Technika różnicującego barwienia

Barwienie różnicowe pozwala na rozróżnienie mikroorganizmów na podstawie właściwości ściany komórkowej, co pomaga w identyfikacji i klasyfikacji bakterii.

Barwienie metodą Grama klasyfikuje bakterie jako Gram-dodatnie lub Gram-ujemne ze względu na ich zdolność do zatrzymywania fioletu krystalicznego po odbarwieniu alkoholowym.

Cienka plama kultury drobnoustrojów jest rozprowadzana na szkiełku, suszona na powietrzu i utrwalana na gorąco.

Rozmaz barwi się fioletem krystalicznym, przemywa wodą i poddaje działaniu jodu, tworząc kompleks fioletowo-krystaliczny.

Alkohol służy do odbarwiania tego rozmazu, aż spływ będzie czysty, a następnie spłukuje się wodą.

Bakterie Gram-dodatnie zachowują fioletową plamę dzięki grubej warstwie peptydoglikanu.

Natomiast bakterie Gram-ujemne tracą fioletową plamę, gdy alkohol narusza zewnętrzną błonę i zmywa kompleks krystalicznego fioletu i jodu.

Safranina jest stosowana do przeciwdziałania barwieniu bakterii Gram-ujemnych na różowo, podczas gdy bakterie Gram-dodatnie pozostają fioletowe.

Barwienie kwasoodporne wykrywa Mycobacterium gatunków, których woskowe, bogate w kwas mykolowy ściany komórkowe są odporne na odbarwienie.

Bakterie kwasoodporne zachowują fuksynę karbolową, czerwony barwnik, podczas gdy komórki nieodporne na kwasy są zwykle barwione błękitem metylenowym.