Name: calcium chloride dna uptake in e. coli
Uploaded: 2023-04-30T07:10:31.000Z
Duration: 10 min 54 s
Channel: JoVE

K12 Standards

Florida Department of Education

High School

Life Science

SC.912.L.16

SC.912.L.16.7

transformation-e-coli-cells-using-an-adapted-calcium-chloride

Transformation of E. coli Cells Using an Adapted Calcium Chloride Procedure

Protokół ten opisuje przygotowanie i transformację kompetentnego E. coli DH5α przy użyciu adaptacji procedury chlorku wapnia (12). 
1. Ustawienie
<ol>
	<li>Sprzęt
	<ul>
		<li>Spektrofotometr</li>
		<li>Wirówka Sorval (lub równoważna)</li>
		<li>Wirówka stołowa</li>
		<li>Blok grzewczy lub kąpiel wodna</li>
		<li>Wytrząsarka orbitalna</li>
		<li>Inkubator stacjonarny</li>
		<li>Tacka do odlewania żelu</li>
		<li>Dobrze grzebienie</li>
		<li>Źródło napięcia</li>
		<li>Pudełko żelowe</li>
		<li>Źródło światła UV</li>
		<li>Kuchenka mikrofalowa</li>
	</ul>
	</li>
	<li>Roztwory i odczynniki
	<ul>
		<li>Rosół Luria-Bertani (LB) (10 g hydrolizatu enzymatycznego kazeiny, 5 g ekstraktu drożdżowego i 5 g chlorku sodu w 1000 ml H2O)</li>
		<li>Super Optymalny bulion z represją katabolityczną (SOC): (2% (w/v) trypton, 0,5% (w/v) ekstrakt drożdżowy, 10 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM MgSO4 i 20 mM glukozy)</li>
		<li>CaCl2-MgCl2 (80 mM MgCl2, 20 mM CaCl2) roztworu. </li>
		<li>M CaCl2 roztwór (jeśli komórki mają być natychmiast przekształcone) lub 0,1M roztwór CaCl2 zawierający 10% (v/v) glicerolu (jeśli komórki zostaną zamrożone do wykorzystania w przyszłości). </li>
		<li>Płytki agarowe LB</li>
		<li>Selektywne płytki agarowe LB (w tym eksperymencie, ponieważ zastosowany plazmid nadaje odporność na ampicylinę, użyto płytek agarowych LB zawierających ampicylinę 100 μg/ml)</li>
		<li>E. coli Szczep DH5α</li>
		<li>Plazmid DNA pUC19 (100 pg/ μl)</li>
		<li>Zestaw do miniprzygotowania QIAprep Spin (Qiagen)</li>
		<li>HindIII enzym restrykcyjny</li>
		<li>1 kb plus drabinka DNA</li>
		<li>Niska temperatura topnienia agarozy</li>
		<li>1X bufor TAE (40 mM zasady Tris, 20 mM kwas octowy i 1mM EDTA)</li>
		<li>Bromek etydyny (10mg/ml)</li>
	</ul>
	</li>
	<li>Ogólne uwagi dotyczące bezpieczeństwa 
	E. coli DH5α jest sklasyfikowany jako poziom bezpieczeństwa biologicznego 1 (BSL1). Drobnoustroje z tej kategorii stanowią niewielkie lub żadne zagrożenie infekcją u zdrowych osób dorosłych. Wymagana jest jednak ostrożna manipulacja mikroorganizmem. </li>
</ol>
WAŻNE: wszystkie czynności opisane w tym protokole muszą być wykonywane przy użyciu technik aseptycznych i w temperaturze lodu lub 4°C, chyba że jest to wskazane. 
2. Protokół
<ol>
	<li>Z zamrożonego wywaru E. coli DH5α (zamrożonego w 20% glicerolu z nocnej kultury wyhodowanej w LB) usuń bakterie do izolacji na płytce agarowej LB. Inkubować w temperaturze 37°C przez noc (16-20 godzin). </li>
	<li>Zaszczepij pojedynczą kolonię w 3 ml bulionu LB w probówce. Rosną wytrząsając z prędkością 210 obr./min w temperaturze 37°C przez noc (16-20 godzin). </li>
	<li>Zmierz OD600 w nocnej hodowli. Użyj kultury nocnej, aby zaszczepić 100 ml bulionu LB w 1-litrowej kolbie do OD600=0,01. Inkubować kulturę, energicznie wstrząsając (210 obr./min) w temperaturze 37°C, monitorując OD600 w spektrofotometrze co 15-20 minut, aż kultura osiągnie OD600=0,35 (około 3 godziny). 
	UWAGA: Aby transformacja była wydajna, komórki bakteryjne muszą znajdować się w środkowej fazie wzrostu wykładniczego. Maksymalna liczba komórek musi wynosić 108 komórek/ml, co dla większości szczepów E. coli odpowiada OD600=0,4. Zastosowanie spektrofotometru pozwala na pomiar OD600, co pozwala określić, czy komórki znajdują się w odpowiednim etapie wzrostu. Jeśli protokół ten będzie stosowany dla innych szczepów bakterii, konieczna będzie kalibracja w celu określenia liczby kolonii tworzących jednostki przy określonych wartościach OD600 w celu określenia tej korelacji. </li>
	<li>Przenieś 50 ml kultury do każdej z 2 lodowatych polipropylenowych butelek wirówek. Umieść butelki na lodzie na 20 minut, aby ostygły. </li>
	<li>Odzyskaj komórki przez odwirowanie w temperaturze 2700 g (4100 obr./min w wirniku Sorval GSA) przez 10 minut w temperaturze 4°C.</li>
	<li>Usunąć supernatant. Odcedź ostatnie ślady pożywki, kładąc butelkę do góry nogami na podkładce lub ręczniku papierowym. </li>
	<li>Ponownie zawiesić każdą osadkę bakteryjną w 30 ml lodowatego roztworu CaCl2-MgCl2 (80 mM MgCl2, 20 mM CaCl2). Najpierw dodaj 5 ml roztworu, ostrożnie mieszaj, aż osad całkowicie się rozpuści, a następnie dodaj pozostałe 25 ml roztworu. </li>
	<li>Powtórz krok 2.4. </li>
	<li>Powtórz krok 2.5. </li>
	<li>Jeśli kompetentne komórki mają zostać bezpośrednio przekształcone, ponownie zawieś każdą osadkę bakteryjną w 2 ml lodowatego roztworu CaCl2 (0,1 M), ostrożnie obracając probówki. Jeśli osad nie zostanie ponownie zawieszony tą metodą, należy go ponownie zawiesić, delikatnie pipetując w górę i w dół (unikając tworzenia się pęcherzyków). 
	Alternatywnie właściwe komórki można zamrozić i przechowywać do późniejszego wykorzystania. Aby przygotować zamrożone zapasy kompetentnych komórek, należy ponownie zawiesić osad w 2 ml 0,1M roztworu CaCl2 zawierającego 10% (v/v) glicerol. To rozwiązanie musi być lodowate. Zawiesinę komórek podwielokrotnych do lodowato zimnych probówek polipropylenowych o pojemności 1,5 ml (160 μl na probówkę). Natychmiast zamrozić kompetentne komórki w kąpieli z suchym lodem i etanolem. Przenieś probówki do zamrażarki o temperaturze -70°C. </li>
	<li>Aby przekształcić komórki potraktowane CaCl2, przenieś 50 μl kompetentnych komórek do każdej z 2 probówek polipropylenowych o pojemności 1,5 ml. Dodać 1 μl (100 pg) plazmidowego DNA pUC19 do jednej z probówek i pozostawić drugą probówkę bez DNA (kontrola ujemna). Delikatnie wymieszaj (unikaj tworzenia się pęcherzyków). Inkubować przez 30 minut na lodzie. 
	UWAGA: Do przemiany nie należy używać więcej niż 50 ng DNA w objętości 10 μl lub mniejszej. </li>
	<li>Przenieść probówki do bloku grzewczego i inkubować w temperaturze 42°C dokładnie przez 45 sekund. 
	UWAGA: Szok cieplny jest krytycznym krokiem. Nie przekraczać temperatury ani czasu inkubacji. </li>
	<li>Łatwo przenieś probówki do lodu. Inkubuj przez 2 minut.</li>
	<li>Dodać 950 μl pożywki SOC i inkubować probówki przez 1 godzinę w temperaturze 37°C, aby umożliwić bakteriom odzyskanie sił i ekspresję markera oporności na antybiotyki zakodowanego w plazmidzie. </li>
	<li>Rozcieńczyć 10 μl zawiesiny komórek w 1000 μl w SOC (rozcieńczenie 1/100) i 100 μl zawiesiny komórek w 1000 μl w SOC (rozcieńczenie 1/10). Umieścić 100 μl rozcieńczeń, jak również kontrolę, na selektywnych płytkach i rozprowadzić za pomocą szpatułki. Zwykle posiew 100 μl rozcieńczenia 1/100 i 1/10 daje wystarczającą liczbę jednostek tworzących kolonie (cfu) na płytkę. Idealnie, liczba ta powinna wynosić od 30 do 300 jtk, aby było wystarczająco dużo kolonii, ale oddzielonych od siebie. Jednak liczba jtk będzie zależała od wydajności transformacji (patrz sekcja Analiza danych i wyniki). </li>
	<li>Inkubować płytki w temperaturze 37°C. Przekształcone kolonie powinny pojawić się w ciągu 12-16 godzin (zakres ten będzie zależał od szczepu komórki i metody selekcji). W kontroli ujemnej nie powinny rosnąć żadne kolonie. </li>
	<li>Policz jtk/płytkę otrzymaną do przemiany (Tabela 1). </li>
	<li>Aby sprawdzić, czy transformanty zawierają plazmid pUC19, zostanie przeprowadzone przygotowanie plazmidu, a następnie trawienie. W tym celu zaszczepij pojedynczą kolonię w 3 ml bulionu LB w probówce. Rosną wytrząsając z prędkością 210 obr./min w temperaturze 37°C przez noc (16-20 godzin). </li>
	<li>Przygotuj preparat plazmidowy za pomocą zestawu QIAprep Spin Miniprep Kit, zgodnie z instrukcją producenta. </li>
	<li>Trawić 1 μg oczyszczonego pUC19 enzymem restrykcyjnym HindIII w temperaturze 37°C przez 1 godzinę. 
	UWAGA: Na tym etapie można użyć dowolnego enzymu, który przecina miejsce wielokrotnego klonowania pUC19. </li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Ilość</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Bufor skrótu ograniczenia</td>
			<td>2.5 μl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plazmid pUC19</td>
			<td>1 μg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HindIII</td>
			<td>1 μl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O</td>
			<td>20,5 μl (do 25 μl)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<ol start="21">
	<li>Uruchom drabinę masy cząsteczkowej, strawione DNA pUC19 i taką samą ilość niestrawionego DNA pUC19 w 1% żelu agarozowym zawierającym 1 μg/ml bromku etydyny przez 1 godzinę przy 95 V. 
	UWAGA: czas i napięcie będą się różnić w zależności od używanego sprzętu. </li>
	<li>Wizualizuj żel w świetle UV. Porównaj wielkość strawionego i niestrawionego DNA pUC19 (Rysunek 2) (patrz sekcja Analiza danych i wyniki). 
	Postępuj zgodnie z niezbędnymi krokami wymaganymi do zweryfikowania transformacji zgodnie z celem każdego konkretnego eksperymentu transformacji. </li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/10515/10515fig2.jpg"> 
Ryc. 2: Trawienie odzyskanego plazmidowego DNA z przekształconych komórek DH5α. Plazmidowe DNA odzyskano z przekształconych komórek DH5α, trawiono za pomocą HindIII, prowadzono w 1% żelu agarozowym i wizualizowano za pomocą źródła UV (kroki 2.19 do 2.22). 
3. Analiza danych i wyniki
Aby obliczyć wydajność transformacji, wskaźnik tego, jak dobrze komórki przyjęły zewnątrzkomórkowe DNA, należy policzyć kolonie uzyskane w transformacji:
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Rozcieńczenie</td>
			<td>Cfu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/100</td>
			<td>34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/10</td>
			<td>246</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Jednostki tworzące kolonie (cfu) liczone na podstawie eksperymentu transformacji. 
Wydajność przemiany (TE) jest miarą liczby jtk wynikającej z przekształcenia 1 μg plazmidu w daną objętość kompetentnych komórek. Na efektywność przemiany wpływa wiele parametrów: wielkość plazmidu, genotyp komórki, etap wzrostu podczas przygotowania kompetencji, metody transformacji itp.). Przy obliczaniu TE ważne jest, aby wziąć pod uwagę, jakie rozcieńczenie (jeśli w ogóle) zostało przeprowadzone przed posiewem i uwzględnić je w obliczeniach całkowitej liczby jtk. Sprawność transformacji (TE) oblicza się za pomocą następującego równania:
<img src="/files/ftp_upload/10515/10515eq1.jpg">
Najpierw podziel jtk przez μg DNA, w tym przykładzie 0,0001 μg. Następnie podziel wynik przez współczynnik rozcieńczenia. W tym przykładzie użyto rozcieńczenia 1/10 i posiano 100 μl 1 ml roztworu (rozcieńczenie: 1/10 × 100 μL /1000 μL=0,01). 
<img src="/files/ftp_upload/10515/10515eq2.jpg">

Transformacja to potężna metoda wprowadzania egzogennego DNA do komórek bakteryjnych, która ma kluczowe znaczenie dla wielu zastosowań biologii molekularnej w laboratorium. Ponadto odgrywa ważną rolę w przyrodzie, umożliwiając komórkom bakteryjnym wymianę materiału genetycznego, co może skutkować zwiększoną zmiennością genetyczną i umożliwiać nabycie różnych korzystnych cech dla przetrwania w szerokim zakresie warunków. Wiele szczepów bakteryjnych koduje geny niezbędne do naturalnej kompetencji. Jednak warunki, w których...

transformacja komórek e. coli przy użyciu dostosowanej procedury chlorku wapnia

Źródło: Natalia Martin1, Andrew J. Van Alst1, Rhiannon M. LeVeque1 i Victor J. DiRita1 
1 Wydział Mikrobiologii i Genetyki Molekularnej, Uniwersytet Stanowy Michigan
Bakterie mają zdolność do wymiany materiału genetycznego (kwasu dezoksyrybonukleinowego, DNA) w procesie znanym jako horyzontalny transfer genów. Włączenie egzogennego DNA zapewnia mechanizm, dzięki któremu bakterie mogą nabywać nowe cechy genetyczne, które pozwalają im przystosować się do zmieniających się warunków środowiskowych, takich jak obecność antybiotyków lub przeciwciał (1) lub cząsteczek znajdujących się w naturalnych siedliskach (2). Istnieją trzy mechanizmy horyzontalnego transferu genów: transformacja, transdukcja i koniugacja (3). Tutaj skupimy się na transformacji, zdolności bakterii do pobierania wolnego DNA ze środowiska. W laboratorium proces transformacji składa się z czterech głównych etapów: 1) Przygotowanie kompetentnych komórek, 2) Inkubacja kompetentnych komórek z DNA, 3) Odzyskiwanie komórek oraz 4) Posiewanie komórek w celu wzrostu transformantów (Rysunek 1). 
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/10515/10515fig1.jpg"> 
Rysunek 1: Ogólne etapy procesu transformacji. Proces transformacji składa się z czterech głównych etapów: 1) Przygotowanie kompetentnych komórek, 2) Inkubacja z DNA, 3) Odzyskiwanie komórek i 4) Posiewanie komórek do wzrostu transformantów. 
Aby doszło do transformacji, bakteria biorca musi znajdować się w stanie znanym jako kompetencja. Niektóre bakterie mają zdolność stawania się naturalnie kompetentnymi w odpowiedzi na określone warunki środowiskowe. Jednak wiele innych bakterii nie staje się kompetentnych w sposób naturalny lub warunki tego procesu są jeszcze nieznane. Zdolność do wprowadzania DNA do bakterii ma szereg zastosowań badawczych: do generowania wielu kopii cząsteczki DNA będącej przedmiotem zainteresowania, do ekspresji dużej ilości białek, jako składnik procedur klonowania i inne. Ze względu na wartość transformacji dla biologii molekularnej, istnieje kilka protokołów mających na celu sztuczne nadanie komórkom kompetencji, gdy warunki naturalnej kompetencji są nieznane. Do przygotowania sztucznie kompetentnych ogniw stosuje się dwie główne metody: 1) poprzez chemiczną obróbkę ogniw oraz 2) wystawienie ogniw na działanie impulsów elektrycznych (elektroporacja). Pierwsza z nich wykorzystuje różne substancje chemiczne w zależności od procedury, aby stworzyć przyciąganie między DNA a powierzchnią komórki, podczas gdy druga wykorzystuje pola elektryczne do generowania porów w błonie komórkowej bakterii, przez które mogą wchodzić cząsteczki DNA. Najbardziej efektywnym podejściem do kompetencji chemicznej jest inkubacja z kationami dwuwartościowymi, w szczególności wapnia (Ca2+) (4,5) Kompetencja indukowana wapniem to procedura, która zostanie tutaj opisana (6). Metoda ta jest stosowana głównie do transformacji bakterii Gram-ujemnych i na tym skupi się ten protokół. 
Procedura przemiany chemicznej obejmuje szereg etapów, w których komórki są wystawione na działanie kationów w celu wywołania kompetencji chemicznych. Po tych krokach następuje zmiana temperatury - szok termiczny - który sprzyja wchłonięciu obcego DNA przez kompetentną komórkę (7). Otoczki komórek bakteryjnych są naładowane ujemnie. W bakteriach Gram-ujemnych, takich jak Escherichia coli, błona zewnętrzna jest naładowana ujemnie ze względu na obecność lipopolisacharydu (LPS) (8). Powoduje to odpychanie podobnie ujemnie naładowanych cząsteczek DNA. W indukcji kompetencji chemicznej dodatnio naładowane jony wapnia neutralizują to odpychanie ładunku, umożliwiając absorpcję DNA na powierzchni komórki (9). Leczenie wapniem i inkubacja z DNA odbywają się na lodzie. Następnie przeprowadzana jest inkubacja w wyższych temperaturach (42°C), czyli szok cieplny. Ta nierównowaga temperaturowa dodatkowo sprzyja wychwytowi DNA. Komórki bakteryjne muszą znajdować się w środkowej fazie wzrostu wykładniczego, aby wytrzymać szok cieplny; W innych fazach wzrostu komórki bakteryjne są zbyt wrażliwe na ciepło, co powoduje utratę żywotności, co znacznie zmniejsza wydajność przemiany. 
Do transformacji można wykorzystać różne źródła DNA. Zazwyczaj plazmidy, małe okrągłe, dwuniciowe cząsteczki DNA, są używane do transformacji w większości procedur laboratoryjnych w E. coli. Aby plazmidy mogły pozostać w komórce bakteryjnej po transformacji, muszą zawierać początek replikacji. Pozwala to na ich replikację w komórce bakteryjnej niezależnie od chromosomu bakteryjnego. Nie wszystkie komórki bakteryjne ulegają transformacji podczas procedury transformacji. W ten sposób transformacja daje mieszaninę komórek przekształconych i komórek nieprzekształconych. Aby rozróżnić te dwie populacje, stosuje się metodę selekcji w celu identyfikacji komórek, które uzyskały plazmid. Plazmidy zwykle zawierają selektywne markery, które są genami kodującymi cechę, która daje przewagę dla wzrostu (tj. Odporność na antybiotyk lub substancję chemiczną lub ratunek przed auksotrofią wzrostu). Po transformacji komórki bakteryjne są posiewane na pożywkach selektywnych, co pozwala jedynie na wzrost transformowanych komórek. W przypadku komórek przekształconych plazmidem nadającym oporność na dany antybiotyk, pożywką selektywną będą pożywki wzrostowe zawierające ten antybiotyk. Można zastosować kilka różnych metod w celu potwierdzenia, że kolonie wyhodowane w pożywce selektywnej są transformantami (tj. mają włączony plazmid). Na przykład, plazmidy można odzyskać z tych komórek za pomocą metod przygotowania plazmidu (10) i trawić w celu potwierdzenia wielkości plazmidu. Alternatywnie, colony PCR może być użyty do potwierdzenia obecności plazmidu będącego przedmiotem zainteresowania (11). 
Celem tego eksperymentu jest przygotowanie E. coli DH5α kompetentnych chemicznie, przy użyciu adaptacji procedury chlorku wapnia (12) i przekształcenie ich za pomocą plazmidu pUC19 w celu określenia wydajności transformacji. Szczep E. coli DH5α jest powszechnie stosowanym szczepem w zastosowaniach biologii molekularnej. Ze względu na swój genotyp, a konkretnie recA1 i endA1, szczep ten pozwala na zwiększenie stabilności insercji i poprawę jakości plazmidowego DNA w kolejnych preparatach. Ponieważ wydajność transformacji spada wraz ze wzrostem rozmiaru DNA, plazmid pUC19 został użyty w tym protokole ze względu na jego mały rozmiar (2686 pz) (zobacz https://www.mobitec.com/cms/products/bio/04_vector_sys/standard_cloning_vectors.html dla mapy wektorowej). pUC19 nadaje oporność na ampicylinę, a zatem był to antybiotyk stosowany do selekcji.

Chociaż TE zależy od wielu czynników, niekomercyjne kompetentne preparaty komórkowe, takie jak ten, zwykle dają od 106 do 107 transformantów na mikrogram plazmidu. Dlatego ten preparat, przy TE = 2,46 x 108 jtk/μg, dał TE znacznie przekraczający oczekiwany zakres. Dostępne są dodatkowe protokoły do tworzenia superkompetentnych komórek, gdy dla danego zastosowania wymagana jest wyższa wydajność transformacji (13). 
<p class="jove_conten...

Transformacja komórek E. coli przy użyciu dostosowanej procedury chlorku wapnia

Source: Natalia Martin1, Andrew J. Van Alst1, Rhiannon M. LeVeque1, and Victor J. DiRita1
1 Department of Microbiology and Molecular Genetics, Michigan ...

Bakterie są niezwykle zdolne do adaptacji, a jednym z mechanizmów, który ułatwia tę adaptację, jest ich zdolność do przyjmowania zewnętrznych cząsteczek DNA. Jednym z rodzajów DNA, które bakterie mogą wychwytywać, jest plazmid, okrągły fragment DNA, który często zawiera przydatne informacje, takie jak geny oporności na antybiotyki. Proces modyfikowania bakterii przez nową informację genetyczną włączoną z zewnętrznego źródła jest określany jako transformacja. Transformację można łatwo przeprowadzić w laboratorium przy użyciu Escherichia coli lub E. coli. Aby komórki E. coli mogły zostać przekształcone, muszą najpierw stać się kompetentne, co oznacza, że są zdolne do pobierania cząsteczek DNA ze swojego środowiska. Protokół osiągnięcia tego celu jest zaskakująco prosty, krótka inkubacja komórek w roztworze chlorku wapnia. Ta inkubacja powoduje, że komórki stają się przepuszczalne dla cząsteczek DNA. Po granulowaniu komórek przez odwirowanie supernatant jest usuwany. Plazmidowe DNA jest teraz dodawane do właściwych komórek. Po inkubacji komórek z DNA, mieszanina jest krótko podgrzewana do 42 stopni Celsjusza, a następnie szybko schładzana na lodzie. Ten szok cieplny powoduje, że DNA jest przenoszone przez ścianę i błony komórkowe. Komórki są następnie inkubowane w świeżych pożywkach. Następnie bakterie umieszcza się pod kątem 37 stopni, aby umożliwić im ponowne uszczelnienie błon i ekspresję opornych białek. Te komórki, które przyjęły plazmidy, będą wiernie kopiować DNA i przekazywać je swojemu potomstwu oraz wyrażać wszelkie białka, które mogą być przez nie kodowane, w tym mediatory oporności na antybiotyki. Te geny oporności mogą być wykorzystane jako selektywne markery do identyfikacji bakterii, które zostały pomyślnie przekształcone, ponieważ komórki, które nie wchłonęły plazmidu, nie będą wyrażać produktu genu oporności. Oznacza to, że gdy komórki są posiewane na stałym podłożu, które zawiera odpowiedni antybiotyk, będą rosły tylko komórki, które wchłonęły plazmid. Transformację komórek w rosnącej kolonii można dodatkowo potwierdzić poprzez hodowlę tych komórek w płynnych pożywkach przez noc w celu zwiększenia wydajności przed ekstrakcją DNA z próbki. Po wyizolowaniu DNA można przeprowadzić diagnostyczne trawienie enzymu restrykcyjnego. Ponieważ enzymy restrykcyjne tną DNA w przewidywalnych miejscach, przeprowadzenie tych trawień na żelu powinno wykazać przewidywalny wzór, jeśli pożądany plazmid został pomyślnie przekształcony. Na przykład, jeśli pUC19 zostanie przygotowany i pocięty enzymem restrykcyjnym HindIII, na żelu powinno być widoczne pojedyncze pasmo 2686 nukleotydów. W tym laboratorium przekształcisz szczep E. coli DH-5 Alpha z pUC19, a następnie potwierdzisz udaną transformację za pomocą elektroforezy żelowej DNA. Przed przystąpieniem do zabiegu należy założyć odpowiednie środki ochrony osobistej, w tym fartuch laboratoryjny i rękawice. Następnie wysterylizuj miejsce pracy 70% etanolem. Teraz przygotuj chemicznie kompetentne komórki, umieszczając pętlę pełną bakterii na sterylnej płytce agarowej LB i nakładając na bakterie nową pętlę. Następnie inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc. Następnego dnia ponownie wysterylizuj blat stołu 70% etanolem i wyjmij płytkę z inkubatora. Zaszczep pojedynczą, dobrze odizolowaną kolonię w 3 mililitrach bulionu LB w probówce ze sterylną pętlą. Następnie hoduj kulturę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc, wstrząsając przy 210 obr./min. Następnego dnia zmierz gęstość optyczną nocnej hodowli za pomocą spektrofotometru. Następnie dodaj 100 mililitrów bulionu LB do jednolitrowej kolby i zaszczep ją kulturą przez noc o gęstości optycznej 0. 01. Teraz inkubuj kulturę w temperaturze 37 stopni Celsjusza, potrząsając i sprawdzaj OD600 co 15 do 20 minut, aż kultura osiągnie połowę fazy wzrostu wykładniczego. Po około trzech godzinach przenieś 50 mililitrów kultury do dwóch lodowatych butelek polipropylenowych. Następnie umieść butelki z powrotem na lodzie na 20 minut, aby ostygły. Następnie odzyskaj komórki przez odwirowanie. Wyrzuć supernatanty i umieść butelki do góry dnem na ręczniku papierowym. Następnie ponownie zawieś osad bakteryjny w pięciu mililitrach lodowatego roztworu chlorku wapnia i magnezu i ostrożnie obracaj, aż osad całkowicie się rozpuści. Następnie dodaj kolejne 25 mililitrów roztworu do rozpuszczonego osadu bakteryjnego. Zawiesić drugi osad bakteryjny, jak wykazano wcześniej. Następnie powtórzyć wirowanie i usunąć supernatanty. Jeśli kompetentne komórki mają zostać bezpośrednio przekształcone, ponownie zawieś każdą osadkę bakteryjną w dwóch mililitrach lodowatego roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 mola, ostrożnie obracając probówki. Aby rozpocząć procedurę transformacji, przenieś 50 mikrolitrów kompetentnych komórek do dwóch oznakowanych 1,5 mililitrowych probówek polipropylenowych. Następnie dodaj jeden mikrolitr plazmidowego DNA pUC19 do jednej z probówek. Delikatnie wymieszaj, unikając tworzenia się pęcherzyków, i inkubuj obie probówki przez 30 minut na lodzie. Po inkubacji przenieś probówki do bloku grzewczego i inkubuj w temperaturze 42 stopni Celsjusza przez 45 sekund. Natychmiast przenieś probówki do lodu i inkubuj przez dwie minuty. Teraz dodaj 950 mikrolitrów pożywki SOC do każdej probówki i inkubuj je przez godzinę w temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby umożliwić bakteriom regenerację i ekspresję markera oporności na antybiotyki zakodowanego w plazmidzie. Aby uzyskać rozcieńczenie od 1 do 100, dodaj 990 mikrolitrów pożywki SOC i 10 mikrolitrów zawiesiny komórkowej do probówki o pojemności 1,5 mililitra. Następnie rozcieńczyć od 1 do 10, dodając 900 mikrolitrów pożywki SOC i 100 mikrolitrów zawiesiny komórkowej do probówki o pojemności 1,5 mililitra. Następnie rozłożyć 100 mikrolitrów rozcieńczonych zawiesin komórkowych i 100 mikrolitrów kontroli ujemnej na oddzielnych selektywnych płytkach zawierających ampicylinę za pomocą rozsiewacza i inkubować płytki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 12 do 16 godzin. Po inkubacji policz jednostki tworzące kolonie lub CFU na płytkę uzyskaną w wyniku transformacji i zapisz te dane. Aby sprawdzić, czy transformanty mają plazmid pUC19, wybierz pojedynczą, dobrze odizolowaną kolonię z płytki ze sterylną pętlą i wprowadź ją do probówki zawierającej 3 mililitry bulionu LB. Następnie inkubuj kulturę w temperaturze 37 stopni Celsjusza, wstrząsając przez noc. Następnego dnia użyj mini zestawu do przygotowania DNA, aby wyizolować DNA z 3 mililitrów kultury, zgodnie z instrukcjami producenta. Po zakończeniu mini przygotowania DNA trawić 1 mikrogram oczyszczonego pUC19 za pomocą enzymu restrykcyjnego w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 1 godzinę. Teraz załaduj 20 mikrolitrów drabinki o masie cząsteczkowej, 1 mikrogram strawionego plazmidowego DNA i 1 mikrogram niestrawionego plazmidowego DNA do kolejnych dołków 1% żelu agarozowego zawierającego 1 mikrogram na mililitr bromku etydyny. Następnie uruchom żel na 1 godzinę przy napięciu 95 woltów. Na koniec zwizualizuj żel za pomocą rozświetlacza UV. W tym eksperymencie chemicznie kompetentne komórki E. coli DH5 Alpha przygotowano przy użyciu adaptacji procedury chlorku wapnia, a następnie przekształcono plazmidem pUC19 w celu określenia wydajności transformacji. Aby obliczyć wydajność transformacji, należy użyć zarejestrowanych liczb CFU dla rozcieńczeń 1 na 100 i 1 na 10 oraz wszelkich innych rozcieńczeń z liczbą CFU między 30 a 300. Po pierwsze, zarejestrowana liczba CFU, 246 w tym przykładzie, jest dzielona przez ilość DNA, 0,0001 mikrograma, która została pokryta. Następnie liczbę tę dzieli się przez współczynnik rozcieńczenia użyty do uzyskania wydajności przemiany w jtk na mikrogram. W tym przykładzie zastosowano rozcieńczenie od 1 do 10 i platerowano 100 mikrolitrów roztworu o objętości 1 mililitra, uzyskując końcowy współczynnik rozcieńczenia 0,01. W niestrawionym pasie plazmidowym koliste DNA może wyglądać jak dwa lub trzy różne pasma o różnej jasności. Dzieje się tak, ponieważ okrągłe, nieoszlifowane DNA może istnieć w kilku różnych stanach konformacji, takich jak superskręcony, otwarty okrąg lub bardziej liniowy, a każdy z nich porusza się w żelu z różną prędkością. Analiza trawienia DNA odzyskanego plazmidu wykazała, że zastosowany plazmid ma oczekiwany rozmiar DNA pUC19, 2 686 par zasad.

Education

JoVE Science Education

Advanced Biology

Biologia zaawansowana

Microbiology

Mikrobiologia

calcium chloride dna uptake in e. coli

Calcium chloride treatment can help E. coli take up foreign DNA. This chemical transformation method is used in molecular biology to move a plasmid into bacterial cells and then identify the cells that received it. The protocol described here uses chemically competent E. coli DH5α cells and the plasmid pUC19 to measure transformation efficiency.

Bacteria can exchange genetic material through horizontal gene transfer. The three main routes are transformation, transduction, and conjugation. Transformation is the process in which bacteria take up free DNA from the environment. In the lab, it usually includes four steps: preparing competent cells, mixing cells with DNA, recovering the cells, and plating them so transformants can grow.

For transformation to occur, cells must be competent, which means they can take in DNA. Some bacteria become naturally competent under certain conditions. Others do not, or the conditions are not known. For that reason, scientists often make cells artificially competent. Two common approaches are chemical treatment and electroporation, which uses electric pulses to open pores in the cell membrane.

This protocol uses calcium ions, especially Ca2+, to create chemical competence. It is mainly used with Gram-negative bacteria. E. coli cells and their outer membrane carry negative charge, and DNA is also negatively charged. Calcium helps neutralize this repulsion so DNA can attach to the cell surface. The cells and DNA are kept on ice during this step, and then a heat shock at 42°C helps drive DNA into the cells.

The cells must be in mid-exponential growth phase before heat shock. At other growth stages, they are more sensitive to heat and may lose viability. That lowers transformation efficiency. The DNA used for transformation is usually a plasmid, which is a small circular double-stranded DNA molecule. To stay in the cell after transformation, the plasmid must have an origin of replication so it can copy itself independently of the bacterial chromosome.

Not every cell becomes transformed, so the result is a mix of transformed and non-transformed cells. To find the cells that received the plasmid, the procedure uses selection. Plasmids often carry selectable markers, such as antibiotic resistance genes or genes that rescue a growth need. After transformation, the cells are plated on selective media. In this case, the media contains ampicillin, which allows only the transformed cells to grow.

Calcium Chloride DNA Uptake in E. coli

creating a winogradsky column: a method to enrich the microbial species in a sediment sample

creating-winogradsky-column-method-to-enrich-microbial-species

Winogradsky Column Microbial Layers and Gradients

A Winogradsky column shows how microbial layers form in mud and water over time. It is a clear, enclosed ecosystem that helps scientists grow sediment microbes that are hard to culture in a test tube or on a petri dish. By keeping conditions close to a microbe’s natural habitat, the column makes it possible to study organisms that help drive Earth’s biogeochemical cycles. The column is built from pond or wetland sediment mixed with water in a transparent container. Extra sources of carbon,...

serial dilutions and plating: microbial enumeration

serial-dilutions-and-plating-microbial-enumeration

Counting Bacteria with Dilution Plates

Counting bacteria with dilution plates helps microbiologists estimate how many cells are in a sample. Because bacteria can grow quickly and may be hard to count directly, serial dilution and plating make the concentration easier to measure. These methods have been used for more than a century to study bacterial and viral loads in clinical, industrial, pharmaceutical, and academic labs. Serial dilution reduces a sample in steps. A small volume of the original solution is moved into a fixed...

enrichment cultures: culturing aerobic and anaerobic microbes on selective and differential medias

enrichment-cultures-culturing-aerobic-anaerobic-microbes-on-selective

Selective Media for Bacterial Isolation

Selective media help scientists isolate bacteria by supporting some microbes and blocking others. This lab also uses differential media, which reveal a visible chemical trait in the organism being grown. Together, these methods help identify bacteria from mixed samples. Prokaryotic cells live in almost every environment on Earth. They also show wide metabolic diversity, so the growth medium must supply the molecules they need for energy. Some microbes are extremophiles, meaning they live in...

pure cultures and streak plating: isolation of single bacterial colonies from a mixed sample

pure-cultures-streak-plating-isolation-single-bacterial-colonies-from

Streak Plate Method for Isolating Bacteria

The streak plate method is used to isolate single bacterial colonies from a mixed sample. It helps separate one bacterial type from another so a pure culture can be grown. This is important in both clinical and research settings, where bacteria often grow together in mixed cultures. Pure cultures are needed for later genetic and protein studies. They are also used to check whether a sample is pure and to identify infectious agents from clinical samples. Because different strains can affect...

16s rrna sequencing: a pcr-based technique to identify bacterial species

16s-rrna-sequencing-pcr-based-technique-to-identify-bacterial

Bacterial ID with 16S rRNA Gene Sequencing

Bacterial identification with 16S rRNA gene sequencing helps scientists tell bacterial species apart. It is used in microbial ecology to study biodiversity in environmental samples and in medical microbiology to help diagnose infected patients. Traditional methods include microscopy, growth on specific media, biochemical and serological tests, and antibiotic sensitivity assays. Molecular methods have changed how bacteria are identified. 16S ribosomal RNA (rRNA) gene sequencing is often faster...

growth curves: generating growth curves using colony forming units and optical density measurements

growth-curves-generating-growth-curves-using-colony-forming-units

Bacterial Growth Stages and Cell Counts

Bacterial growth stages and cell counts show how a culture changes over time. This page follows a batch culture as it moves through lag, exponential, stationary, and death phases. It also shows how colony forming units, or CFU, and optical density can be used to measure that growth. Lag phase is the time bacteria need to adjust to a new environment before fast division begins. During exponential phase, cells grow and divide at the fastest rate, and DNA replication, RNA transcription, and...

antibiotic susceptibility testing: epsilometer tests to determine mic values of two antibiotics and evaluate antibiotic synergy

antibiotic-susceptibility-testing-epsilometer-tests-to-determine-mic

Measuring Bacterial Resistance with E-Tests

Measuring bacterial resistance with E-tests helps show how strongly an antibiotic can stop growth. The method is used to find the minimal inhibitory concentration, or MIC, which is the lowest antibiotic level that prevents visible bacterial growth. It is a practical way to study resistance in bacteria and compare how different antibiotics perform. The E-test uses a plastic strip that contains a built-in antibiotic gradient. The strip is placed on an agar plate that has been inoculated with...

microscopy and staining: gram, capsule, and endospore staining

microscopy-and-staining-gram-capsule-and-endospore-staining

Bacterial Stains for Cell Walls and Spores

Bacterial stains help scientists see cell walls, capsules, and endospores with a compound light microscope. Many bacteria are hard to tell apart with light alone because they are small, colorless, and can look similar under the lens. Staining makes these hidden features visible and helps identify different bacteria. A compound microscope uses more than one lens to magnify a sample. Its objective lens collects light near the specimen, and the eyepiece enlarges the image. Many compound...

plaque assay: a method to determine viral titer as plaque forming units (pfu)

plaque-assay-method-to-determine-viral-titer-as-plaque-forming-units

Phage Plaque Test for Counting Viruses

Bacteriophages, or phages, are viruses that infect prokaryotic cells. The plaque assay is a classic way to count these viruses by measuring viral titer, which is the amount of virus in a sample. It was first described in 1952 and is still one of the most reliable methods for determining viral titer. Phages were identified in the early 20th century by Twort and d'Hérelle. They have since been recognized for their therapeutic value and for their role in human and global ecosystems. Interest in...

transformation of e. coli cells using an adapted calcium chloride procedure

Calcium chloride treatment can help E. coli take up foreign DNA. This chemical transformation method is used in molecular biology to move a plasmid into bacterial cells and then identify the cells that received it. The protocol described here uses chemically competent E. coli DH5α cells and the plasmid pUC19 to measure transformation efficiency. Bacteria can exchange genetic material through horizontal gene transfer. The three main routes are transformation, transduction, and conjugation.

conjugation: a method to transfer ampicillin resistance from donor to recipient e. coli

conjugation-method-to-transfer-ampicillin-resistance-from-donor-to

Bacterial Gene Transfer by Conjugation in E. coli

Bacterial conjugation is a form of horizontal gene transfer in E. coli that moves DNA from one cell to another through direct contact. It was first discovered by Lederberg and Tatum in 1946. Unlike transformation or transduction, conjugation is a natural, one-way transfer of DNA from a donor cell to a recipient cell. This process can increase bacterial genetic diversity. It is often described as a type of bacterial mating. It has also helped drive the spread of antibiotic-resistant bacteria.

phage transduction: a method to transfer ampicillin resistance from donor to recipient e. coli

phage-transduction-method-to-transfer-ampicillin-resistance-from

Using P1 Phage to Move Antibiotic Resistance in E. coli

Bacteriophage transduction moves DNA between bacteria by using a phage, or bacterial virus, as the carrier. In this process, a phage can deliver genetic material from one bacterium to another. The method is a form of horizontal gene transfer and is important in both bacterial evolution and laboratory genetics. Phages were first described in the early 1900s, and transduction was named in 1951 by Norton Zinder and Joshua Lederberg. The transcript describes two main phage classes. Lytic phages...

microbiology

This collection demonstrates the key tools of microbiological investigation, including proper sterile technique and plating, how to use selective media and enrich samples, and culturing methods for mixed or pure samples. Additionally, it looks at common methods for identifying microbial isolates, as well as procedures for the genetic manipulation of bacteria.

See how calcium chloride makes E. coli competent for DNA uptake, then use heat shock and ampicillin selection to identify transformants.

Calcium Chloride DNA Uptake in E. coli | JoVE K12

Natalia Martin

Andrew J. Van Alst

Rhiannon M. LeVeque

Victor J. DiRita

Department of Microbiology and Molecular Genetics

Michigan State University

Concepts

Performing the Experiment

Results

Genetic Lingo

Overview

An organism is diploid if it inherits two variants, or alleles, of each gene, one from each parent. These two alleles constitute the genotype ...

Punnett Squares

Overview

A Punnett square displays the possible genotypes offspring can inherit from two parental genotypes. If a trait&#x2019;s inheritance pattern ...

Monohybrid Crosses

Overview

In the 1850s and 1860s, Gregor Mendel investigated inheritance by performing monohybrid crosses in pea plants. He crossed two plants that were ...

Dihybrid Crosses

Overview

To determine whether traits are inherited together or separately, Gregor Mendel crossed pea plants that differed in two traits. These parental ...

Law of Segregation

When crossing pea plants, Mendel noticed that one of the parental traits would sometimes disappear in the first generation of offspring, called the F1 ...

Law of Independent Assortment

While Mendel&#x2019;s Law of Segregation states that the two alleles for one gene are separated into different gametes, a different question of how ...

Test Cross

Alleles are different forms of the same gene. Humans and other diploid organisms inherit two alleles of every gene, one from each parent.

An allele is ...

Pedigree Analysis

Overview

A pedigree is a diagram displaying a family&#x2019;s history of a trait. Analyzing pedigrees can reveal (1) whether a trait is dominant or ...

Use Mendel's laws of segregation and independent assortment to analyze patterns of inheritance.

SC.912.L.16.1

Trihybrid Crosses

Trihybrid Crosses
Some of Mendel&#8217;s crosses examined three pairs of contrasting characteristics. Such a cross is called a trihybrid cross. A ...

Chi-square Analysis

The chi-square test is a statistical hypothesis test. It is used to check whether there is a significant difference between an expected value and an ...

Multiple Allele Traits

Incomplete Dominance

Gregor Mendel&#39;s work (1822 - 1884) was primarily focused on pea plants. Through his initial experiments, he determined that every gene in a diploid ...

Lethal Alleles

Agouti: A Lethal Allele
Lucien Cu&#233;not discovered lethal alleles in 1905 while studying the inheritance of coat color in mice. The agouti gene is ...

Polygenic Traits

background-and-environment-affect-phenotype

Background and Environment Affect Phenotype

Although the genetic makeup of an organism plays a major role in determining the phenotype, there are also several environmental factors, such as ...

Discuss observed inheritance patterns caused by various modes of inheritance, including dominant, recessive, codominant, sex-linked, polygenic, and multiple alleles.

SC.912.L.16.2

Base-pairing and DNA Repair

The DNA Replication Fork

Lagging Strand Synthesis

The Replisome

Proofreading

Synthesis of new DNA molecules is carried out by the enzyme DNA polymerase, which adds nucleotides on the daughter strand complementary to the template ...

Replication in Prokaryotes

DNA replication has three main steps: initiation, elongation, and termination. Replication in prokaryotes begins when initiator proteins bind to the ...

Replication in Eukaryotes

In eukaryotic cells, DNA replication is highly conserved and tightly regulated. Multiple linear chromosomes must be duplicated with high fidelity before ...

Describe the basic process of DNA replication and how it relates to the transmission and conservation of the genetic information.

SC.912.L.16.3

The DNA Helix

Deoxyribonucleic acid, or DNA, is the genetic material responsible for passing traits from generation to generation in all organisms and most viruses. DNA ...

Mutations

Mutations are changes in the sequence of DNA. These changes can occur spontaneously or they can be induced by exposure to environmental factors. Mutations ...

Mutation, Gene Flow, and Genetic Drift

In a population that is not at Hardy-Weinberg equilibrium, the frequency of alleles changes over time. Therefore, any deviations from the five conditions ...

Explain how mutations in the DNA sequence may or may not result in phenotypic change. Explain how mutations in gametes may result in phenotypic changes in offspring.

SC.912.L.16.4

What is Gene Expression?

A gene is a stretch of DNA that serves as the blueprint for functional RNAs and proteins. Since DNA is comprised&#160; of nucleotides and proteins are ...

RNA Structure

The basic structure of RNA consists of a string of ribonucleotides attached by phosphodiester bonds. Although most RNA is single-stranded, it can form ...

Types of RNA

Three main types of RNA are involved in protein synthesis: messenger RNA (mRNA), transfer RNA (tRNA), and ribosomal RNA (rRNA). These RNAs perform diverse ...

Transcription

Transcription is the synthesis of RNA from a DNA sequence by RNA polymerase. It is the first step in producing a protein from a gene sequence. ...

Bacterial RNA Polymerase

Eukaryotic RNA Polymerases

General Transcription Factors

Tissue-specific transcription factors contribute to diverse cellular functions in mammals. For example, the gene for beta globin, a major component of ...

RNA Polymerase II Accessory Proteins

Transcription Elongation Factors

pre-mrna-processing-modification-of-pre-mrna-ends

Pre-mRNA Processing: Modification of pre-mRNA Ends

In eukaryotic cells, transcripts made by RNA polymerase are modified and processed before exiting the nucleus. Unprocessed RNA is called precursor mRNA or ...

Pre-mRNA Processing: RNA Splicing

Transfer RNA Synthesis

Ribosomal RNA Synthesis

The Nucleolus

Additional Subnuclear Structures

Translation

Translation is the process of synthesizing proteins from the genetic information carried by messenger RNA (mRNA). Following transcription, it constitutes ...

Ribosomes

Ribosomes translate genetic information encoded by messenger RNA (mRNA) into proteins. Both prokaryotic and eukaryotic cells have ribosomes. Cells that ...

tRNA Activation

Initiation of Translation

Termination of Translation

Improving Translational Accuracy

Nonsense-mediated mRNA Decay

Molecular Chaperones and Protein Folding

The Proteasome

Regulated Protein Degradation

Proteins: From Genes to Degradation

Explain the basic processes of transcription and translation, and how they result in the expression of genes.

SC.912.L.16.5

Chromatin Structure and RNA Splicing

Alternative RNA Splicing

Nuclear Export of mRNA

Discuss the mechanisms for regulation of gene expression in prokaryotes and eukaryotes at transcription and translation level.

SC.912.L.16.6

Molecular Cloning

Molecular cloning is a set of methods, which are used to insert recombinant DNA into a vector - a carrier of DNA molecules that will replicate recombinant ...

An Overview of Genetic Engineering

Genetic engineering &#8211; the process of purposefully altering an organism&#8217;s DNA &#8211; has been used to create powerful research tools and model ...

Recombineering and Gene Targeting

One of the most widely used tools in modern biology is molecular cloning with restriction enzymes, which create compatible ends between DNA fragments that ...

bacterial-transformation-the-heat-shock-method

Bacterial Transformation: The Heat Shock Method

Transformation is the process that occurs when a cell ingests foreign DNA from its surroundings. Transformation can occur in nature in certain types of ...

Bacterial Transformation: Electroporation

The term &#x201C;transformation&#x201D; refers cellular ingestion of foreign DNA.  In nature, transformation can occur in certain types of bacteria.  In ...

An Introduction to Transfection

Transfection is the process of inserting genetic material, such as DNA and double stranded RNA, into mammalian cells. The insertion of DNA into a cell ...

Conjugation: A Method to Transfer Ampicillin Resistance from Donor to Recipient E. coli

Source: Alexander S. Gold1, Tonya M. Colpitts1
1 Department of Microbiology, Boston University School of Medicine, National Emerging Infections Diseases ...

Phage Transduction: A Method to Transfer Ampicillin Resistance from Donor to Recipient E. coli

CRISPR

Bacterial Transformation

Background

In early 20th century, pneumonia was accountable for a large portion of infectious disease deaths1. In order to develop an effective vaccine ...

Bacterial Transformation
ExpandFirst, ensure that each student or student group has a filled ice bucket.
Then, set up a tube rack for each work station.
...

Bacterial Transformation
ExpandIMPORTANT: In addition to wearing the appropriate personal protective equipment, be sure to take care to keep your face ...

Describe how viruses and bacteria transfer genetic material between cells and the role of this process in biotechnology.

A. DNA stores and transmits genetic information. Genes are sets of instructions encoded in the structure of DNA.

B. Genetic information is passed from generation to generation by DNA in all organisms and accounts for similarities in related individuals.

C. Manipulation of DNA in organisms has led to commercial production of biological molecules on a large scale and genetically modified organisms.

D. Reproduction is characteristic of living things and is essential for the survival of species.

Calcium Chloride DNA Uptake in E. coli

Description

Transcript

Tags

More videos by Standards