Uszkodzenie neuronów wywołane laserem dwufotonowym: metoda obserwacji zwyrodnienia i regeneracji aksonów u larw Drosophila

Streszczenie

Źródło: Li, D., et al. Ten film opisuje dwufotonową laserową ablację aksonów u larwy Drosophila melanogaster oraz przykładowy protokół wywoływania obrażeń i obrazowania miejsca urazu.

Protokół

Ten protokół jest fragmentem z Li et al., A Drosophila In Vivo Injury Model for Study Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System, J. Vis. Exp. (2018).

1. Uszkodzenie dwufotonowe i obrazowanie konfokalne

1. Konfiguracja mikroskopu
   UWAGA: W tym eksperymencie użyto konfokalnego laserowego mikroskopu skaningowego z laserem dwufotonowym, ale wystarczą również inne systemy o równoważnej konfiguracji. Laser dwufotonowy (930 nm) został użyty do zadawania obrażeń, a laser argonowy (488 nm) został użyty do konfokalnego obrazowania GFP.
   1. Na początk....

Wyniki

Ryc. 1: Regeneracja aksonów neuronów Da na peryferiach wykazuje specyficzność klasową. (A i B) Schematyczny rysunek przedstawiający położenie larw. (C) Schematyczny rysunek neuronów klasy III da. (D) Aksony neuronów klasy III da ddaF, znakowane 19-12-Gal4, UAS-CD4-tdGFP, repo-Gal80/+, nie odrastają. (E) Schematyczny rysunek neuronów klasy IV da. (

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Eter dietylowy, odczynnik ACS, bezwodny	Acros Organics	AC615080010
Olej Halocarbon 27	Genesee Scientific	59-133
Kwas propionowy	J.T.Baker	U33007
Okulary nakrywkowe: Prostokąty	Fisher Naukowy	12-544-D	50 mm x 22 mm
Laserowy mikroskop skaningowy Zeiss LSM 880	Zeiss
Oprogramowanie Zen	Zeiss
Kameleon Ultra II	Spójne

Rozdział powiedział: