Badanie agresji u Drosophila (muszek owocówek)

Streszczenie

Agresja jest wrodzonym zachowaniem, które ewoluowało w ramach obrony lub pozyskiwania zasobów. To złożone zachowanie społeczne jest kształtowane przez czynniki genetyczne, hormonalne i środowiskowe. U wielu organizmów agresja jest kluczowa dla przetrwania, jednak kontrolowanie i tłumienie agresji w określonych kontekstach staje się coraz bardziej istotne. W ostatnich latach bezkręgowce stają się coraz bardziej użyteczne jako systemy modelowe do badania genetycznych i systemowo-biologicznych podstaw złożonych zachowań społecznych. Wynika to częściowo z różnorodnego repertuaru zachowań przejawianych przez te organizmy. W towarzyszącym filmie przedstawiamy metodę analizy agresji u Drosophila, której projekt uwzględnia istotne ograniczenia eko-etologiczne. Szczegóły obejmują kroki dotyczące: wykonania komory walki, izolowania i malowania much, umieszczania much w komorze walki oraz nagrywania walk. Podejście to jest obecnie wykorzystywane do identyfikacji genów kandydackich istotnych dla agresji oraz do opracowania obwodów neuronalnych, które leżą u podstaw przejawiania agresji i innych zachowań społecznych.

Protokół

1. Montaż ścianek komory

1. Należy wziąć dwa zwykłe szkiełka przedmiotowe, zaznaczyć środek na obu krawędziach, a następnie, posługując się linijką z prostą krawędzią jako prowadnicą, naciąć szkło przecinakiem diamentowym.
2. Przesuwaj przecinak diamentowy w przód i w tył kilka razy, aż usłyszysz dźwięk skrobania.
3. Umyć szkło, a następnie, trzymając je za pomocą dwóch ręczników papierowych nad pojemnikiem na stłuczone szkło, przyłożyć delikatny nacisk w pobliżu nacięcia od strony nacięcia.
   skierowanym od siebie, aby przełamać szkiełko na dwie połowy.
4. Obficie nałożyć klej do szkła wzdłuż krawędzi jednego kawałka szkła, a następnie docisnąć do niego drugi kawałek szkła pod kątem prostym. Położyć całość na płaskiej powierzchni (folii aluminiowej, papierze woskowanym lub zwykłym papierze) i pozostawić do utwardzenia na co najmniej godzinę.
5. Po godzinie powtórz etap nakładania kleju w celu utworzenia kwadratowej komory i pozostaw do utwardzenia na noc.
   
   
   

2. Umieszczanie ścianek w szalce Petriego

1. Wziąć pokrywkę szalki Petriego i wypełnić ją do głębokości co najmniej 5 mm podgrzanym 2% roztworem agarozy (agarozę w wodzie dejonizowanej należy podgrzewać w mikrofalówce do całkowitego rozpuszczenia).
2. Odczekać kilka minut, a następnie, gdy agaroza jest wciąż w stanie płynnym, umieścić ścianki komory w centrum szalki. Wziąć dno szalki Petriego i położyć je stroną dolną do góry. Za pomocą rozgrzanej w płomieniu prostej igły sekcyjnej wykonać w centrum szalki zestaw małych otworów (> 1 mm) w celu zapewnienia wentylacji. Wykonać jeden większy otwór (średnica ~ 4 mm) nieco z boku, aby umożliwić wprowadzanie much do komory. Większy otwór zakleić kawałkiem usuwalnej taśmy etykietującej.
   
   
   
   
   
   
   

3. Przygotowanie naczynia z pożywką

1. Podgrzać fiolkę z pożywką dla muszek do momentu, aż pożywka się roztopi. Za pomocą pipety Pasteura przenieść pożywkę do fiolki scyntylacyjnej, wypełniając ją tak, aby na górze utworzyła się płaska powierzchnia. Należy uważać, aby nie powstały pęcherzyki powietrza, a następnie pozostawić do ostygnięcia.
2. Przygotować świeżą pastę drożdżową, ucierając niewielką ilość suchych drożdży z kilkoma kroplami wody w moździerzu z tłuczkiem. Dodawać więcej drożdży lub wody, aż konsystencja będzie na tyle gęsta, by można było nabrać wykałaczką małą, widoczną kroplę i nanieść ją na środek powierzchni pożywki.
3. Umieścić fiolkę z pożywką w centrum komory, a na górze komory położyć dno szalki Petriego, odwrócone tak, aby boki były skierowane do góry i nie zasłaniały widoku. Do wnętrza komory wprowadzić za pomocą aspiratora dwie muszki w wieku 3-5 dni przez większy otwór w górnej części. Otwór ten zakleić taśmą, a do górnej szalki włożyć kawałek czarnego papieru filtracyjnego z wyciętym otworem o średnicy 2 cm.
4. Nad komorą ustawić lampkę biurkową w odległości wystarczającej, aby nie nagrzewała ona komory, oraz w pozycji zapewniającej oświetlenie powierzchni pożywki. Cały zestaw najlepiej umieścić w środowisku o wysokiej wilgotności i temperaturze 22-25°C.
   
   
   

4. Rozpocznij nagrywanie wideo przez przednią ściankę komory, gdy obie muchy znajdą się na powierzchni pożywki.