Name: Isolatietest voor één vezel voor de beoordeling van oxidatieve myovezelgedrag (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Leer een geoptimaliseerde methode voor de isolatie van intacte enkele myofibrillen uit de murine soleus spier. Deze techniek minimaliseert vezelschade en residuele weefselhechting voor zuivere satellietcel-expansie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Janssen, I., Heymsfield, S. B., Wang, Z. M., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+mass+and+distribution+in+468+men+and+women+aged+18%E2%80%9388+yr%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle mass and distribution in 468 men and women aged 18–88 yr.</a> J Appl Physiol. 89 (1), 81-88 (2000).</li>
<li>Mauro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+cell+of+skeletal+muscle+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Satellite cell of skeletal muscle fibers.</a> J Biophys Biochem Cytol. 9 (2), 493-495 (1961).</li>
<li>Zammit, P. S., Partridge, T. A., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+skeletal+muscle+satellite+cell%3A+The+stem+cell+that+came+in+from+the+cold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">The skeletal muscle satellite cell: The stem cell that came in from the cold.</a> J Histochem Cytochem. 54 (11), 1177-1191 (2006).</li>
<li>Zammit, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+and+myogenic+progression+in+skeletal+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Pax7 and myogenic progression in skeletal muscle satellite cells.</a> J Cell Sci. 119 (9), 1824-1832 (2006).</li>
<li>Seale, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li>
<li>Günther, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myf5-positive+satellite+cells+contribute+to+Pax7-dependent+long-term+maintenance+of+adult+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Myf5-positive satellite cells contribute to Pax7-dependent long-term maintenance of adult muscle stem cells.</a> Cell Stem Cell. 13 (5), 590-601 (2013).</li>
<li>Gnocchi, V. F., White, R. B., Ono, Y., Ellis, J. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+characterisation+of+the+molecular+signature+of+quiescent+and+activated+mouse+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Further characterisation of the molecular signature of quiescent and activated mouse muscle satellite cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5205(2009).</li>
<li>Halevy, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+of+Pax7+expression+during+myogenesis+in+the+posthatch+chicken+establishes+a+model+for+satellite+cell+differentiation+and+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pattern of Pax7 expression during myogenesis in the posthatch chicken establishes a model for satellite cell differentiation and renewal.</a> Dev Dyn. 231 (3), 489-502 (2004).</li>
<li>Biressi, S., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+in+the+muscle+satellite+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity in the muscle satellite cell population.</a> Semin Cell Dev Biol. 21 (8), 845-854 (2010).</li>
<li>Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+muscle+satellite+cells+are+equal%2C+but+are+some+more+equal+than+others%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">All muscle satellite cells are equal, but are some more equal than others.</a> J Cell Sci. 121 (18), 2975-2982 (2008).</li>
<li>Ortuste Quiroga, H. P., Fujimaki, S., Ono, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+reporter+mouse+models%3A+A+pocket+guide+for+satellite+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Transl+Myol%22%5BJournal%5D)">Pax7 reporter mouse models: A pocket guide for satellite cell research.</a> Eur J Transl Myol. 33 (4), (2023).</li>
<li>Schiaffino, S., Reggiani, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+types+in+mammalian+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Fiber types in mammalian skeletal muscles.</a> Physiol Rev. 91 (4), 1447-1531 (2011).</li>
<li>Pette, D., Staron, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+isoforms%2C+muscle+fiber+types%2C+and+transitions%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Myosin isoforms, muscle fiber types, and transitions.</a> Microsc Res Tech. 50 (6), 500-509 (2000).</li>
<li>Ahmetov, I. I., Vinogradova, O. L., Williams, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+polymorphisms+and+fiber-type+composition+of+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sport+Nutr+Exerc+Metab%22%5BJournal%5D)">Gene polymorphisms and fiber-type composition of human skeletal muscle.</a> Int J Sport Nutr Exerc Metab. 22 (4), 292-303 (2012).</li>
<li>Guth, L., Samaha, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+differences+between+actomyosin+ATPase+of+slow+and+fast+mammalian+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Qualitative differences between actomyosin ATPase of slow and fast mammalian muscle.</a> Exp Neurol. 25 (1), 138-152 (1969).</li>
<li>Aguilera-Alcala, N., Morales-Reyes, Z., Martin-Lopez, B., Moleon, M., Sanchez-Zapata, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+scavengers+in+providing+non-material+contributions+to+people%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Indic%22%5BJournal%5D)">Role of scavengers in providing non-material contributions to people.</a> Ecol Indic. 117, 11(2020).</li>
<li>Sullivan, S. M., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+mitochondrial+volume+density+and+capillarity+in+hamster+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relationship between mitochondrial volume density and capillarity in hamster muscles.</a> Am J Physiol. 252 (1), H149-H155 (1987).</li>
<li>Fujita, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+lipid+metabolism+and+capillary+density+of+the+skeletal+muscle+following+low-intensity+exercise+training+in+a+rat+model+of+obesity+with+hyperinsulinemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in lipid metabolism and capillary density of the skeletal muscle following low-intensity exercise training in a rat model of obesity with hyperinsulinemia.</a> PLoS One. 13 (5), e0196895(2018).</li>
<li>Narusawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+myosin+in+developing+rat+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Slow myosin in developing rat skeletal muscle.</a> J Cell Biol. 104 (3), 447-459 (1987).</li>
<li>Faerman, A., Shani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+the+regulatory+myosin+light+chain+2+gene+during+mouse+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The expression of the regulatory myosin light chain 2 gene during mouse embryogenesis.</a> Development. 118 (3), 919-929 (1993).</li>
<li>Denardi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+2x-myosin+heavy+chain+is+coded+by+a+muscle+fiber+type-specific+and+developmentally+regulated+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Type 2x-myosin heavy chain is coded by a muscle fiber type-specific and developmentally regulated gene.</a> J Cell Biol. 123 (4), 823-835 (1993).</li>
<li>Ciciliot, S., Rossi, A. C., Dyar, K. A., Blaauw, B., Schiaffino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+type+and+fiber+type+specificity+in+muscle+wasting%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle type and fiber type specificity in muscle wasting.</a> Int J Biochem Cell Biol. 45 (10), 2191-2199 (2013).</li>
<li>Talbot, J., Maves, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+fiber+type%3A+Using+insights+from+muscle+developmental+biology+to+dissect+targets+for+susceptibility+and+resistance+to+muscle+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle fiber type: Using insights from muscle developmental biology to dissect targets for susceptibility and resistance to muscle disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 5 (4), 518-534 (2016).</li>
<li>Celegato, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+protein+and+transcript+profiles+of+FSHD+patient+muscles+correlate+to+the+D4Z4+arrangement+and+reveal+a+common+impairment+of+slow+to+fast+fibre+differentiation+and+a+general+deregulation+of+MyoD-dependent+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Parallel protein and transcript profiles of FSHD patient muscles correlate to the D4Z4 arrangement and reveal a common impairment of slow to fast fibre differentiation and a general deregulation of MyoD-dependent genes.</a> Proteomics. 6 (19), 5303-5321 (2006).</li>
<li>Ganassi, M., Muntoni, F., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+and+identifying+satellite+cell-opathies+within+muscular+dystrophies+and+myopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Defining and identifying satellite cell-opathies within muscular dystrophies and myopathies.</a> Exp Cell Res. 411 (1), 112906(2022).</li>
<li>Gallagher, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+84-days+of+bedrest+and+resistance+training+on+single+muscle+fibre+myosin+heavy+chain+distribution+in+human+vastus+lateralis+and+soleus+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">Effects of 84-days of bedrest and resistance training on single muscle fibre myosin heavy chain distribution in human vastus lateralis and soleus muscles.</a> Acta Physiol Scand. 185 (1), 61-69 (2005).</li>
<li>Grimby, G., Broberg, C., Krotkiewska, I., Krotkiewski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+fiber+composition+in+patients+with+traumatic+cord+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Rehabil+Med%22%5BJournal%5D)">Muscle fiber composition in patients with traumatic cord lesion.</a> Scand J Rehabil Med. 8 (1), 37-42 (1976).</li>
<li>Shenkman, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+slow+to+fast%3A+Hypogravity-induced+remodeling+of+muscle+fiber+myosin+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Naturae%22%5BJournal%5D)">From slow to fast: Hypogravity-induced remodeling of muscle fiber myosin phenotype.</a> Acta Naturae. 8 (4), 47-59 (2016).</li>
<li>Ohira, T., Kawano, F., Goto, K., Ohira, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+skeletal+muscles+to+gravitational+unloading+and%2For+reloading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol+Sci%22%5BJournal%5D)">Responses of skeletal muscles to gravitational unloading and/or reloading.</a> J Physiol Sci. 65 (4), 293-310 (2015).</li>
<li>Higashino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+changes+in+muscle+atrophy+and+muscle+fiber+type+conversion+after+spinal+cord+transection+and+peripheral+nerve+transection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroeng+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Early changes in muscle atrophy and muscle fiber type conversion after spinal cord transection and peripheral nerve transection in rats.</a> J Neuroeng Rehabil. 10, 46(2013).</li>
<li>Webster, C., Silberstein, L., Hays, A. P., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+muscle+fibers+are+preferentially+affected+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fast muscle fibers are preferentially affected in Duchenne muscular dystrophy.</a> Cell. 52 (4), 503-513 (1988).</li>
<li>Pedemonte, M., Sandri, C., Schiaffino, S., Minetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+decrease+of+IIx+myosin+heavy+chain+transcripts+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Early decrease of IIx myosin heavy chain transcripts in Duchenne muscular dystrophy.</a> Biochem Biophys Res Commun. 255 (2), 466-469 (1999).</li>
<li>Rafael, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+and+utrophin+influence+fiber+type+composition+and+post-synaptic+membrane+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Dystrophin and utrophin influence fiber type composition and post-synaptic membrane structure.</a> Hum Mol Genet. 9 (9), 1357-1367 (2000).</li>
<li>Kotelnikova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+to+meta-analysis+of+microarray+datasets+reveals+muscle+remodeling-related+drug+targets+and+biomarkers+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel approach to meta-analysis of microarray datasets reveals muscle remodeling-related drug targets and biomarkers in Duchenne muscular dystrophy.</a> PLoS Comput Biol. 8 (2), e1002365(2012).</li>
<li>Banerji, C. R. S., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathomechanisms+and+biomarkers+in+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy%3A+Roles+of+DUX4+and+Pax7%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Pathomechanisms and biomarkers in facioscapulohumeral muscular dystrophy: Roles of DUX4 and Pax7.</a> EMBO Mol Med. 13 (8), e13695(2021).</li>
<li>Lassche, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sarcomeric+dysfunction+contributes+to+muscle+weakness+in+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Sarcomeric dysfunction contributes to muscle weakness in facioscapulohumeral muscular dystrophy.</a> Neurology. 80 (8), 733-737 (2013).</li>
<li>Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+of+muscle+satellite+cells+on+intact+myofibers+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Proliferation of muscle satellite cells on intact myofibers in culture.</a> Dev Biol. 115 (1), 129-139 (1986).</li>
<li>Rosenblatt, J. D., Lunt, A. I., Parry, D. J., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+satellite+cells+from+living+single+muscle+fiber+explants%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Culturing satellite cells from living single muscle fiber explants.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 31 (10), 773-779 (1995).</li>
<li>Collins, C. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+grafting+of+single+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and grafting of single muscle fibres.</a> Methods Mol Biol. 482, 319-330 (2009).</li>
<li>Ravenscroft, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociated+flexor+digitorum+brevis+myofiber+culture+system%E2%80%94a+more+mature+muscle+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Dissociated flexor digitorum brevis myofiber culture system—a more mature muscle culture system.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64 (10), 727-738 (2007).</li>
<li>Keire, P., Shearer, A., Shefer, G., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+skeletal+muscle+myofibers+as+a+means+to+analyze+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of skeletal muscle myofibers as a means to analyze satellite cells.</a> Methods Mol Biol. 946, 431-468 (2013).</li>
<li>Smith, L. R., Meyer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+explants%3A+Ex-vivo+models+to+study+cellular+behavior+in+a+complex+tissue+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle explants: Ex-vivo models to study cellular behavior in a complex tissue environment.</a> Connect Tissue Res. 61 (3-4), 248-261 (2020).</li>
<li>Tarpey, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+utilization+of+the+flexor+digitorum+brevis+for+assessing+skeletal+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">Characterization and utilization of the flexor digitorum brevis for assessing skeletal muscle function.</a> Skeletal Muscle. 8 (1), 14(2018).</li>
<li>Omairi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+dystrophin-associated+glycoprotein+complex+composition+by+the+metabolic+properties+of+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Regulation of the dystrophin-associated glycoprotein complex composition by the metabolic properties of muscle fibres.</a> Sci Rep. 9 (1), 2770(2019).</li>
<li>Moyle, L. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+immunostaining+of+skeletal+muscle+fibres+to+study+myogenic+progression+in+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and immunostaining of skeletal muscle fibres to study myogenic progression in satellite cells.</a> Methods Mol Biol. 1210, 63-78 (2014).</li>
<li>Hettige, P., Tahir, U., Nishikawa, K. C., Gage, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+the+transcriptomes+of+EDL%2C+psoas%2C+and+soleus+muscles+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of the transcriptomes of EDL, psoas, and soleus muscles from mice.</a> BMC Genomics. 21 (1), 808(2020).</li>
<li>Blackburn, D. M., Lazure, F., Soleimani, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+sequencing+of+single+myofibers+from+Mus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">RNA sequencing of single myofibers from Mus musculus.</a> Bio Protoc. 10 (4), e3525(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Accutase</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AT104</td><td></td></tr><tr><td>Basic fibroblast growth factor</td><td>Peprotech</td><td>450-33</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Meiji Yakuka Co., Ltd</td><td>711-12</td><td>Productnaam: Vetorphale-injectie</td></tr><tr><td>Chicken Embryo Extract</td><td>US Biological</td><td>C3999</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase type I</td><td>Worthington</td><td>M9B2717</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Glucose-free DMEM</td><td>Gibco</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569</td><td></td></tr><tr><td>High-glucose DMEM+GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569-010</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Life technology</td><td>16050-130</td><td></td></tr><tr><td>Low-protein binding filter</td><td>Millipore</td><td>SLGVR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride</td><td>Kyoritsu Seiyaku Co., Ltd</td><td>8816</td><td>Productnaam: Dorbene-injectie</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>4987211762100</td><td>Productnaam: Dormicum-injectie</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin-amphotericin B suspensie</td><td>Wako</td><td>161-23181</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S-kleuroplossing</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>24-3875-5</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%), fenolrood</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Apparatuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifugebuizen (25 mL)</td><td>IWAKI</td><td>2362-025</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td>Keyence</td><td>BZ-X810</td><td></td></tr><tr><td>Pasteurpipetten</td><td>IWAKI</td><td>5 3/4 IK-PAS-5P</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Leica</td><td>M165C</td><td></td></tr><tr><td>Steriline schotels (100 mm)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3020-100</td><td>In het manuscript vermeld als petrischaal</td></tr><tr><td>Antilichamen voor immunolabeling</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-muis (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-32723</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Geit anti-konijn (H+L), Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11012</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Muis Anti-Myosine Zwaar Ketting</td><td>R&amp;D Systems</td><td>MAB4470</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Muis Anti-Pax7</td><td>DSHB</td><td>AB-528428</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Konijn Anti-MyoD</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-760</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Antilichamen voor immunoblotted</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HRP-geconjugeerd Anti-muis IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA931</td><td>1:1000/ paardenbloedperoxide</td></tr><tr><td>HRP-geconjugeerd Anti-Konijn IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA934</td><td>1:1000/ paardenbloedperoxide</td></tr><tr><td>Muis Anti-MyHC I</td><td>Sigma</td><td>M8421</td><td>1:1000/ Myosine Zwaar Ketting I</td></tr><tr><td>Muis Anti-MyHC II</td><td>Sigma</td><td>M4276</td><td>1:1000/ Myosine Zwaar Ketting II</td></tr><tr><td>Muis Anti-PGC-1&alpha;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-517380</td><td>1:1000/ Pparg co-activator 1 alpha</td></tr><tr><td>Muis Anti-&alpha;-tubuline</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#3873</td><td>1:1000/ Alpha tubuline</td></tr><tr><td>Konijn Anti-COXIV</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#4850</td><td>1:1000/ Cytochroom c oxidase IV</td></tr><tr><td>Konijn Anti-GAPDH</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2218</td><td>1:10000/ Glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase</td></tr><tr><td>Konijn Anti-GLUT4</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2213</td><td>1:1000/ Glucose Transporter 4</td></tr><tr><td>Konijn Anti-&beta;-actin</td><td>Proteintech</td><td>20536-1-AP</td><td>1:2000/ Nonmuscle Beta-actin</td></tr></tbody></table>

isolatietest voor één vezel voor de beoordeling van oxidatieve myovezelgedrag

Single Fiber Isolation Assay for the Assessment of Oxidative Myofiber Behavior

Onze techniek toont aan dat geïsoleerde vezels van de soleus (SOL) en extensor digitorum longus (EDL) spieren efficiënt immuungelabeld kunnen worden tegen Pax7 (Figuur 3B). Deze geïsoleerde vezels kunnen 3 dagen worden bewaard in een drijvend kweekmedium (bestaande uit DMEM + GlutaMAX met 10% paardenserum, 1% AB, 0,5% CEE), gevolgd door immunolabeling (Figuur 3B). Het bewaren van drijvende vezels langer dan 4 dagen wordt niet aanbevolen. Onder de beschreven drijvende vezelcondities hebben myovezels de neiging zich na deze tijd samen te voegen, waardoor de latere immunolabeling-analyse in gevaar komt.
De gepresenteerde techniek kan verder worden gebruikt voor immunoblotting in het myogene programma (Figuur 3C). Inderdaad, SOL- en EDL-afgeleide myoblasten werden geplateerd in 24-wellplaten bij ongeveer 70% confluentie. De cellen werden ofwel één dag in groeimedium gehouden (myoblasten) of werden twee of vier dagen gestimuleerd om te differentiëren (respectievelijk vroegvormende en gedifferentieerde myotubes). Vijf μg eiwit werd geladen voor immunoblottinganalyse.
MyHC I-expressie werd vrijwel specifiek tot expressie gebracht in SOL-afgeleide spiervezels, met minimale expressie in myotubes en verwaarloosbaar in myoblasten (Figuur 3C). MyHC II werd tot expressie gebracht in zowel SOL- als EDL-spiervezels. Deze uitdrukking weerspiegelt de SOL, die voornamelijk bestaat uit type-I en IIa, terwijl de EDL voornamelijk bestaat uit IIx- en IIb-vezels. Myoblasten drukten MyHC II niet tot expressie, maar de expressie ervan nam geleidelijk toe tijdens differentiatie. De oxidatief-gerelateerde eiwitten PGC-1α en COXIV toonden de verwachte hogere expressie in SOL-afgeleide vezels. Ook werd een hogere expressie van GLUT4 gedetecteerd in geïsoleerde SOL-vezels vergeleken met EDL-vezels. Een probleem waar skeletspierbiologen mee te maken kunnen krijgen, is dat veelgebruikte huishoudelijke eiwitten en belastingscontroles, zoals α-tubuline, β-actine, GAPDH en totale eiwitkleuringen, waaronder Ponceau S, niet stabiel blijven tussen myoblasten, myotubes en geïsoleerde spiervezels, waarbij elk een duidelijke variabiliteit vertoont. De signaalintensiteit van α-tubuline en β-actine was het hoogst in myotubes, terwijl de kleuring van Ponceau S relatief zwak was in myoblasten. Daarentegen vertoonde GAPDH een sterkere expressie in EDL-spiervezels. Toch kan afhankelijk van het experimentele doel een van deze huishoudelijke eiwitten nog steeds toepasbaar zijn; alternatieve kunnen normalisatiefactoren zoals hitteschokeiwit 70 (HSP70) worden onderzocht.
<img alt="Figuur 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig1.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 1"> 
Figuur 1. Dissectie van de spier soleus. (A) Benodigde apparatuur voor dissectie. 1: microschaar, 2: fijne pincet, 3: ontledende schaar, en 4: dissectiepinnen. (B) De PLA-pees werd afgesneden uit GAS- en SOL-peesbundels (gele pijl). De distale PLA (witte pijl) pees werd met een tang opgetild. (C) Een dissectiepen werd ingebracht in de ruimte tussen de proximale pees van de SOL (rode pijl) en GAS (groene pijl). (D) SOL werd gescheiden van GAS met een dissectiepen. (E) GAS- en SOL-peesbundels werden vervolgens aan de GAS-zijde doorgesneden. (V) SOL proximale pees werd vervolgens met een microschaar doorgesneden. (G) Extra distale peesbundels werden verwijderd. Klik <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig1large.jpg" target="_blank">hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figuur 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig2.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 2"> 
Figuur 2. Isolatie van soleusvezels. (A) Apparatuur die nodig is voor isolatie. 1: smalboring en 2: breedboring Pasteur-pipetten. (B) Stereomicroscoop gebruikt voor isolatie. (C) Collagenase-verteerde soleus werd overgedragen aan DMEM met 1% AB. (D) Soleusvezels losgekoppeld van de spier na de eerste 10 spoelsessies. (E) Enkele vezels overgebracht naar de tweede schaal. (F) Afbeelding toont schone vezels verwijderd van puin en gekrompen vezels. (G) Vuilvrije enkele vezels overgebracht naar de derde schaal. (H) Intacte enkele vezels duidelijk zichtbaar. Schaalbalk = 10 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figuur 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig3.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 3"> 
Figuur 3. Uitbreiding van celkweek en analyse van EDL- en SOL-afgeleide monsters. (A) Na 6 dagen na isolatie tonen de kweekmonsters van het proliferatiemedium een zuivere myoblastcultuur verkregen uit geïsoleerde soleusvezels. Schaalbalk = 100 μm. (B) SOL- en EDL-afgeleide enkele vezels tonen onmiddellijk of 3 dagen na isolatie satellietcellen die immuno-gelabeld zijn voor Pax7 (groen). De afwezigheid van MyoD (rood) bevestigt dat satellietcellen zich nog niet hebben gecommitteerd aan myogene activatie. Vezels werden gekleurd met DAPI (blauw). De cellen werden vervolgens waargenomen door een fluorescentiemicroscoop. Schubstaaf = 20 μm. (C) 5 μg eiwit werd gebruikt voor immunoblotting van myoblasten, myotubes en van myovezel afgeleide monsters. Immunoblottingpanelen tonen expressie van MyHC I, MyHC II, PGC-1α, COX IV, GLUT4, α-tubuline, β-actine en GAPDH werden gebruikt als huishoudelijke en normaliserende doelen. Ponceau S-kleuring werd gebruikt als totale controle voor eiwitbelasting. Klik <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig3large.jpg" target="_blank">hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

Isolatietest voor één vezel voor de beoordeling van oxidatieve myovezelgedrag

Skeletal muscle is composed of multinucleated myofibers whose integrity and function are essential for movement and overall health. In neuromuscular ...

single-fiber-isolation-assay-for-assessment-oxidative-myofiber

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Saponine-gepermeabiliseerde vezels voorbereiding in combinatie met respirometrische oxidatieve fosforylering analyse geeft integratieve beoordeling van de mitochondriale functie. Mitochondriale ademhaling in fysiologische en pathologische toestanden kan weerspiegelen verschillende regelgevende invloeden waaronder mitochondriale interacties, morfologie en biochemie.

Respirometrische oxidatieve fosforylering Assessment in Saponin-gepermeabiliseerde Cardiac Vezels

This video demonstrates the isolation of single myofibres from harvested murine Extensor Digitorum Longus (EDL) muscle. The isolated myofibres can be cultured to study myofiber-associated muscle stem cell activity.

Myofiber Isolation: A Technique to Obtain Single Myofibers from Harvested Mouse Extensor Digitorum Longus (EDL) Muscle

Isolatie en cultuur van myovezels is de gouden...

Isolatie en Cultuur van individuele myovezels en hun satelliet cellen van volwassen skeletspier

In dit protocol wordt een in vitro kweek- en functionele analysemethode voor spierstamcellen beschreven, die de meeste van hun interacties met hun endogene niche behoudt.

Single Myofiber Culture Assay voor de beoordeling van volwassen spierstamcelfunctionaliteit Ex Vivo

Het vermogen om neuromusculaire verbindingscomponenten nauwkeurig te detecteren is cruciaal bij het evalueren van wijzigingen in de architectuur vanwege pathologische of ontwikkelingsprocessen. Hier presenteren we een volledige beschrijving van een eenvoudige methode om hoogwaardige beelden te verkrijgen van neuromusculaire verbindingen die kunnen worden gebruikt om kwantitatieve metingen uit te voeren.

Dissectie van enkelvoudige skeletspiervezels voor immunofluorescente en morfometrische analyses van neuromusculaire knooppunten van de hele berg

Hier beschrijven we een gedetailleerde methode voor mitochondriale isolatie van de skeletspieren van muizen en de daaropvolgende analyse van ademhaling door oxygen consumption rate (OCR) met behulp van op microplaten gebaseerde respirometrische assays. Deze pijplijn kan worden toegepast om de effecten van meerdere omgevings- of genetische interventies op het mitochondriale metabolisme te bestuderen.

Isolatie van mitochondriën uit de skeletspieren van muizen voor respirometrische assays

Paarden hebben een uitzonderlijke aërobe inspanningscapaciteit, waardoor paardenskeletspieren een belangrijk weefsel zijn voor zowel de studie van paardeninspanningsfysiologie als de mitochondriale fysiologie van zoogdieren. Dit artikel beschrijft technieken voor de uitgebreide beoordeling van de mitochondriale functie in de skeletspieren van paarden.

Hoge resolutie fluorrespirometrie van equine skeletspieren

Hier presenteren we een compilatie van testen om de mitochondriale functie in zoogdiercellen direct te meten, onafhankelijk van hun vermogen om moleculaire zuurstof te consumeren.

Zuurstofonafhankelijke assays om de mitochondriale functie bij zoogdieren te meten

Dit protocol demonstreert isolatie van één vezel uit gevriesdroogde menselijke skeletspier- en vezeltypeclassificatie volgens Myosin heavy chain (MHC) isovorm met behulp van de dot blotting-techniek. Geïdentificeerde MHC I- en II-vezelmonsters kunnen vervolgens verder worden geanalyseerd op vezeltype-specifieke verschillen in eiwitexpressie met behulp van western blotting.

Vezeltype-identificatie van menselijke skeletspieren

We beschrijven een protocol om enzymatisch gedissocieerde vezels van verschillende lengtes en typen te verkrijgen uit zes spieren van volwassen muizen: drie daarvan zijn al beschreven (flexor digitorum brevis, extensor digitorum longus, soleus) en drie van hen zijn voor het eerst met succes gedissocieerd (extensor hallucis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

Intacte korte, tussenliggende en lange skeletspiervezels verkregen door enzymatische dissociatie van zes achterpootspieren van muizen: voorbij flexor digitorum brevis

Hier beschrijven we een uitgebreide methode voor het meten van mitochondriale oxidatieve fosforylering in verse gepermeabiliseerde skeletspiervezels van menselijke of muizenspieren. Deze methode maakt de real-time kwantificering van de mitochondriale ademhaling en de beoordeling van brandstofvoorkeur en metabole flexibiliteit mogelijk, met behoud van bestaande mitochondriale netwerken en membraanintegriteit.

Meting van mitochondriale ademhaling in skeletspiervezels van mens en muis door middel van respirometrie met hoge resolutie

Leer een geoptimaliseerde methode voor de isolatie van intacte enkele myofibrillen uit de murine soleus spier. Deze techniek minimaliseert vezelschade en residuele weefselhechting voor zuivere satellietcel-expansie.

Isolatietest voor één vezel voor de beoordeling van oxidatieve myovezelgedrag

Meer video's verkennen