Name: MeRIP-qPCR-test voor het detecteren vanm6A-modificatieniveaus van specifiek RNA in osteosarcoomcellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T13:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 16 s
Description: Leer MeRIP-qPCR voor het detecteren van m6A-modificatieniveaus in specifiek RNA in osteosarcoomcellen. Deze kosteneffectieve methode biedt een gevoelig alternatief voor sequencing-gebaseerde technieken.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+m6A+RNA+methylation+and+noncoding+RNA+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">The interplay between m6A RNA methylation and noncoding RNA in cancer.</a> J Hematol Oncol. 12 (1), 121(2019).</li>
<li>Zhu, Z. M., Huo, F. C., Zhang, J., Shan, H. J., Pei, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+m6A+modification+and+alternative+splicing+during+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between m6A modification and alternative splicing during cancer progression.</a> Clin Transl Med. 13 (10), e1460(2023).</li>
<li>Hu, T., Wang, G., Wang, D., Deng, Y., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+methylation+modification%3A+Potential+pathways+to+suppress+osteosarcoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">m6A methylation modification: Potential pathways to suppress osteosarcoma metastasis.</a> Int Immunopharmacol. 145, 113759(2025).</li>
<li>Nagarajan, A., Janostiak, R., Wajapeyee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dot+blot+analysis+for+measuring+global+N6-methyladenosine+modification+of+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Dot blot analysis for measuring global N6-methyladenosine modification of RNA.</a> Methods Mol Biol. 1870, 263-271 (2019).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+in+strategies+to+profile+transcriptomic+m6A+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Current progress in strategies to profile transcriptomic m6A modifications.</a> Front Cell Dev Biol. 12, 1392159(2024).</li>
<li>McIntyre, A. B. R., Gokhale, N. S., Cerchietti, L., Jaffrey, S. R., Horner, S. M., Mason, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limits+in+the+detection+of+m6A+changes+using+MeRIP%2Fm6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Limits in the detection of m6A changes using MeRIP/m6A-seq.</a> Sci Rep. 10 (1), 6590(2020).</li>
<li>Meyer, K. D., Saletore, Y., Zumbo, P., Elemento, O., Mason, C. E., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+mRNA+methylation+reveals+enrichment+in+3%27+UTRs+and+near+stop+codons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of mRNA methylation reveals enrichment in 3' UTRs and near stop codons.</a> Cell. 149 (7), 1635-1646 (2012).</li>
<li>Zheng, H. X., Zhang, X. S., Sui, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+profiling+of+N6-methyladenosine+%28m6A%29+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Advances in the profiling of N6-methyladenosine (m6A) modifications.</a> Biotechnol Adv. 45, 107656(2020).</li>
<li>Matsuzawa, S., Wakata, Y., Ebi, F., Isobe, M., Kurosawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+monoclonal+antibodies+against+N6-methyladenosine+for+the+detection+of+RNA+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of monoclonal antibodies against N6-methyladenosine for the detection of RNA modifications.</a> PLoS One. 14 (10), e0223197(2019).</li>
<li>Law, J., Günther, S., Watanabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptome+mapping+of+N6-methyladenosine+using+m6A+immunoprecipitation+with+high-throughput+sequencing+in+skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptome mapping of N6-methyladenosine using m6A immunoprecipitation with high-throughput sequencing in skeletal muscle stem cells.</a> Methods Mol Biol. 2640, 431-443 (2023).</li>
<li>Mathur, L., Jung, S., Jang, C., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+m6A+RNA+modification+by+LC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of m6A RNA modification by LC-MS.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100724(2021).</li>
<li>Slama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+enrichment+factors+for+modified+RNA+in+MeRIP+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of enrichment factors for modified RNA in MeRIP experiments.</a> Methods. 156, 102-109 (2019).</li>
<li>Guo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+m6A+detection+empowered+by+endogenous+labeling+unveils+complexities+across+RNA+isoforms%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-molecule m6A detection empowered by endogenous labeling unveils complexities across RNA isoforms.</a> Mol Cell. 85 (6), 1233-1246.e7 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100% ethanol</td><td>Shanghai Titan Scientific Co.,Ltd., America</td><td>1158566</td><td></td></tr><tr><td>143B</td><td>ATCC, America</td><td>ATCC CRL-8303TM</td><td></td></tr><tr><td>2&times;SYBR Green qPCR Mix</td><td>Beijing Qihengxing Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>FS-Q1002</td><td></td></tr><tr><td>Denovix DS-11&nbsp;</td><td>Denovix</td><td>DS-11&nbsp;</td><td>Spectrofotometer</td></tr><tr><td>DMEM medium</td><td>WISENT CORPORATION, China</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 medium</td><td>Gibco, America</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>EpiQuik CUT&amp;RUN m6A RNA Enrichment (MeRIP) Kit</td><td>Epigentek, America</td><td>P-9018-24</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>WISENT CORPORATION, China</td><td>086-150</td><td></td></tr><tr><td>hFOB1.19</td><td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences, China</td><td>GNHu14</td><td></td></tr><tr><td>m6A RNA Methylation Assay Kit</td><td>Abcam, England</td><td>ab185912</td><td></td></tr><tr><td>microRNA Reverse Transcription Kit</td><td>EZBioscience-EZB, America</td><td>A0010CGQ</td><td></td></tr><tr><td>Real-Time System</td><td>BIO-RAD, America</td><td>CFX96</td><td></td></tr><tr><td>Total RNA Extraction Kit</td><td>EZBioscience-EZB, America</td><td>B0004DP</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme</td><td>Gibco, America</td><td>12604021</td><td></td></tr></tbody></table>

merip-qpcr-test voor het detecteren vanm6a-modificatieniveaus van specifiek rna in osteosarcoomcellen

MeRIP-qPCR Assay for Detecting m6A Modification Levels of Specific RNA in Osteosarcoma Cells

MeRIP-qPCR-test voor het detecteren vanm6A-modificatieniveaus van specifiek RNA in osteosarcoomcellen

RNA epitranscriptomic modification plays a critical role in the initiation and development of various cancers, among which N6-methyladenosine (m6A) is the ...

merip-qpcr-assay-for-detecting-m6a-modification-levels-specific-rna

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We zullen aantonen de opzet en analyse van pre-microRNA 96-wells-arrays voor QPCR het gebruik van een robot als door de hand met een Thermo Scientific Matrix multichannel pipet.

Profilering van de Pre-micro-RNA&#39;s en microRNA&#39;s met behulp van kwantitatieve real-time PCR (qPCR) arrays

Kwantitatieve Real Time polymerase chain reaction (qPCR) is een snelle en gevoelige methode om de expressie niveaus van verschillende microRNA (miRNA) moleculen te onderzoeken in tumor monsters. Met deze methode uitdrukking van honderden verschillende miRNA-moleculen kunnen worden versterkt, gekwantificeerd en geanalyseerd uit dezelfde cDNA sjabloon.

MicroRNA Detectie in prostaattumoren op Kwantitatieve Real-time PCR (qPCR)

De aanwezigheid van kanker stamcellen (CSC) in bot sarcomen Onlangs is gekoppeld aan de pathogenese. In dit artikel presenteren we de isolatie van CSCs van primaire celculturen verkregen uit humane biopten van conventionele osteosarcoom (OS) met de mogelijkheid van CSCs groeien onder hechtende omstandigheden.

Oprichting van Cancer Stem Cell Cultures van Human Conventionele Osteosarcoom

Gemodificeerde Northern blotting methode voor het meten N6 -methyladenosine (m 6 A) veranderingen in RNA wordt beschreven. De huidige methode kan wijzigingen in diverse RNA's en controles onder verschillende experimentele ontwerpen te detecteren.

Een methode voor het meten van RNA<em&gt; N</em<sup&gt; 6</sup&gt; -methyladenosine Wijzigingen in cellen en weefsels

We presenteren hier een celkweek werkwijze voor het induceren mesenchymale-epitheliale overgangen (MET) sarcoom cellen op basis van gecombineerde ectopische expressie van microRNA-200 familieleden en grainyhead-achtig 2 (GRHL2). Deze methode is geschikt voor een beter begrip van de biologische gevolgen van de fenotypische plasticiteit in de agressiviteit van kanker en behandelingen.

Inductie van mesenchymale-epitheliale Transities sarcoomcellen

Hier wordt een syngenetische orthotopische implantatie gevolgd door een amputatieprocedure van het osteosarcoom met spontane pulmonale metastase beschreven die kan worden gebruikt voor preklinisch onderzoek van metastasebiologie en ontwikkeling van nieuwe therapieën.

Een syngeneïsch orthotopisch osteosarcoom Sprague Dawley Rat-model met amputatie om de metastasesnelheid te beheersen

Het huidige protocol beschrijft een methode van RNA-fluorescentie in situ hybridisatie om de lncRNA's te lokaliseren in menselijke osteosarcoomcellen.

RNA-fluorescentie in situ hybridisatie voor lange niet-coderende RNA-lokalisatie in menselijke osteosarcoomcellen

Het protocol beschrijft een tandem-immunofluorescentiehybridisatietest met in formaline gefixeerd in paraffine ingebed weefsel om microRNA en gemultiplexte eiwitten tegelijkertijd te detecteren en te kwantificeren.

MicroRNA-amplificatie en -herkenning door middel van locked-nucleic-acid in situ hybridisatie als een nieuwe detectie- en kwantificeringsmethode

Hier presenteren we een protocol om globale m⁶A-niveaus semi-kwantitatief te beoordelen met behulp van dot blot. Totaal RNA wordt geëxtraheerd, gedenatureerd, op een nylonmembraan gespoten, onderzocht met anti-m⁶A-antilichaam en visualiseerd door chemiluminescentie. Signaalintensiteit, gekwantificeerd met ImageJ grijswaardenanalyse, weerspiegelt de relatieve methylatie-abundantie en biedt een reproduceerbare workflow voor onderzoek.

Dot Blot-assay voor het detecteren van globale N 6-methyladenosine RNA-modificatieniveaus

Dit experimentele protocol biedt een stabiele, kosteneffectieve en efficiënte methode die lncRNA-knockdown combineert met kolonievormende assays om het effect van lncRNA op de proliferatie van osteosarcoomcellen te kwantificeren.

Kolonievormingstest Detecteer de proliferatieve capaciteit van LncRNA-knockdown osteosarcoomcellen

Leer MeRIP-qPCR voor het detecteren van m6A-modificatieniveaus in specifiek RNA in osteosarcoomcellen. Deze kosteneffectieve methode biedt een gevoelig alternatief voor sequencing-gebaseerde technieken.

MeRIP-qPCR-test voor het detecteren van^m6A-modificatieniveaus van specifiek RNA in osteosarcoomcellen

Meer video's verkennen