Murine bilaterale nierlymfadenectomie

We bestuderen de overdracht van immuuncellen van de nierlymfeklier naar de nier en van nierantigeen naar de drainerende lymfeklier. Onze chirurgische aanpak biedt het unieke voordeel dat we de nierlymfeklieren selectief kunnen verstoren terwijl we alle andere lymfeklieren intact laten in een goed verdragen langetermijnoverlevingsmodel. Nu dit model is ontwikkeld, kunnen we de bijdragen van nierlymfeklier en immuunresponsen onderzoeken en hoe het verwijderen van deze klieren bijdraagt aan immuungerelateerde nierschade.

Begin met het verdoofde dier op de operatietafel en breng zalf aan. Gebruik tape om de linkerarm van het dier in een hogere richting te bevestigen en de staart in een lagere richting om een ontspannen maar verlengde houding te creëren. Scheer de vacht en desinfecteer het operatiegebied drie keer.

Na het bevestigen van de diepte van de anesthesie met een klap in de teen, maak je een schuine incisie van één centimeter door de huid net onder de milt, ongeveer één centimeter onder de laatste rib. Met een stomp dissectie scheid je de huid van de buik- en borstwand en identificeer je de milt in de buik. Maak vervolgens een incisie van één centimeter door de buikwandspieren net onder de milt om de peritoneale holte binnen te gaan.

Identificeer de linkernier als een glad orgaan langs de achterste buikwand net onder de milt. Met twee schuine tangen ontleed je stomp achter de linker nier om toegang te krijgen tot het retroperitoneum en reflecteer je de linkernier zachtjes in een anteromediale richting. Lokaliseer het vetweefselkussen rondom de linker nierlymfeklier, die zich achter de nier bevindt en boven de niervaten.

Identificeer en vermijd de bijnier die zich superior bevindt, de aorta achteraan en de cisterna chyli anteromediaal. Met fijne pincetten dissectie je bot rond de lymfekliercapsule om deze van aangrenzende vaten te scheiden en zachte tegenspanning te bieden met een hoekige pincet. Gebruik een fijnpuntige rechte tang om de lymfeklier bovenaan terug te trekken.

Gebruik vervolgens een fijnpuntschaar om de posteromedische bevestigingen scherp door te snijden. Onderzoek het gebied om hemostase te bevestigen. Vervolgens brengt u de nier terug in zijn normale anatomische positie.

Sluit de buikwand en vervolgens de huid met 6-0 monofilament polypropyleen in een lopende steek. Breng steriele chirurgische lijm aan om de wond te dichten. Optioneel, voor een betere identificatie van de nierlymfeklieren, injecteer 10 tot 20 microliter steriele, gefilterde 5%Evans blue kleurstof in PBS in beide achtervoetpads vóór de nierlymfadenectomie.

Binnen vijf minuten na injectie bereikt de kleurstof de nierlymfeklieren via drainage langs het iliacale lymfestelsel. Plaats het dier opnieuw in de linker laterale decubituspositie met de linkerzijde naar beneden. Gebruik tape om de rechterarm van het dier in een hogere richting vast te zetten en de staart in een lagere richting om een ontspannen maar verlengde houding te behouden.

Maak nu een schuine incisie van één centimeter net onder de laatste rib, die iets hoger dan aan de linkerkant wordt geplaatst. Met een stomp dissectie scheid je de huid van de buik- en borstwand. Maak vervolgens een incisie van één centimeter door de buikwandspieren om toegang te krijgen tot de buikholte.

Identificeer de rechternier, een glad orgaan langs de achterste buikwand en net onder de lever. Met twee schuine tangen dissectie je bot achter de rechternier om toegang te krijgen tot de retroperitoneale ruimte en de rechternier in anteromediale richting te reflecteren. Identificeer het vetweefselpad rondom de rechter nierlymfeklier, die zich achter de nier bevindt en boven de niervaten ligt.

Identificeer en vermijd de bijnier die zich boven de lymfeklier bevindt. Met fijne pincetten dissectie je nu bot rond de capsule van de lymfeklier om deze van nabijgelegen vaten te scheiden terwijl je zachte tegenbeweging toepast met een schuine pincett. Trek vervolgens met een fijnpuntige rechte tang de lymfeklieren bovenaan en snijd scherp de posteromedische aanhechtingen met een fijnpuntschaar.

Inspecteer het gebied om hemostase te waarborgen. Zet tenslotte de rechternier terug in zijn anatomische positie. Sluit de buikwand en huid in twee lagen met 6-0 monofilament polypropyleenhechting in een lopend patroon en breng steriele chirurgische lijm aan op de incisieplaats.

Flowcytometrie bevestigde succesvolle lymfeklierextractie in alle vijf monsters van linker en vijf rechter renale lymfadenectomie, elk met meer dan 50% CD45-positieve levende cellen, vergeleken met minder dan 2% bij controles van viscerale vetstoffen. Kwantificering van CD45-positieve cellen toonde een zeer significant verschil tussen zowel linker- als rechter nierlymfadenectomiemonsters vergeleken met visceraal vetweefsel, zonder significant verschil tussen de linker- en rechterzijde.