes methods for anesthetizing mice. , McGill University. 
 <a target="_blank" href="https://www.mcgill.ca/research/files/research/110-mouse_anesthesia-2024-06-17.pdf">https://www.mcgill.ca/research/files/research/110-mouse_anesthesia-2024-06-17.pdf</a> (2024).</li>
<li>Tech Team Tips: Preparing a Sample with AO/PI. , DeNovix. 
 <a target="_blank" href="https://www.denovix.com/webinars/tech-team-tips-preparing-a-sample-with-ao-pi">https://www.denovix.com/webinars/tech-team-tips-preparing-a-sample-with-ao-pi</a> (2021).</li>
<li>Suni, M. A., Maino, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+analysis+of+cell+signaling+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric analysis of cell signaling proteins.</a> Methods Mol Biol. 717, 155-169 (2011).</li>
<li>Krutzik, P. O., Irish, J. M., Nolan, G. P., Perez, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+phosphorylation+and+cellular+signaling+events+by+flow+cytometry%3A+techniques+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein phosphorylation and cellular signaling events by flow cytometry: techniques and clinical applications.</a> Clin Immunol. 110 (3), 206-221 (2004).</li>
<li>Chen, W., Luu, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotyping+by+multiparameter+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunophenotyping by multiparameter flow cytometry.</a> Methods Mol Biol. 1633, 51-73 (2017).</li>
<li>Perez, O. D., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospho-proteomic+immune+analysis+by+flow+cytometry%3A+From+mechanism+to+translational+medicine+at+the+single-cell+level%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Phospho-proteomic immune analysis by flow cytometry: From mechanism to translational medicine at the single-cell level.</a> Immunol Rev. 210, 208-228 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL spuiten 25G x 5/8 TW </td><td>BD Biosciences</td><td>#309626</td><td>Spuiten voor beenmergaspiratie</td></tr><tr><td>1,7 mL Microcentrifugebuizen</td><td>FroggaBio</td><td>#LMCT1.7B</td><td>Om de cellen die zijn teruggewonnen door beenmergaspiratie te verdelen</td></tr><tr><td>BD Horizon Brilliant Stain Buffer</td><td>BD Biosciences</td><td>#563794</td><td>Voor kleuringsprocessen</td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Fidelis Animal Health</td><td>Ethiqa XR</td><td>Analgesie voor muizen</td></tr><tr><td>CellDrop FL Unlimited</td><td>FroggaBio</td><td>#CellDrop FL- UNLTD</td><td>Voor celtelling</td></tr><tr><td>D-PBS</td><td>Wisent Inc.</td><td>#311-425-CL</td><td>Media voor cellen teruggewonnen door beenmergaspiratie</td></tr><tr><td>Eppendorf Centrifuge 5427 R</td><td>Millipore Sigma</td><td>#EP5429000260</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum Warmte-inactiveerd Premium CA</td><td>Wisent Inc.</td><td>#090-450</td><td>Voor kleuringsprocessen</td></tr><tr><td>Formaldehyde-oplossing</td><td>Millipore Sigma</td><td>#F1635</td><td>Cellen Permeabilisatie</td></tr><tr><td>humanCD45 [HI30] antilichaam </td><td>BD Biosciences</td><td>#563792</td><td>Antilichaam gekoppeld met BUV395</td></tr><tr><td>ID7000 Spectral Cell Analyzer</td><td>Sony</td><td></td><td>Spectral flow cytometer analyzer</td></tr><tr><td>Isofluraan 99,9% vloeistof</td><td>McKesson</td><td>#803250</td><td>Anesthesie voor muizen</td></tr><tr><td>Isospire (isofluraan) Inhalatieanesthesie</td><td>Dechra</td><td></td><td>Anesthesie voor muizen</td></tr><tr><td>Live/dead AO/PI</td><td>FroggaBio</td><td>CD-AO/PI-1.5</td><td>Voor celtelling</td></tr><tr><td>Live/dead Zombie NIR</td><td>BioLegend+B6:C12</td><td>#423106</td><td>Voor spectrale flowcytometrie</td></tr><tr><td>Methanoloplossing</td><td>Millipore Sigma</td><td>#179957</td><td>Cellen Fixatie</td></tr><tr><td>P-4EBP1 (Thr37/46) [236B4] antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2846</td><td>Antilichaam gekoppeld met Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>p-Erk1/2 (Thr202/Tyr204) [197G2] antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#13148</td><td>Antilichaam gekoppeld met Alexa Fluor 647</td></tr><tr><td>p-RPS6 (Ser240/244) [D68F8] antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#9468</td><td>Antilichaam gekoppeld met Alexa Fluor 594</td></tr><tr><td>p-STAT5 (Tyr694) [D47E7] antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#14603</td><td>Antilichaam gekoppeld met PE</td></tr><tr><td>Rabbit IgG Control [DA1E]</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2975</td><td>Antilichaam gekoppeld met Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>Rabbit IgG Control [DA1E]</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2985</td><td>Antilichaam gekoppeld met Alexa Fluor 647</td></tr><tr><td>Rabbit IgG Control [DA1E]</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#8760</td><td>Antilichaam gekoppeld met Alexa Fluor 594</td></tr><tr><td>Rabbit IgG Control [DA1E]</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#5742S</td><td>Antilichaam gekoppeld met PE</td></tr><tr><td>Ontsmettingsdoekjes</td><td>United Canada</td><td>#UCDWPR-9022</td><td>Desinfectie voor beenmergaspiratie</td></tr></tbody></table>

intracellulaire fosfoflowcytometrie van acute myeloïde leukemie patiënt-afgeleide xenotransplantaties

Intracellular Phosphoflow Cytometry of Acute Myeloid Leukemia Patient-Derived Xenotransplants

Intracellulaire fosfoflowcytometrie van acute myeloïde leukemie Patiënt-afgeleide xenotransplantaties

To adapt and resist approved treatments, acute myeloid leukemia (AML) cells activate specific molecular pathways that lead to changes in gene expression, ...

intracellular-phosphoflow-cytometry-acute-myeloid-leukemia-patient

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates the evaluation of stromal cytokine-induced intracellular phosphorylation of proteins in leukemia cells. These intracellular phosphorylated proteins are quantified using the phospho-flow cytometry technique.

Evaluation of Stromal Cytokine-Induced Intracellular Protein Phosphorylation Using Phospho-Flow Cytometry

Duidelijk naar voren komt een protocol voor het detecteren van gelijktijdige uitdrukking van leukemie stamcel merkers op primaire acute myeloïde leukemie cellen door stroom cytometry. We laten zien hoe te kwantificeren drie voorlopercellen populaties en een vermeende LSC bevolking met de toenemende mate van rijping. We hebben bevestigd dat de aanwezigheid van deze populaties in overeenkomstige patiënt-afgeleid-xenografts.

Stroom Cytometry om te schatten leukemie cellen van de stam in primaire Acute myeloïde leukemie en patiënt-afgeleid-xenografts, bij diagnose en Follow Up

De experimentele procedure op de immunophenotyping van lymfkliertest orthotopic PDAC homografts is gericht op de profilering van de tumor immuno-communicatie. Tumoren zijn orthotopically geïmplanteerd via chirurgie. Tumoren van 200 – 600 mm3 in grootte werden geoogst en losgekoppeld om te bereiden eencellige schorsingen, gevolgd door multi immuun marker FACS analyse met behulp van verschillende fluorescently gelabelde antilichamen.

Immunophenotyping van Orthotopic Homograft (Syngeneic) van de alvleesklier ductaal adenocarcinoom lymfkliertest primaire KPC door Stroom Cytometry

We beschrijven een methode voor het gebruik van Multi parameter flow cytometrie te detecteren mitochondriale reactieve zuurstof soorten (ROS) in Murine gezonde hematopoietische stam en voorlopercellen (HSPCs) en leukemie cellen van een muismodel van acute myeloïde leukemie (AML) gedreven door MLL-AF9.

Flow cytometrische analyse van mitochondriale reactieve zuurstof soorten in Muriene hematopoietische stam en voorlopercellen en MLL-AF9 gedreven leukemie

We presenteren twee verschillende kleuringsprotocollen voor NKG2D ligand (NKG2DL) detectie in menselijke primaire acute myeloïde leukemie (AML) monsters. De eerste benadering is gebaseerd op een fusie-eiwit, in staat om alle bekende en potentieel nog onbekende liganden te herkennen, terwijl het tweede protocol afhankelijk is van de toevoeging van meerdere anti-NKG2DL-antilichamen.

Twee flow cytometrische benaderingen van NKG2D Ligand-oppervlaktedetectie om stamcellen te onderscheiden van bulksubpopulaties bij acute myeloïde leukemie

Hier beschrijven we een protocol waarin een acuut lymfoblastische leukemiepatiënt-afgeleid xenograftmodel wordt gebruikt als een strategie om CD19-gerichte chimere antigeenreceptor T-cel-geassocieerde toxiciteiten te beoordelen en te monitoren.

Beoordeling van chimere antigeenreceptor T-celgeassocieerde toxiciteiten met behulp van een acuut lymfoblastische leukemiepatiënt-afgeleid xenograftmuismodel

We gebruikten celproliferatiekleuring om slapende cellen te identificeren in het zebravis T-acute lymfoblastische leukemiemodel. De kleuring wordt vastgehouden in niet-delende cellen en verminderd tijdens celproliferatie, waardoor slapende cellen kunnen worden geselecteerd voor verder onderzoek. Dit protocol biedt een functioneel hulpmiddel om zelfvernieuwing te bestuderen in de context van cellulaire rust.

Identificatie van slapende cellen in een zebravis T-cel acute lymfoblastische leukemiemodel met behulp van celproliferatiekleuring 

Dit protocol biedt stapsgewijze instructies voor het genereren en oplossen van problemen met xenotransplantaten voor acute lymfatische leukemie (ALL) bij de mens uit cellijnen en vers patiëntenmateriaal in kortstondig immunosuppressie-zebravisembryo's, samen met richtlijnen voor de beoordeling van de geneesmiddelrespons met behulp van flowcytometrie. De experimentele pijplijn kan ook worden aangepast voor solide tumoren.

Snelle in vivo voorspelling van geneesmiddelrespons met behulp van leukemieceltransplantaten in zebravisembryo's

Dit protocol beschrijft in ovo xenotransplantatie van van de patiënt afgeleide B- en T-acute lymfoblastische leukemie (ALL)-cellen, die 4 dagen na injectie plaatsvindt.

In Ovo Xenotransplantatie van van patiënten afgeleide acute lymfoblastische leukemie (ALL)-cellen (PDX-ALL)

Deze video toont de procedure voor de differentiatie van myeloïde dendritische cellen van de muis beenmerg. Isolatie van de muis scheenbeen en dijbeen, en verwerking van het beenmerg worden aangetoond. Foto's tonen celmorfologie voor en na de differentiatie, en figuren afbeelden cel fenotype en IL-12 productie na rijping met behulp van CpG worden weergegeven.

Cultuur van myeloïde dendritische cellen uit beenmerg precursors

Leer fosfoflowcytometrie voor signaaltransductieonderzoek bij acute myeloïde leukemie met behulp van patiënt-afgeleide xenotransplantaties in muizen. Deze methode meet fosforyleerde eiwitten zoals p-STAT5 en p-ERK1/2.

Intracellulaire fosfoflowcytometrie van acute myeloïde leukemie Patiënt-afgeleide xenotransplantaties

Meer video's verkennen