Badanie agresji u Drosophila (muszek owocówek)

Streszczenie

Agresja jest wrodzonym zachowaniem, które ewoluowało w ramach obrony lub pozyskiwania zasobów. To złożone zachowanie społeczne jest kształtowane przez czynniki genetyczne, hormonalne i środowiskowe. U wielu organizmów agresja jest kluczowa dla przetrwania, jednak kontrolowanie i tłumienie agresji w określonych kontekstach staje się coraz bardziej istotne. W ostatnich latach bezkręgowce stają się coraz bardziej użyteczne jako systemy modelowe do badania genetycznych i systemowo-biologicznych podstaw złożonych zachowań społecznych. Wynika to częściowo z różnorodnego repertuaru zachowań przejawianych przez te organizmy. W towarzyszącym filmie przedstawiamy metodę analizy agresji u Drosophila, której projekt uwzględnia istotne ograniczenia eko-etologiczne. Szczegóły obejmują kroki dotyczące: wykonania komory walki, izolowania i malowania much, umieszczania much w komorze walki oraz nagrywania walk. Podejście to jest obecnie wykorzystywane do identyfikacji genów kandydackich istotnych dla agresji oraz do opracowania obwodów neuronalnych, które leżą u podstaw przejawiania agresji i innych zachowań społecznych.

Protokół

1. Montaż ścian komory

1. Należy wziąć dwa zwykłe szkiełka przedmiotowe, zaznaczyć środek na obu krawędziach, a następnie, posługując się linijką z prostą krawędzią jako prowadnicą, naciąć szkło przecinarką diamentową.
2. Przesuń przecinak diamentowy w przód i w tył kilka razy, aż usłyszysz dźwięk skrobania.
3. Umyć szkło, a następnie, trzymając je za pomocą dwóch ręczników papierowych nad pojemnikiem na szkło potłuczone, przyłożyć delikatny nacisk w pobliżu nacięcia, po stronie naciętej.
   odwróconą od siebie, aby przełamać szkiełko na dwie połowy.
4. Obficie nałóż klej do szkła wzdłuż krawędzi jednego kawałka szkła, a następnie dociśnij drugi kawałek szkła do kleju pod kątem prostym względem pierwszego. Połóż całość na płaskiej powierzchni (folii aluminiowej, papierze woskowanym lub zwykłym papierze) i pozostaw do zastygnięcia na co najmniej godzinę.
5. Po godzinie powtórzyć etap nakładania kleju w celu utworzenia kwadratowej komory i pozostawić do utwardzenia na noc.
   
   
   

2. Umieszczanie ścianek w czarce Petriego

1. Nalać do górnej części szalki Petriego podgrzany roztwór 2% agarozy do głębokości co najmniej 5 mm (agarozę w wodzie dejonizowanej należy podgrzewać w mikrofalówce do całkowitego rozpuszczenia).
2. Odczekać kilka minut, a następnie, gdy agaroza jest wciąż w stanie rozpuszczonym, umieścić ścianki komory w centrum szalki. Wziąć dolną część szalki Petriego i położyć ją dnem do góry. Za pomocą rozgrzanej w płomieniu prostej igły sekcyjnej wykonać w centrum szalki zestaw małych otworów (> 1mm) w celu zapewnienia wentylacji. Wykonać jeden większy otwór (o średnicy ok. 4 mm) nieco z boku, służący do wprowadzania much do komory. Przykryć większy otwór kawałkiem odklejanej taśmy etykietującej.
   
   
   
   
   
   
   

3. Przygotowanie kubeczka z pożywką

1. Podgrzewaj fiolkę z pożywką dla muszek do momentu, aż pożywka się stopi. Za pomocą pipety Pasteura przelej pożywkę do fiolki scyntylacyjnej z zamknięciem, wypełniając ją tak, aby na górze utworzyła się płaska powierzchnia. Należy uważać, aby nie dopuścić do powstania pęcherzyków powietrza, a następnie pozostawić do ostygnięcia.
2. Przygotuj świeżą pastę drożdżową, rozcierając niewielką ilość suchych drożdży i kilka kropli wody w moździerzu z tłuczkiem. Dodawaj więcej drożdży lub wody, aż konsystencja będzie wystarczająco gęsta, aby można było nabrać wykałaczką małą, widoczną kroplę i nanieść ją na środek powierzchni pożywki.
3. Umieść fiolkę z pożywką w centrum komory, a na górze komory połóż dno szalki Petriego, odwrócone tak, aby brzegi były skierowane do góry i nie zasłaniały widoku. Wprowadź do komory poprzez większy otwór w górnej części dwie muszki w wieku 3-5 dni za pomocą aspiratora. Zaklej ten otwór taśmą i włóż do górnej szalki kawałek czarnego papieru filtracyjnego z wyciętym otworem o średnicy 2 cm.
4. Umieść lampkę biurkową nad komorą, w odległości zapobiegającej jej nagrzewaniu, w taki sposób, aby oświetlała powierzchnię pożywki. Cały układ należy idealnie umieścić w środowisku o wysokiej wilgotności i temperaturze 22-25°C.
   
   
   

4. Rozpocznij nagrywanie wideo przez przednią ściankę komory, gdy obie muchy znajdą się na powierzchni pożywki.