Vergelijkende studie van het gehalte aan polysachariden en de antioxiderende werking van Hippophae rhamnoides subsp. sinensis en Hippophae gyantsensis

Deze studie vergelijkt het gehalte aan polysachariden en de antioxiderende werking tussen Hippophae rhamnoides sub. sinensis en de Hippophae gyantsensis om hun verschillen op te helderen. De studie is methodologisch verantwoord en pakt een lacune in de literatuur aan met betrekking tot soortspecifieke verschillen in polysacharidekenmerken.

De bevindingen van deze studie zijn belangrijk voor de kwaliteitsbeoordeling en de mogelijke farmaceutische toepassingen. Breng om te beginnen vijf gram duindoornmonsterpoeder over in een kolf met ronde bodem van 250 milliliter. Voeg vervolgens 50 milliliter watervrije ethanol toe en laat het 24 uur weken bij kamertemperatuur van 25 graden Celsius.

Filtreer het geweekte monsterpoeder de volgende dag met behulp van een Buchner-trechter om het filterresidu te verkrijgen. Was de filterresten driemaal met 50 milliliter gedeïoniseerd water. Breng nu het ontvette filterresidu over in een gedroogde kolf met ronde bodem van 250 milliliter.

Voeg 150 milliliter gedeïoniseerd water toe in een vaste tot vloeibare verhouding van één tot 30 gram per milliliter. Voer twee keer twee uur lang refluxextractie uit in een waterbad van 80 graden Celsius. Concentreer het extract vervolgens met behulp van een roterende verdamper.

Bewaar de geconcentreerde oplossing in de koelkast bij vier graden Celsius voor later gebruik. Voeg vervolgens het Sevag-reagens toe aan de ruwe polysacharide-oplossing in een volumeverhouding van één tot vier en plaats het op een magnetische roerder. Breng het mengsel vervolgens over in een centrifugebuis van 50 milliliter.

Centrifugeer de suspensie bij 4.000 g gedurende 15 minuten en vang het bovenstaande op. Om het polysacharide-extract na verwijdering van het eiwit te concentreren, voegt u watervrije ethanol toe in een volumeverhouding van één tot drie om polysacchariden neer te slaan. Zet het mengsel een nacht op vier graden Celsius.

Verwijder de volgende dag de bovenste laag ethanol. Breng het mengsel over in een centrifugebuis van 50 milliliter en centrifugeer zoals eerder. Vriesdroog het neerslag om totale polysachariden te verkrijgen.

Breng drie gram fenol over in een bruine maatkolf. Voeg 50 milliliter gedeïoniseerd water toe om het fenol op te lossen. Schud tot een homogene massa, etiketteer en bewaar de kolf voor later gebruik.

Breng vervolgens 10 milligram watervrije glucose over in een maatkolf van 10 milliliter. Voeg gedeïoniseerd water toe en schud het mengsel grondig. Etiketteer vervolgens de kolf.

Weeg voor de bereiding van de oplossing van het analysemonster vijf milligram gevriesdroogde duindoornpolysachariden af in maatkolven. Voeg gedeïoniseerd water toe om elk tot een eindvolume van 50 milliliter te brengen. Sonificeer elk mengsel gedurende 20 minuten tot het volledig is opgelost.

Verdun de standaard glucoseoplossing met gedeïoniseerd water tot 0,1 milligram per milliliter. Breng vervolgens met behulp van een micropipet 200, 300, 400, 500, 600 en 700 microliter over in zes schone reageerbuisjes. Voeg zuiver water toe om elk tot een totaal volume van één milliliter te brengen en meng elke oplossing voorzichtig om een gelijkmatige verdunning te garanderen.

Voeg een milliliter 6% fenoloplossing en vijf milliliter zwavelzuur toe aan elke reageerbuis en meng goed. Breng de monsters over in cuvetten. Gebruik zuiver water als blanco en meet de absorptie bij 490 nanometer met een UV-zichtbare spectrofotometer in drie replicaten.

Bereid voor de precisietest de testoplossing voor. Voer fenol-zwavelzuurcolorimetrie uit. Bepaal de extinctie en herhaal zes keer om de relatieve standaarddeviatie te berekenen.

Bereid voor de stabiliteitstest de testoplossing voor. Voer colorimetrie uit op nul, twee, vier, zes, acht en 10 uur na de voorbereiding. Bepaal de extinctie op de bovengenoemde tijdstippen om de relatieve standaarddeviatie te berekenen.

Bereid voor de herhaalbaarheidstest zes parallelle replicaten van het monster voor. Voer fenol-zwavelzuurcolorimetrie uit en bepaal de absorptie volgens de vastgestelde procedure. Om de hersteltest uit te voeren, bereidt u negen parallelle replicaten van de testoplossing voor.

Voeg referentievolumes toe die overeenkomen met 80, 100 en 120% van het totale polysacharidegehalte. Voer vervolgens fenol-zwavelzuur colorimetrie uit. Bereid de monsteroplossing voor voor het bepalen van de inhoud.

Voer fenol-zwavelzuurcolorimetrie uit volgens de vastgestelde methode. Bepaal vervolgens de absorptie. Weeg 2,7 milligram DPPH af in een lege maatkolf van 50 milliliter.

Voeg 50 milliliter watervrije ethanol toe om de DPPH op te lossen en bereid een stockoplossing. Los vervolgens vijf milligram vitamine C op in 10 milliliter gedeïoniseerd water om een oplossing van 0,5 milligram per milliliter te bereiden. Verdun deze oplossing achtereenvolgens om vitamine C-testoplossingen te bereiden.

Los nu vijf milligram van elk duindoornpolysacharidemonster op in 10 milliliter gedeïoniseerd water om een oplossing van 0,5 milligram per milliliter te bereiden. Verdun deze oplossingen achtereenvolgens om testconcentraties te verkrijgen. Gebruik de DPPH-oplossing als substraat en bereid de testgroepen voor op een plaat met 96 putjes.

Voeg 150 microliter water en 50 microliter DPPH toe voor de negatieve controlegroep, A0. Voeg 150 microliter van het monster of vitamine C-oplossing en 50 microliter DPPH toe voor de monstergroep A1. Voeg voor monstercontrolegroep A2 150 microliter monster en 50 microliter watervrije ethanol toe. Laat de reactie 30 minuten in het donker doorgaan. Meet vervolgens de absorptie bij 517 nanometer.

De standaardcurve van glucose vertoonde een sterke lineaire relatie tussen absorptie en concentratie in het bereik van 0,02 tot 0,07 milligram per milliliter. De gemiddelde polysacharidenopbrengst van Hippophae gyantsensis was significant hoger dan die van Hippophae rhamnoides subspecies sinensis. De precisietest toonde een minimale variatie in extinctie over zes metingen en een RSD van 0,21%, wat wijst op een hoge instrumentprecisie.

Uit de stabiliteitstest bleek dat de extinctiewaarden gedurende een periode van 10 uur constant bleven, waarbij de RSD-waarde van 0,45% de stabiliteit van de monsteroplossing bevestigt. De herhaalbaarheidstest produceerde consistente absorptiewaarden over zes replicaten met een RSD van 0,5%, wat de herhaalbaarheid van de methode valideerde. Het herstelexperiment voor het glucosegehalte leverde een gemiddeld herstelpercentage van 99,18% op, wat de nauwkeurigheid van de methode bevestigt.

Het gemiddelde polysacharidegehalte van Hippophae rhamnoides subspecies sinensis was significant hoger dan dat van Hippophae gyantsensis. Hippophae gyantsensis vertoonde een iets hogere antioxidantactiviteit dan Hippophae rhamnoides subspecies sinensis bij alle geteste concentraties. Bij 0,5 milligram per milliliter bereikte de DPPH-klaringssnelheid van Hippophae gyantsensis 81,93%, terwijl Hippophae rhamnoides subspecies sinensis 75,17% bereikte