Pozyskiwanie oocytów mysich

Podsumowanie

Niniejszy protokół przedstawia technikę izolowania oocytów lub embrionów na wczesnym etapie rozwoju z jajowodu myszy. Umiejętność zidentyfikowania lejka jajowodu oraz wprowadzenia do niego igły z tępym końcem jest niezbędna do prawidłowego przeprowadzenia tej procedury.

Streszczenie

Do chwili obecnej jedynie nieliczne badania donosiły o udanych manipulacjach w embriogenezie lub biologii rozrodu rodzaju Peromyscus. Wspólnie z Peromyscus Genetic Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu) charakteryzujemy kluczowe różnice niezbędne do opracowania tego systemu. Głównym celem była optymalizacja procesu pozyskiwania oocytów oraz wczesnych embrionów.

Protokół

Pobieranie zarodka/oocytu

1. Przynajmniej na dwie godziny przed odzyskiwaniem embrionów/oocytów, pożywkę KSOM umieszcza się w inkubatorze CO₂ w temperaturze 37ºC, a pożywkę FHM należy rozmrozić z -20°. Do przechowywania kropli KSOM w inkubatorze wykorzystuje się szklaną płytkę z trzema płytkimi, wklęsłymi wgłębieniami. Aby zapobiec dehydratacji, KSOM oraz płytkę umieszcza się w zamkniętym pojemniku z wodą na dnie. Urządzenie to zapobiega odparowywaniu bez konieczności stosowania oleju mineralnego.
   
   
2. Jajowody pobrane od owulującej samicy umieszcza się w pożywce FHM. Aby zapewnić odpowiednią orientację i nienaruszone lejkowate zakoń....

Dyskusja

W niniejszym artykule przedstawiamy metodę pobierania oocytów od myszy z rodzaju Peromyscus po indukowanej owulacji (superowulacji). Stosowanie superowulacji (w przeciwieństwie do naturalnego cyklu rujowego) jest powszechne ze względu na znacznie większą liczbę uzyskiwanych komórek. Należy jednak zachować ostrożność przy interpretacji wyników z wykorzystaniem takich oocytów/embrionów, ponieważ zarówno hormony stosowane do indukcji owulacji, jak i sam proces hodowli mogą wywierać wpływ na badane obiekty.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Igła do płukania	Narzędzie	Zephyrtronics	ZT5-130-L	30 G tępa
Pinceta (2)	Narzędzie	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5060
Peromyscus	Zwierzę	Peromyscus Genetic Stock Center
Nożyczki	Narzędzie	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5880
Pożywka FHM buforowana HEPES	Odczynnik	Specialty Media	MR-025-d
Pożywka do hodowli embrionów KSOM (5x 10 mL)	Odczynnik	Specialty Media	MR-020P-5F
Pipeta ustna	Narzędzie			Wykonana z dociągniętych kapilar szklanych i przymocowana do gumowej rurki
Naczynie do trzymania oocytów	Narzędzie			Szklany pojemnik z wklęsłymi wgłębieniami