Name: Menselijke ES-cellen: Vanaf Cultuur van bevroren cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: Leer het opzetten van een cultuur van menselijke embryonale stamcellen uit bevroren voorraad. Dit protocol zorgt voor reproduceerbare groei en levensvatbaarheid van HuES-cellen voor neurowetenschappelijk onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ontdooi een bevroren voorraad: <ol><li> Voordat ontdooien TINTEN cellen, ervoor zorgen dat de MEF plaat die je al hebt voorbereid correct is verguld en in goede conditie. Probeer NIET een minder dan wenselijk plaat, of een die ouder is dan drie dagen te gebruiken. Het wordt aanbevolen om pre-label alle conische buizen en putten worden gebruikt. </li><li> Pre-warme tinten media tot 37 ° C. Aliquot TINTEN media in een steriele conische buis voor elke lijn. Verwijder TINTEN flacon / s van -80 en onmiddellijk onder water de onderste helft van de buis in een 37 ° C waterbad. Het duurt ongeveer 45-60 seconden voordat de cellen zijn 80% ontdooid (klein links diepvries gedeelte). </li><li> Snel de buis te brengen om de laminaire flow kap, spray neer met 70% alcohol, en zachtjes cellen over te dragen aan de van de voorverwarmde media. Draai de buis, verwijder de media, en resuspendeer in een geschikt volume van verse, voorverwarmde TINTEN media. </li><li> Aspireren uit de MEF media van zoveel putten als je wordt ontdooien in. Snel, aliquot voorverwarmde TINTEN media terug in elk putje van de plaat, zorg dat u de bijgevoegde MEFs verstoren. Zet de plaat in de motorkap. Net als bij MEF, zijn beste resultaat verkregen als de druppels zijn gelijkmatig verdeeld over de plaat. Voorzichtig de plaat &#39;s nachts terug te keren naar een 37 ° C incubator, zodat de tinten cellen om het zaad van de MEFs. Verandering media ~ 48 uur na ontdooien, ter vervanging van verse TINTEN media. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te melden.

In deze video laten we zien hoe ons laboratorium routinematig een TINTEN menselijke embryonale stamcellen cultuur voorziet van een bevroren voorraad. Dit proces is vatbaar voor algemeen gebruik met een zoogdiercellen als bevroren in een DMSO oplossing. Efficiënte ontdooien is essentieel voor de oprichting van een nieuwe cultuur van tinten cellen van een ingevroren voorraad, en is belangrijk voor experimentele consistentie.

TINTEN media 651,5 ml KO-DMEM 500 ml Penstrep 6,5 ml glutamine 6,5 ml NEAA 6,5 ml beta-mercapto-ethanol 0.5ul KO Serum Vervanging 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng / mL definitief) 0,65 ml

menselijke es-cellen: vanaf cultuur van bevroren cellen

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Hier laten we zien hoe onze lab een TINTEN menselijke embryonale stamcellen lijn cultuur begint met een bevroren voorraad. Ten eerste is een tot twee dagen oud tien cm plaat van ongeveer een (tot twee) miljoen bestraald muis embryonale fibroblasten feeder-cellen gespoeld met tinten media om resterende serum en cellen vuil te verwijderen, en vervolgens TINTEN media toegevoegd en links naar evenwicht in de cel cultuur incubator. Een bevroren flacon van cellen van lange termijn opslag van vloeibare stikstof of een-80C vriezer is afkomstig en snel ondergedompeld in een 37C waterbad voor snel ontdooien. Cellen in de vrieskou media worden vervolgens verwijderd uit de flacon en geplaatst in een groot volume van tinten media. Het grote volume van kleuren media vergemakkelijkt het verwijderen van overtollige serum en DMSO, wat kan leiden tot TINTEN menselijke embryonale stamcellen om te differentiëren. Cellen zijn zacht gesponnen uit de vering, en vervolgens opnieuw gesuspendeerd in een klein volume van verse TINTEN media die vervolgens wordt gebruikt om het zaad van de MEF plaat. Het wordt belangrijk geacht om het zaad van de MEF plaat door voorzichtig toe te voegen de tinten cellen in een druppelsgewijs manier om gelijkmatig te verspreiden in de hele plaat. De onlangs opgerichte TINTEN cultuur plaat terug naar de incubator voor 48 uur voor de media wordt vervangen, wordt vervolgens elke 24 uur daarna.

Hier laten we zien hoe onze lab een TINTEN menselijke embryonale stamcellen lijn cultuur begint met een bevroren voorraad.

Menselijke ES-cellen: Vanaf Cultuur van bevroren cellen

Hier demonstreren wij hoe ons laboratorium begint met de kweek van een HuES humane embryonale stamcellijn vanuit een bevroren voorraad. Eerst wordt een één tot twee dagen oude plaat van tien cm met ...

human-es-cells-starting-culture-from-frozen-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier laten we zien hoe onze lab TINTEN menselijke embryonale stamcellijnen bevriest.

Invriezen menselijke embryonale stamcellen

Sinds James Thomson et al. ontwikkelde een techniek in 1998 te isoleren en HES groeien in de cultuur, hebben vriescellen voor later gebruik en ontdooien en uitbreiden van cellen van een ingevroren voorraad belangrijk geworden procedures uitgevoerd in routine hES celkweek. Omdat hES-cellen zijn zeer gevoelig voor de stress van het invriezen en ontdooien, speciale aandacht genomen. Hier laten we zien de juiste techniek voor het snel ontdooien van hES cellen van vloeibare stikstof voorraden,...

Invriezen en ontdooien van menselijke embryonale stamcellen

We presenteren een protocol voor een efficiënte herprogrammering van menselijke somatische cellen in het menselijk geïnduceerde pluripotente stamcellen (hiPSC) met behulp van retrovirale vectoren die coderen voor Oct3 / 4, Sox2, Klf4 en c-myc (OSKM) en de identificatie van de opnieuw aangeleerd hiPSC door live kleuring met Tra- 1-81 antilichaam.

Selecteren en isoleren van Koloniën van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen geherprogrammeerd tegen Adult Fibroblasten

We beschrijven een protocol om humane amnion-epitheelcellen (hAEC's) te isoleren en te kweken met behulp van dierlijk productvrije reagentia in overeenstemming met de richtlijnen voor goede fabricagepraktijken (cGMP).

Isolatie, cryopreservatie en cultuur van de mens Amnion epitheelcellen voor klinische toepassingen

Dit protocol biedt een eenvoudige en efficiënte manier om humane pluripotente stamcellen (hPSC's) te propageren met behulp van alleen geconditioneerd medium afgeleid van de menselijke placenta in een met gelatine beklede schaal zonder aanvullende exogene suppletie of hPSC-specifieke synthetische substraten.

A Novel Cultuur Model for Human Pluripotent Stem Cell Voortplanting op gelatine in Placenta-geconditioneerde Media

De menselijke huid fungeert als een eerste lijn van verdediging tegen de externe omgeving. Presenteren we een methode voor het isoleren van primaire menselijke keratinocyten van volwassen huid. Deze geïsoleerde keratinocyten zijn nuttig in talrijke experimentele opstellingen en een zeer geschikt model voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen in cutane biologie in vitro.

Generatie en kweken van primaire menselijke keratinocyten van volwassen huid

Een protocol is bedoeld om te bereiden polyvinyl alcohol-co-itacon zuur hydrogels met verschillende stijfheid, die waren geënt met en zonder oligopeptides, te onderzoeken van het effect van de stijfheid van biomaterialen op de differentiatie en de verspreiding van de cellen van de stam. De stijfheid van de hydrogels werd gecontroleerd door het crosslinking tijd.

Menselijke pluripotente stamcel cultuur op Polyvinyl Alcohol-Co-itacon zuur Hydrogels met verschillende stijfheid onder voorwaarden Xeno-gratis

Dit protocol maakt het mogelijk om quiescente menselijke hematopoëtische stamcellen in vitro te behouden door het micromilieu van het beenmerg na te bootsen met behulp van overvloedige vetzuren, cholesterol, lagere concentraties cytokinen en hypoxie.

Een kweekmethode om rustgevende menselijke hematopoëtische stamcellen te behouden

Xenogene (chemische of dierlijke afgeleide) producten die worden geïntroduceerd in de voorbereidings-/manipulatiestappen voor celtherapie zijn geassocieerd met een verhoogd risico op immuunreactiviteit en pathogene overdracht bij gastheerpatiënten. Hier wordt een volledig xenogeneïsche vrije methode beschreven voor de isolatie en in vitro expansie van menselijke vet-afgeleide stamcellen.

Isolatie en kweek van menselijke vetstamcellen met een innovatieve xenogene-vrije methode voor menselijke therapie

Het huidige protocol beschrijft stappen voor het oplossen van problemen met geïnduceerde pluripotente stamcel (iPSC) uit de perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) van patiëntenmonsters die moeilijk te herprogrammeren waren volgens de instructies van de fabrikant. Dit protocol is specifiek voor bevroren buffy coat-monsters, maar kan ook worden toegepast op de herprogrammering van gezuiverde PBMC's.

Herprogrammering van geïnduceerde pluripotente stamcellijnen uit bevroren Buffy Coat-monsters

Leer het opzetten van een cultuur van menselijke embryonale stamcellen uit bevroren voorraad. Dit protocol zorgt voor reproduceerbare groei en levensvatbaarheid van HuES-cellen voor neurowetenschappelijk onderzoek.

Menselijke ES-cellen: Vanaf Cultuur van bevroren cellen

Meer video's verkennen