Name: Genereren van hele bacteriële genomen uit klinische monsters met behulp van een workflow voor doelverrijking (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: Leer een doelverrijkingsprotocol voor volledige genoomsequencing van bacteriële SOA uit klinische monsters. Deze methode overwint uitdagingen van humane DNA-vervuiling en lage bacteriële ladingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Lefterova, M. I., Suarez, C. J., Banaei, N., Pinsky, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+sequencing+for+infectious+disease+diagnosis+and+management%3A+a+report+of+the+Association+for+Molecular+Pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Next-generation sequencing for infectious disease diagnosis and management: a report of the Association for Molecular Pathology.</a> J Mol Diagn. 17 (6), 623-634 (2015).</li>
<li>Gwinn, M., Maccannell, D., Armstrong, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next+generation+sequencing+of+infectious+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Next generation sequencing of infectious pathogens.</a> JAMA. 321 (9), 893-894 (2019).</li>
<li>Hasman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+whole-genome+sequencing+for+detection+and+characterization+of+microorganisms+directly+from+clinical+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid whole-genome sequencing for detection and characterization of microorganisms directly from clinical samples.</a> J Clin Microbiol. 52 (1), 139-146 (2014).</li>
<li>Gautam, S., KC, R., Leong, K. W. C., Mac Aogáin, M., O'Toole, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+step-by-step+beginner%27s+protocol+for+whole+genome+sequencing+of+human+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Methods%22%5BJournal%5D)">A step-by-step beginner's protocol for whole genome sequencing of human bacterial pathogens.</a> J Biol Methods. 6 (1), e110(2019).</li>
<li>Baert, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+the+use+of+whole+genome+sequencing+%28WGS%29+for+source+tracking+from+a+food+industry+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Guidance document on the use of whole genome sequencing (WGS) for source tracking from a food industry perspective.</a> Food Control. 130, 108148(2021).</li>
<li>Didelot, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+clinical+microbiology+with+bacterial+genome+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Transforming clinical microbiology with bacterial genome sequencing.</a> Nat Rev Genet. 13 (9), 601-612 (2012).</li>
<li>Scidmore, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+and+laboratory+maintenance+of+Chlamydia+trachomatis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Cultivation and laboratory maintenance of Chlamydia trachomatis.</a> Curr Protoc Microbiol. 11, (2006).</li>
<li>Edmondson, D. G., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cultivation+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro cultivation of the syphilis spirochete Treponema pallidum.</a> Curr Protoc. 1 (2), e44(2021).</li>
<li>Pitt, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+of+in+vitro+propagation+and+antimicrobial+susceptibility+testing+of+Mycoplasma+genitalium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Challenges of in vitro propagation and antimicrobial susceptibility testing of Mycoplasma genitalium.</a> J Antimicrob Chemother. 77 (11), 2901-2907 (2022).</li>
<li>Büttner, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+methods+for+genome+sequencing+of+Chlamydia+trachomatis+and+other+sexually+transmitted+bacteria+directly+from+clinical+swabs%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Genom%22%5BJournal%5D)">Evaluating methods for genome sequencing of Chlamydia trachomatis and other sexually transmitted bacteria directly from clinical swabs.</a> Microb Genom. 11 (2), 001353(2025).</li>
<li>Seth-Smith, H. M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-genome+sequences+of+Chlamydia+trachomatis+directly+from+clinical+samples+without+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Whole-genome sequences of Chlamydia trachomatis directly from clinical samples without culture.</a> Genome Res. 23 (5), 855-866 (2013).</li>
<li>SureSelect XT HS2 DNA kits: library preparation (+/-MBC) / fast-Hyb target enrichment / post-capture pooling workflow for Illumina platform NGS. , Agilent Technologies. 
 <a target="_blank" href="https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/public/G9983-90000.pdf">https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/public/G9983-90000.pdf</a> (2023).</li>
<li>Büttner, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlamydia+trachomatis+genomes+from+rectal+samples%3A+description+of+a+new+clade+comprising+ompA-genotype+L4+from+Argentina%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Genom%22%5BJournal%5D)">Chlamydia trachomatis genomes from rectal samples: description of a new clade comprising ompA-genotype L4 from Argentina.</a> Microb Genom. 11 (2), 001350(2025).</li>
<li>Brown, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Norovirus+whole-genome+sequencing+by+SureSelect+target+enrichment%3A+a+robust+and+sensitive+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Norovirus whole-genome sequencing by SureSelect target enrichment: a robust and sensitive method.</a> J Clin Microbiol. 54 (10), 2530-2537 (2016).</li>
<li>Dao, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+SureSelect+target+enrichment+system+for+next-generation+sequencing+to+obtain+the+complete+genome+sequence+of+bovine+leukemia+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Virol%22%5BJournal%5D)">Application of the SureSelect target enrichment system for next-generation sequencing to obtain the complete genome sequence of bovine leukemia virus.</a> Arch Virol. 163 (11), 3155-3159 (2018).</li>
<li>Cai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SureSelect+targeted+enrichment%2C+a+new+cost+effective+method+for+the+whole+genome+sequencing+of+Candidatus+Liberibacterasiaticus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">SureSelect targeted enrichment, a new cost effective method for the whole genome sequencing of Candidatus Liberibacterasiaticus.</a> Sci Rep. 9 (1), 1-8 (2019).</li>
<li>Büttner, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ompA+sequencing+and+multilocus+sequence+typing+of+lymphogranuloma+venereum+cases+in+Buenos+Aires+reveal+new+Chlamydia+trachomatis+genotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">ompA sequencing and multilocus sequence typing of lymphogranuloma venereum cases in Buenos Aires reveal new Chlamydia trachomatis genotypes.</a> Microorganisms. 12 (3), 587(2024).</li>
<li>La Rosa, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlamydia+trachomatis+anorectal+infections+by+LGV+%28L1%2C+L2+and+L2b%29+and+non-LGV+serotypes+in+symptomatic+patients+in+Buenos+Aires+Argentina%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+STD+AIDS%22%5BJournal%5D)">Chlamydia trachomatis anorectal infections by LGV (L1, L2 and L2b) and non-LGV serotypes in symptomatic patients in Buenos Aires Argentina.</a> Int J STD AIDS. 32 (14), 1270-1278 (2021).</li>
<li>Rodríguez Fermepin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+L2b+in+rectal+lymphogranuloma+venereum%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">More than L2b in rectal lymphogranuloma venereum.</a> Lancet Microbe. 2 (2), e55(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>8-kanaals pipet 0,5-10 &micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000010</td><td>Eppendorf Research&nbsp;plus, 8-kanaals, 0,5-10 &micro;L, middelgrijs, variabel volume.</td></tr><tr><td>8-kanaals pipet 10-100 &micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000036</td><td>Eppendorf Research&nbsp;plus, 8-kanaals, 10-100 &micro;L, geel, variabel volume.</td></tr><tr><td>Adapter Oligo Mix voor MBC-gelabelde bibliotheken</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>Geautomatiseerd nucleïnezuurextractiesysteem met behulp van een DNA-extractiekit voor virussen/pathogenen</td><td>Qiagen</td><td>937036 (kit) / 9001297 (instrument)</td><td>QIAsymphony SP/AS-instrument gebruikt met QIAamp DSP Virus/Pathogen Kit voor geautomatiseerde DNA-extractie.</td></tr><tr><td>Binding Buffer</td><td>Agilent Technologies</td><td>5190-9687</td><td>Onderdeel van SureSelect Target Enrichment Kit ILM Hyb Module Box 1 (Post PCR).</td></tr><tr><td>DNA-extractiekit en geautomatiseerd instrument</td><td>Zymo Research Corporation</td><td>D3024/D3025</td><td>Quick-DNA Miniprep Kit gebruikt voor totale DNA-extractie uit klinische monsters. Handmatige of geautomatiseerde workflow compatibel.</td></tr><tr><td>End Repair- A Tailing Enzym Mix</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>End Repair Tailing Buffer</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>VWR Chemicals BDH</td><td>20816.298</td><td>Ethanol absoluut &ge;99,5% Ph. Eur., USP</td></tr><tr><td>Fluorometer met hoge gevoeligheid dsDNA Assay / Fluorescerende methode voor het kwantificeren van DNA</td><td>Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td><td>Q33238, Q33231</td><td>Qubit 4 Fluorometer met 1X dsDNA High Sensitivity (HS) Assay Kit.</td></tr><tr><td>Fragmentatie Buffer</td><td>Agilent Technologies</td><td>5191-4080</td><td>Onderdeel van SureSelect Enzymetic Fragmentation Kit met de naam ''5X Fragmentatie Buffer''.</td></tr><tr><td>Fragmentatie Enzym</td><td>Agilent Technologies</td><td>5191-4080</td><td>Onderdeel van SureSelect Enzymetic Fragmentation Kit.</td></tr><tr><td>High-fidelity DNA polymerase buffer</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR) met de naam ''Herculase II Buffer''.</td></tr><tr><td>High-fidelity DNA polymerase buffer met dNTPs (5X)</td><td>Agilent Technologies</td><td>5190-9687</td><td>Onderdeel van SureSelect Target Enrichment Kit ILM Hyb Module Box 1 (Post PCR) met de naam ''Herculase II Buffer''.</td></tr><tr><td>High-fidelity fusie-enzym voor PCR-amplificatie</td><td>Agilent Technologies</td><td>5191-5688</td><td>Onderdeel van SureSelect Target Enrichment Kit ILM Hyb Module Box 1 (Post PCR) met de naam ''Herculase II''.</td></tr><tr><td>Hoge temperatuur wasbuffer</td><td>Agilent Technologies</td><td>5190-9687</td><td>Onderdeel van SureSelect Target Enrichment Kit ILM Hyb Module Box 1 (Post PCR) met de naam ''Wash buffer 2''.</td></tr><tr><td>Hybridisatie Buffer&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>Gendiceerde sequencing primers</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Index Primer Pairs 1-96 voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>In-house multiplex real-time PCR-test</td><td>Tib Molbiol</td><td>N/A</td><td>In-house ontwikkelde en geaccrediteerde test op basis van Lightmix Kits voor STI-detectie</td></tr><tr><td>Ligatie Buffer</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>Magneetkralen voor opruiming</td><td>Agilent Technologies</td><td>5191-5740</td><td>SureSelect DNA AMPure XP Beads.</td></tr><tr><td>Magneetstandaard</td><td>Permagen Labware</td><td>MSRLV08</td><td>0,2mL PCR 8 Strip Magnetic Separator 5 &micro;L ~0,2mL Volume.</td></tr><tr><td>Next-generation sequencing (NGS): Hoogdoorvoersysteem voor korte leeslengtes&nbsp;</td><td>Illumina, Inc.</td><td>N/A</td><td>Paired-end 150 bp sequencing (PE150) uitgevoerd op Illumina NextSeq1000 en MiSeq-platforms.</td></tr><tr><td>Nuclease-vrij water</td><td>BioConcept</td><td>3-07F04-H</td><td>Water voor moleculaire biologie, DNA/DNAse/RNase-vrij, steriel, PCR-remmer-vrij.</td></tr><tr><td>Oligonucleotide Blocker Mix&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>PCR-buisjesstrook</td><td>avantor, geleverd door VWR&nbsp;&nbsp;</td><td>732-3608</td><td>PCR-buisjesstroken met aangehechte Flat Caps.</td></tr><tr><td>Post-Capture Primer Mix</td><td>Agilent Technologies</td><td>5190-9687</td><td>Onderdeel van SureSelect Target Enrichment Kit ILM Hyb Module Box 1 (Post PCR).</td></tr><tr><td>RNA-sonde</td><td>Agilent Technologies</td><td>5191-6916&nbsp;</td><td>SureSelect Custom Tier4 6Mb-11.9Mb Probe, bijv. Design ID S3465164).</td></tr><tr><td>RNase Blocker</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>Wasbuffer op kamertemperatuur</td><td>Agilent Technologies</td><td>5190-9687</td><td>SureSelect Target Enrichment Kit ILM Hyb Module Box 1 (Post PCR) met de naam ''Wash buffer 1''.</td></tr><tr><td>Streptavidinekralen</td><td>Agilent Technologies</td><td>5191-5742</td><td>SureSelect Streptavidin Beads.</td></tr><tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>Agilent Technologies</td><td>5500-0147</td><td>Onderdeel van SureSelect XT HS2 Library Preparation Kit voor ILM (Pre PCR).</td></tr><tr><td>Doelverrijkingsmethode / DNA-vangstmethode</td><td>Agilent Technologies</td><td>G9983-90000</td><td>SureSelect XT HS2 DNA Kit met Library Prep, Fast-Hyb Target Enrichment en Post-capture

genereren van hele bacteriële genomen uit klinische monsters met behulp van een workflow voor doelverrijking

Generating Whole Bacterial Genomes from Clinical Samples using a Target Enrichment Workflow

Genereren van hele bacteriële genomen uit klinische monsters met behulp van een workflow voor doelverrijking

Obtaining complete genomes of bacterial sexually transmitted infections (STIs) directly from clinical samples is challenging due to the presence of human ...

generating-whole-bacterial-genomes-from-clinical-samples-using-target

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

We beschrijven een methode om genetische analyse in Chlamydia op basis van chemische mutagenese en hele genoom sequencing uitvoeren. Bovendien wordt een systeem voor het uitwisselen van DNA in geïnfecteerde cellen beschreven die kunnen worden gebruikt voor genetische mapping. Deze methode kan breed toepasbaar microbiële systemen ontbreekt transformatiesystemen en moleculair genetische hulpmiddelen.

Forward Genetische technieken in<em&gt; Chlamydia trachomatis</em

gDNA-verrijking voor NGS-sequencing is een eenvoudig en krachtig hulpmiddel voor de studie van constitutionele mutaties. In dit artikel presenteren we de procedure om eenvoudig de volledige sequentie van 11 genen te analyseren die betrokken zijn bij DNA-schadeherstel.

gDNA Verrijking door een-Transposase gebaseerde technologie voor NGS analyse van de hele reeks van BRCA1, BRCA2, En 9 genen betrokken bij DNA-schade te herstellen

Er wordt een geïntegreerd systeem beschreven voor gerichte next-generation sequencing van oncologische monsters. Dit cross-platform systeem is geoptimaliseerd voor tumorbiopsies van lage kwaliteit en lage hoeveelheid, past zich aan lage DNA-inputs aan, omvat goed gekarakteriseerde multi-variant controles en beschikt over een nieuwe variant caller die wordt geïnformeerd door kwantitatieve pre-analytische kwaliteitscontrolemaatregelen.

Integratie van Nat en droog Bench Processen Optimaliseert Gerichte next-generation sequencing van lage kwaliteit en lage hoeveelheid tumorbiopten

We beschrijven een efficiente en rendabele methode voor het extraheren van nucleïnezuur uit uitstrijkjes ter karakterisering van bacteriële 16S rRNA gen gebruiken amplicon sequencing. De methode maakt het mogelijk voor een gemeenschappelijke aanpak voor de verwerking van meerdere soorten monster en herbergt een aantal downstream-analytische processen.

Efficiënte Nucleic Acid Extraction en 16S rRNA Gene Sequencing voor Bacteriële Gemeenschap karakterisering

Hier presenteren we een protocol om het gehele genoom DNA-methylatie in grootschalige klinische patiënt screening studies met behulp van de Methyl-bindende DNA Capture sequencing (MBDCap-seq of MBD-volgende) technologie en de daaropvolgende bioinformatica analyse pijplijn te onderzoeken.

-Methyl-bindende DNA capture Sequencing for Patient Tissues

Dit protocol is te herstellen en zeldzame doelcellen een mengsel met de doelsoort achtergrond cellen voorbereiden moleculaire genetische karakterisering op het niveau van één cel. DNA kwaliteit is gelijk aan niet-behandelde afzonderlijke cellen en zorgt voor eencellige toepassing (beide screening gebaseerd en gerichte analyse).

Target cel pre verrijking en hele genoom versterking voor eencellige Downstream karakterisering

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerde gestandaardiseerde protocol voor high-throughput 16S rRNA-amplicon sequencing. Het protocol introduceert een protocol van het geïntegreerde, geüniformeerde haalbaar en goedkoop vanaf fecale sample collectie door middel van data-analyses. Dit protocol maakt analyse van grote aantallen monsters met strenge normen en diverse besturingselementen.

Begeleide Protocol voor fecale microbiële karakterisering door 16S rRNA-Amplicon Sequencing

Dit protocol beschrijft een alomvattende aanpak voor het kweken, sequentiëren en de novo hybride genoomassemblage van urinebacteriën. Het biedt een reproduceerbare procedure voor het genereren van volledige, circulaire genoomsequenties die nuttig zijn bij het bestuderen van zowel chromosomale als extrachromosomale genetische elementen die bijdragen aan urinaire kolonisatie, pathogenese en verspreiding van antimicrobiële resistentie.

Hybride de novo genoomassemblage voor het genereren van complete genomen van urinebacteriën met behulp van short- en long-read sequencing-technologieën

De haalbaarheid van whole-genome sequencing (WGS) strategieën met behulp van benchtop instrumenten heeft de genoomondervraging van elke microbe van volksgezondheidsrelevantie in een laboratoriumomgeving vereenvoudigd. Een methodologische aanpassing van de workflow voor bacteriële WGS wordt beschreven en een bioinformatica pijplijn voor analyse wordt ook gepresenteerd.

Karakterisering van een pathogene Escherichia coli-stam afgeleid van Oreochromis spp. Boerderijen met behulp van whole-genome sequencing

Klinische metaproteomics biedt inzicht in het menselijk microbioom en zijn bijdragen aan ziekten. We hebben de rekenkracht van het Galaxy-platform benut om een modulaire bio-informaticaworkflow te ontwikkelen die complexe, op massaspectrometrie gebaseerde metaproteomische analyse en karakterisering mogelijk maakt van diverse klinische monstertypen die relevant zijn voor ziektestudies.

Een klinische metaproteomics-workflow geïmplementeerd binnen het Galaxy Bioinformatics-platform om gastheer-microbioominteracties te analyseren die ten grondslag liggen aan ziekten bij de mens

De huidige studie beschrijft een workflow voor nanoporesequencing van plasmiden wanneer de chromosomale sequentie al bekend is of niet van belang is. Een initiële plasmide-DNA-verrijkingsstap zorgt voor een optimale plasmidesequentiediepte en maximaliseert het aantal monsters dat per flowcel kan worden gesequenced.

Long-read plasmidvolgordebepaling en assemblage met behulp van op nanopore sequencing gebaseerde workflows

Leer een doelverrijkingsprotocol voor volledige genoomsequencing van bacteriële SOA uit klinische monsters. Deze methode overwint uitdagingen van humane DNA-vervuiling en lage bacteriële ladingen.

Genereren van hele bacteriële genomen uit klinische monsters met behulp van een workflow voor doelverrijking

Meer video's verkennen