Name: Vaststelling en kwantificering van de novo lytische infectie door celvrij Kaposis sarcoom-geassocieerd herpesvirus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Leer hoe je een robuust in vitro platform opzet voor KSHV de novo lytische infectie met HCT116-cellen. Deze methode maakt reproduceerbaar onderzoek naar vroege herpesvirusreplicatie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mesri, E. A., Cesarman, E., Boshoff, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma+herpesvirus%2Fhuman+herpesvirus-8+%28KSHV%2FHHV8%29%2C+and+the+oncogenesis+of+Kaposi%27s+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma herpesvirus/human herpesvirus-8 (KSHV/HHV8), and the oncogenesis of Kaposi's sarcoma.</a> Nat Rev Cancer. 10 (10), 707(2010).</li>
<li>Cesarman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gammaherpesvirus+and+lymphoproliferative+disorders+in+immunocompromised+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Gammaherpesvirus and lymphoproliferative disorders in immunocompromised patients.</a> Cancer Lett. 305 (2), 163-174 (2011).</li>
<li>Golas, G., Alonso, J. D., Toth, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+de+novo+lytic+infection+of+dermal+lymphatic+microvascular+endothelial+cells+by+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Characterization of de novo lytic infection of dermal lymphatic microvascular endothelial cells by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> Virology. 536, 27-31 (2019).</li>
<li>Dittmer, D. P., Damania, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi+sarcoma-associated+herpesvirus%3A+immunobiology%2C+oncogenesis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Kaposi sarcoma-associated herpesvirus: immunobiology, oncogenesis, and therapy.</a> J Clin Invest. 126 (9), 3165-3175 (2016).</li>
<li>Chang, H. H., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+herpesviral+transcriptional+program+in+KSHV-infected+lymphatic+endothelial+cells+leads+to+mTORC1+activation+and+rapamycin+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">A unique herpesviral transcriptional program in KSHV-infected lymphatic endothelial cells leads to mTORC1 activation and rapamycin sensitivity.</a> Cell Host Microbe. 13 (4), 429-440 (2013).</li>
<li>Brulois, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+manipulation+of+a+new+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+bacterial+artificial+chromosome+clone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Construction and manipulation of a new Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus bacterial artificial chromosome clone.</a> J Virol. 86 (18), 9708-9720 (2012).</li>
<li>Myoung, J., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+doxycycline-inducible+KSHV+producer+cell+line+of+endothelial+origin%3A+Maintenance+of+tight+latency+with+efficient+reactivation+upon+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of a doxycycline-inducible KSHV producer cell line of endothelial origin: Maintenance of tight latency with efficient reactivation upon induction.</a> J Virol Methods. 174 (1-2), 12-21 (2011).</li>
<li>Grundhoff, A., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inefficient+establishment+of+KSHV+latency+suggests+an+additional+role+for+continued+lytic+replication+in+Kaposi+sarcoma+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Inefficient establishment of KSHV latency suggests an additional role for continued lytic replication in Kaposi sarcoma pathogenesis.</a> J Clin Invest. 113 (1), 124-136 (2004).</li>
<li>Gao, S. J., Deng, J. H., Zhou, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Productive+lytic+replication+of+a+recombinant+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+in+efficient+primary+infection+of+primary+human+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Productive lytic replication of a recombinant Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus in efficient primary infection of primary human endothelial cells.</a> J Virol. 77 (18), 9738-9749 (2003).</li>
<li>Atyeo, N., Chae, M. Y., Toth, Z., Sharma, A., Papp, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+immediate+early+proteins+trigger+FOXQ1+expression+in+oral+epithelial+cells%2C+engaging+in+a+novel+lytic+cycle-sustaining+positive+feedback+loop%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus immediate early proteins trigger FOXQ1 expression in oral epithelial cells, engaging in a novel lytic cycle-sustaining positive feedback loop.</a> J Virol. 97 (3), e0169622(2023).</li>
<li>Lagunoff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+infection+and+serial+transmission+of+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+in+cultured+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">De novo infection and serial transmission of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus in cultured endothelial cells.</a> J Virol. 76 (5), 2440-2448 (2002).</li>
<li>ViejoBorbolla, A., Schulz, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+and+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus and innate immunity.</a> J Gen Virol. 98 (2), 271-284 (2017).</li>
<li>Chandran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+events+in+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+infection+of+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Early events in Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection of target cells.</a> J Virol. 84 (5), 2188-2199 (2010).</li>
<li>Zhu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+induces+mitochondrial+fission+to+evade+host+immune+responses+and+promote+viral+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus induces mitochondrial fission to evade host immune responses and promote viral production.</a> Nat Microbiol. 10 (6), 1501-1520 (2025).</li>
<li>Lee, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+and+HIF-1alpha+promote+lytic+de+novo+KSHV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia and HIF-1alpha promote lytic de novo KSHV infection.</a> J Virol. 97 (11), e0097223(2023).</li>
<li>White, I. E., Campbell, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+cell-free+and+cell-associated+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+DNA+by+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Quantitation of cell-free and cell-associated Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus DNA by real-time PCR.</a> J Clin Microbiol. 38 (5), 1992-1995 (2000).</li>
<li>Bechtel, J., Grundhoff, A., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAs+in+the+virion+of+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">RNAs in the virion of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 79 (16), 10138-10146 (2005).</li>
<li>Lin, X., Li, X., Liang, D., Lan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs+and+unusual+small+RNAs+discovered+in+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+virions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs and unusual small RNAs discovered in Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus virions.</a> J Virol. 86 (23), 12717-12730 (2012).</li>
<li>Watzinger, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+quantitative+PCR+assays+for+detection+and+monitoring+of+pathogenic+human+viruses+in+immunosuppressed+pediatric+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Real-time quantitative PCR assays for detection and monitoring of pathogenic human viruses in immunosuppressed pediatric patients.</a> J Clin Microbiol. 42 (11), 5189-5198 (2004).</li>
<li>Cho, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+activity+of+angelicin+against+gammaherpesviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Res%22%5BJournal%5D)">Antiviral activity of angelicin against gammaherpesviruses.</a> Antiviral Res. 100 (1), 75-83 (2013).</li>
<li>Coen, N., Duraffour, S., Snoeck, R., Andrei, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KSHV+targeted+therapy%3A+An+update+on+inhibitors+of+viral+lytic+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">KSHV targeted therapy: An update on inhibitors of viral lytic replication.</a> Viruses. 6 (11), 4731-4759 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 &micro;m polyethersulfome (PES) filter&nbsp;</td><td>VWR</td><td>76479-020</td><td></td></tr><tr><td>Biorender</td><td>Biorender</td><td>N/A</td><td>Grafisch ontwerp werd gemaakt met BioRender.com, waarvoor de auteurs een licentie hebben</td></tr><tr><td>CFX Opus 96 Real-time PCR System</td><td>Bio-Rad</td><td>184-5072</td><td></td></tr><tr><td>Complete DMEM</td><td></td><td></td><td>Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM; Sigma-Aldrich) aangevuld met 10%(v/v) foetaal bovien serum (FBS; Gibco), 2 mM L-glutamine (Gibco), en 100U/ml penicilline-streptomycine (Pen-Strep; GenClone).</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>New England Biolabs</td><td>M0303S</td><td></td></tr><tr><td>doxycycline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9891</td><td></td></tr><tr><td>LSR II 18 flow cytometer</td><td>BD Bioscience</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa SYBR Green Master SuperMix</td><td>Quantabio</td><td>95054-02K</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>56304</td><td></td></tr><tr><td>sodium butyrate (NaB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5887</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0</td><td>Thermo Fisher</td><td>15575020</td><td></td></tr></tbody></table>

vaststelling en kwantificering van de novo lytische infectie door celvrij kaposi's sarcoom-geassocieerd herpesvirus

Establishment and Quantification of De Novo Lytic Infection by Cell-free Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus

Vaststelling en kwantificering van de novo lytische infectie door celvrij Kaposi's sarcoom-geassocieerd herpesvirus

Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV), a gammaherpesvirus implicated in multiple human malignancies, can undergo lytic replication during primary ...

establishment-quantification-de-novo-lytic-infection-cell-free-kaposi

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Gastheercel factoren spelen een cruciale rol in het opzetten en onderhouden van Kaposi-sarcoom (KS). Schetsen we methoden om de gastheercel factoren veranderd bij KSHV-geïnfecteerde cellen te identificeren DMVEC, en in de KS tumorweefsel. Cellulaire genen veranderd door virus zal dienen als potentieel doelwit (s) voor nieuwe therapieën.

Het identificeren van ontregelde genen geïnduceerd door Kaposi-sarcoom-geassocieerde herpesvirus (KSHV)

We beschrijven een protocol om de belangrijkste taken van gastheer signaalmoleculen in lytische replicatie van een model herpesvirus, gamma herpesvirus 68 (γHV68) te identificeren. Gebruik te maken van genetisch gemodificeerde muizenstammen en embryonale fibroblasten voor γHV68 lytische replicatie, het protocol maakt het mogelijk zowel de fenotypische karakterisatie en moleculaire ondervraging van virus-gastheer interacties in virale lytische replicatie.

Opheldering van Host-virus interactie in Lytische Replicatie van een Model Herpesvirus

γ-herpesvirussen (γ-HVS) het vaststellen van een leven lang persistentie in hun gastheer. Infectie van muizen met γ-HV68 biedt een genetisch...

Meting van γHV68 infectie in Muizen

Werkwijze voor het observeren individuele DNA-moleculen in levende cellen beschreven. De techniek is gebaseerd op de binding van een fluorescent gelabeld lac repressor eiwit bindingsplaatsen ontworpen in het DNA van belang. Deze methode kan worden aangepast aan vele recombinant DNA volgen in levende cellen in de tijd.

Monitoring Plasmide Replicatie in Live zoogdiercellen over meerdere generaties door fluorescentie microscopie

This video describes the virus plaque assay of the infectious herpes simplex virus or HSV. The diluted viral particles are inoculated to the monolayer of epithelial cells. Upon incubation, the virus forms plaques and is counted visually to determine the infectious virus titer.

Virus Plaque Assay: A Technique to Measure Infectious Herpes Simplex Virus via Quantification of Plaques Formed in Monolayer of Virus-Infected Cells

We beschrijven een protocol bij de antivirale cytokine productie in muizen geïnfecteerd met een model herpesvirus, muizen gamma herpesvirus 68 (γ HV68) die nauw verwant aan humane Kaposi-sarcoom geassocieerde herpesvirus (KSHV) en Epstein-Barr virus (EBV) te meten. Gebruik makend van genetisch gemodificeerde muizen en muis embryonale fibroblasten (MEF) hebben we de antivirale cytokine productie zowel in vivo als ex vivo. "Bereiding" de uitdrukking van aangeboren immuunsysteem componenten in...

Ontleden Innate Immune Signalering in Viral Evasion van cytokine productie

We hebben een fluorescente in situ hybridisatie protocol voor de detectie van een persistente DNA virusgenoom in weefselcoupes van diermodellen. Dit protocol maakt het bestuderen infectie proces codetection van het virale genoom, zijn RNA producten en virale of cellulaire eiwitten in enkele cellen.

Detectie van het genoom en de transcripties van een persistente DNA Virus in neuronale weefsels door Fluorescent In situ Hybridisatie Gecombineerd met Immunokleuring

De huid is een doelwitweefsel van het humane pathogeen herpes simplex-virus type 1 (HSV-1). Om de invasieroute van HSV-1 in weefsel te onderzoeken, hebben we een ex vivo infectiemodel opgezet van muis-epidermale vellen die de buitenste laag van de huid vertegenwoordigen.

Ex Vivo Infectie van Muizen Epidermis met Herpes simplex virus type 1

Kaposi sarcoom (KS) is een tumor die is veroorzaakt door infectie met de oncogene virus Humaan herpesvirus-8/KS herpesvirus (HHV-8/KSHV). De endothelial cell cultuur model hier beschreven is uniek geschikt voor de studie van de mechanismen waarmee KSHV gastheer cellen transformeert.

Een In Vitro Model voor het bestuderen van cellulaire transformatie door Kaposi sarcoom Herpesvirus

We beschrijven een protocol met behulp van fluorescentie in situ hybridisatie (vissen) om meerdere herpes virale Rna's binnen lytisch geïnfecteerde menselijke cellen te visualiseren, hetzij in suspensie of aanhanger. Dit protocol omvat de kwantificering van fluorescentie die een nucleocytoplasmische verhouding produceert en kan worden uitgebreid voor gelijktijdige visualisatie van gastheer en virale eiwitten met immunofluorescentie (IF).

Kwantitatieve fluorescentie in situ-hybridisatie (vis) en immunofluorescentie (indien) van specifieke genproducten in KSHV-geïnfecteerde cellen

Dit protocol maakt de isolatie van Epstein-Barr-virusdeeltjes uit de menselijke P3HR1-cellijn mogelijk bij het induceren van de virale lytische cyclus met phorbol 12-myristate 13-acetaat. DNA wordt vervolgens geëxtraheerd uit het virale preparaat en onderworpen aan real-time PCR om de virale deeltjesconcentratie te kwantificeren.

Isolatie en kwantificering van epstein-barrvirus uit de P3HR1-cellijn

Leer hoe je een robuust in vitro platform opzet voor KSHV de novo lytische infectie met HCT116-cellen. Deze methode maakt reproduceerbaar onderzoek naar vroege herpesvirusreplicatie mogelijk.

Vaststelling en kwantificering van de novo lytische infectie door celvrij Kaposi's sarcoom-geassocieerd herpesvirus

Meer video's verkennen