Name: Komeettest om DNA-schade te kwantificeren in FLT3-cellen die mutant tot expressie brengen van 32D na blootstelling aan type I en type II FLT3-remmers (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Leer de komeettest om DNA-schade te kwantificeren in FLT3-mutante 32D-cellen na blootstelling aan type I en type II FLT3-remmers. Deze methode helpt onderzoekers bij het optimaliseren van therapeutische strategieën voor acute myeloïde leukemie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Swaminathan, M., Wang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+therapies+for+AML%3A+A+round-up+for+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Clin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Novel therapies for AML: A round-up for clinicians.</a> Expert Rev Clin Pharmacol. 13 (12), 1389-1400 (2020).</li>
<li>Daver, N., Schlenk, R. F., Russell, N. H., Levis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+flt3+mutations+in+AML%3A+Review+of+current+knowledge+and+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Targeting flt3 mutations in AML: Review of current knowledge and evidence.</a> Leukemia. 33 (2), 299-312 (2019).</li>
<li>Papaemmanuil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+classification+and+prognosis+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Genomic classification and prognosis in acute myeloid leukemia.</a> N Engl J Med. 374 (23), 2209-2221 (2016).</li>
<li>Mori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+FLT3%2FAXL+inhibitor%2C+shows+antileukemic+activity+in+mouse+models+of+FLT3-mutated+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">a FLT3/AXL inhibitor, shows antileukemic activity in mouse models of FLT3-mutated acute myeloid leukemia.</a> Invest New Drugs. 35 (5), 556-565 (2017).</li>
<li>Papaemmanuil, E., Döhner, H., Campbell, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+classification+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Genomic classification in acute myeloid leukemia.</a> N Engl J Med. 375 (9), 900-901 (2016).</li>
<li>Cortes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quizartinib%3A+A+potent+and+selective+FLT3+inhibitor+for+the+treatment+of+patients+with+FLT3-ITD-positive+AML%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Quizartinib: A potent and selective FLT3 inhibitor for the treatment of patients with FLT3-ITD-positive AML.</a> J Hematol Oncol. 17 (1), 111(2024).</li>
<li>Döhner, H., Wei, A. H., Löwenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+precision+medicine+for+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Towards precision medicine for AML.</a> Nat Rev Clin Oncol. 18 (9), 577-590 (2021).</li>
<li>Kantarjian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia%3A+Current+progress+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+J%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia: Current progress and future directions.</a> Blood Cancer J. 11 (2), 41(2021).</li>
<li>Miyamoto, K., Minami, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge+molecular+therapy+for+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cutting edge molecular therapy for acute myeloid leukemia.</a> Int J Mol Sci. 21 (14), (2020).</li>
<li>Yang, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+therapy+for+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Precision therapy for acute myeloid leukemia.</a> J Hematol Oncol. 11 (1), 3(2018).</li>
<li>Jackson, S. P., Bartek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DNA-damage+response+in+human+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The DNA-damage response in human biology and disease.</a> Nature. 461 (7267), 1071-1078 (2009).</li>
<li>Olive, P. L., Banáth, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comet+assay%3A+A+method+to+measure+DNA+damage+in+individual+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">The comet assay: A method to measure DNA damage in individual cells.</a> Nat Protoc. 1 (1), 23-29 (2006).</li>
<li>Collins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comet+assay+for+DNA+damage+and+repair%3A+Principles%2C+applications%2C+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">The comet assay for DNA damage and repair: Principles, applications, and limitations.</a> Mol Biotechnol. 26 (3), 249-261 (2004).</li>
<li>Azqueta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+recommendations+to+perform+the+alkaline+standard+and+enzyme-modified+comet+assay+in+human+biomonitoring+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat+Res+Genet+Toxicol+Environ+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Technical recommendations to perform the alkaline standard and enzyme-modified comet assay in human biomonitoring studies.</a> Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 843, 24-32 (2019).</li>
<li>Cotelle, S., Férard, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comet+assay+in+genetic+ecotoxicology%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Mol+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Comet assay in genetic ecotoxicology: A review.</a> Environ Mol Mutagen. 34 (4), 246-255 (1999).</li>
<li>Tice, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+gel%2Fcomet+assay%3A+Guidelines+for+in+vitro+and+in+vivo+genetic+toxicology+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Mol+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Single cell gel/comet assay: Guidelines for in vitro and in vivo genetic toxicology testing.</a> Environ Mol Mutagen. 35 (3), 206-221 (2000).</li>
<li>Pu, X., Wang, Z., Klaunig, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alkaline+comet+assay+for+assessing+DNA+damage+in+individual+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Alkaline comet assay for assessing DNA damage in individual cells.</a> Curr Protoc Toxicol. 65, 3.12.11-13.12.11 (2015).</li>
<li>Liu, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+flt3-itd+length+on+prognosis+of+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Impact of flt3-itd length on prognosis of acute myeloid leukemia.</a> Haematologica. 104 (1), e9-e12 (2019).</li>
<li>Wang, Y., Lin, X., Wang, Y., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+adavosertib+and+fimepinostat+on+acute+myeloid+leukemia+cells+by+enhancing+the+induction+of+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of adavosertib and fimepinostat on acute myeloid leukemia cells by enhancing the induction of DNA damage.</a> Invest New Drugs. 42 (1), 70-79 (2024).</li>
<li>Kumar, S., Yedjou, C. G., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+trioxide+induces+oxidative+stress%2C+DNA+damage%2C+and+mitochondrial+pathway+of+apoptosis+in+human+leukemia+%28hl-60%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Arsenic trioxide induces oxidative stress, DNA damage, and mitochondrial pathway of apoptosis in human leukemia (hl-60) cells.</a> J Exp Clin Cancer Res. 33 (1), 42(2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 M EDTA</td><td>Beyotime</td><td>ST066</td><td></td></tr><tr><td>1x YeaRed nucleic acid stain</td><td>Yeasen</td><td>10202ES</td><td></td></tr><tr><td>32D CELL</td><td>Cobioer</td><td>CBP60995</td><td></td></tr><tr><td>AC220</td><td>TargetMol</td><td>T2066</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counting Kit-8</td><td>Dojindo</td><td>CK04</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counting Plate</td><td>QiuJing</td><td>XB-K-25</td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubator</td><td>Thermo</td><td>51032872</td><td></td></tr><tr><td>Comet assay software project (CASP)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CometAssay Kit&nbsp;</td><td>Trevigen</td><td>4250-050-K</td><td></td></tr><tr><td>Cytation 5</td><td>BioTek</td><td>16280004</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>PAN</td><td>ST30-3302</td><td></td></tr><tr><td>Gilteritinib</td><td>TargetMol</td><td>T4409</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 9.0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>high-speed centrifuge</td><td>Thermo</td><td>&nbsp;9AQ2861</td><td></td></tr><tr><td>L-1000XLS+ Pipettes</td><td>Rainin</td><td>17014382</td><td></td></tr><tr><td>L-20XLS+ Pipettes</td><td>Rainin</td><td>17014392</td><td></td></tr><tr><td>liquid nitrogen tank</td><td>Mvecryoge</td><td>YDS-175-216</td><td></td></tr><tr><td>Multiskan FC microplate photometer</td><td>Thermo</td><td>1410101</td><td></td></tr><tr><td>Na2OH</td><td>DAMAO</td><td>1588</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td>P1020</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin Solution, 100x</td><td>Beyotime</td><td>C0222</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Gibco</td><td>C22400500BT</td><td></td></tr><tr><td>Trinocular live cell microscope</td><td>Motic</td><td>1.1001E+12</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-low temperature freezer</td><td>Haire</td><td>V118574</td><td></td></tr></tbody></table>

komeettest om dna-schade te kwantificeren in flt3-cellen die mutant tot expressie brengen van 32d na blootstelling aan type i en type ii flt3-remmers

Comet Assay to Quantify DNA Damage in FLT3 Mutant-expressing 32D Cells after Exposure to Type I and Type II FLT3 Inhibitors

Komeettest om DNA-schade te kwantificeren in FLT3-cellen die mutant tot expressie brengen van 32D na blootstelling aan type I en type II FLT3-remmers

FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3), a class III receptor tyrosine kinase, exhibits a mutation frequency of approximately 30% in acute myeloid leukemia ...

comet-assay-to-quantify-dna-damage-flt3-mutant-expressing-32d-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

The video demonstrates the comet assay for detecting DNA damage following exposure to harmful agents. Under alkaline conditions, the DNA unwinds and denatures, and upon electrophoresis, the undamaged and damaged DNA migrate differently in the agarose gel, forming a comet-shaped structure. The slowly migrating undamaged DNA forms the circular comet head, while the rapidly migrating damaged DNA fragments form the elongated comet tail.

Comet Assay for DNA Damage Detection in Cells

De komeet assay is een efficiënte manier voor het opsporen enkel-en dubbel-breuken, met inbegrip van alkali-labiele sites en DNA-DNA/DNA-protein cross-links op het DNA in alle cellen met inbegrip van hippocampale neuronen. De methode maakt gebruik van de differentiële migratie van DNA in een elektrisch veld als gevolg van verschillen in hoeveelheid DNA schade.

Analyseren DNA schade in hippocampale neuronen Met behulp van de Comet Assay

We beschrijven hier een platform dat comet assay detectie van DNA-schade met ongekende doorvoer toestaat. De inrichting patronen zoogdiercellen in een microarray en maakt parallelle verwerking van 96 monsters. De benadering maakt analyse van basisniveau DNA schade, blootstelling DNA schade en DNA herstel kinetiek.

CometChip: Een High-throughput 96-Well Platform voor het meten van DNA-schade in Microarrayed menselijke cellen

De bepaling van de komeet is een efficiënte methode om op te sporen DNA schade met inbegrip van single- en double-stranded DNA breekt. We beschrijven alkalisch en neutraal komeet testen voor het meten van DNA-beschadiging in kankercellen het therapeutische effect van chemotherapie te beoordelen.

Evaluatie van de In Vitro DNA schade, met behulp van komeet Assay

Dit protocol beschrijft verschillende procedures voor het voorbereiden van hoogwaardige bevroren weefselmonsters op het moment van obductie voor gebruik in de komeettest om DNA-schade te beoordelen: 1) gehakt weefsel, 2) geschraapte epitheelcellen uit het maag-darmkanaal en 3) in blokjes gelopen weefsel monsters, die homogenisatie vereisen met behulp van een weefselhakkende apparaat.

Gebruik van bevroren weefsel in de Komeet Assay voor de evaluatie van DNA-schade

De komeettest is een populair middel om DNA-schade op te sporen. Deze studie beschrijft een benadering van het uitvoeren van dia's in representatieve varianten van de komeettest. Deze aanpak verhoogde het aantal monsters aanzienlijk, terwijl de looptijd van de test, het aantal diamanipulaties en het risico op schade aan gels afnam.

Een high-throughput comet assay-benadering voor het beoordelen van cellulaire DNA-schade

Vertraagde type overgevoeligheid (DTH) is een ontstekingsreactie gemedieerd door CCR7-effector geheugen T-lymfocyten. Hier laten we zien hoe actief DTH induceren in Lewis ratten en toezicht op de ontstekingsreactie.

Inductie en controle van Active Vertraagde overgevoeligheidsreacties (DTH) bij ratten

Regulatoire T-cellen: therapeutisch potentieel voor de behandeling van afstoting van transplantaten en type I diabetes

Vertraagde type overgevoeligheid (DTH) is een ontstekingsreactie gemedieerd door CCR7-effector-geheugen T (TEM) lymfocyten. Hier laten we zien hoe de antigeen-specifieke TEM-cellen te activeren, te induceren adoptie-DTH bij Lewis ratten en toezicht op de ontstekingsreactie.

Inductie en Monitoring van Adoptieve vertraagd-type overgevoeligheid bij ratten

Een gedetailleerd protocol is beschreven voor de beeldvorming van de real-time vorming van DNA-herstel complexen...

Imaging mismatch repair en cellulaire reacties op DNA-schade in Bacillus subtilis</em

Leer de komeettest om DNA-schade te kwantificeren in FLT3-mutante 32D-cellen na blootstelling aan type I en type II FLT3-remmers. Deze methode helpt onderzoekers bij het optimaliseren van therapeutische strategieën voor acute myeloïde leukemie.

Komeettest om DNA-schade te kwantificeren in FLT3-cellen die mutant tot expressie brengen van 32D na blootstelling aan type I en type II FLT3-remmers (Video) | JoVE Journal

Komeettest om DNA-schade te kwantificeren in FLT3-cellen die mutant tot expressie brengen van 32D na blootstelling aan type I en type II FLT3-remmers

Meer video's verkennen