Drosophila melanogaster (muszka owocowa)

Ze względu na ich duży rozmiar i stosunkowo prostą organizację, komórki pielęgniarskie Drosophila idealnie nadają się do badań obrazowania żywych komórek. Ten film opisuje metodę mikroiniekcji do dostarczania związków egzogennych do komórek, a przedstawiony protokół demonstruje procedurę z fluorescencyjnymi sondami oligonukleotydowymi zwanymi latarniami molekularnymi (MB) używanymi do wizualizacji endogennych transkryptów mRNA.

Zarodek Drosophila jest otoczony ochronnymi błonami zewnętrznymi. Aby uzyskać dostęp do zarodka, często usuwa się kosmówkę – najbardziej zewnętrzną z błon. Ten film opisuje powszechnie stosowaną metodę dechorionacji z użyciem podchlorynu sodu. Przykładowy protokół demonstruje procedurę przy użyciu sterylnych technik niezbędnych do hodowli zwierząt aksenicznych lub gnotobiotycznych.

Barwienie immunologiczne oocytów Drosophila w późnym stadium może okazać się trudne ze względu na otaczające je błony. Ten film opisuje wysokoprzepustową metodę pozyskiwania oocytów, ich utrwalania i usuwania błon w celu barwienia immunologicznego. Przedstawiony protokół demonstruje te techniki z oocytami w późnym stadium używanymi do wizualizacji różnych etapów mejozy.

Ten film opisuje metodę mechanicznego usuwania błon kosmówkowych i witelinowych z wcześniej utrwalonych dojrzałych oocytów Drosophila. Przedstawiony protokół przedstawia szczegółową demonstrację procedury, w wyniku której uzyskuje się oocyty kompatybilne z fluorescencyjnymi testami hybrydyzacji in situ.

Ten film opisuje, jak wykonywać mikrozastrzyki, które dostarczają odczynniki do żywych zarodków Drosophila. Naukowcy mogą wykorzystać tę metodę do wprowadzenia związków egzogennych, takich jak kwasy nukleinowe i białka, we wczesnych stadiach rozwoju zarodka. Przedstawiony protokół pokazuje, jak skonfigurować i wykonać procedurę wstrzykiwania dowolnego rozpuszczalnego odczynnika - w tym przypadku białka fluorescencyjnego do eksperymentów z obrazowaniem na żywo.

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

Ten film pokazuje metodę testowania niedotlenienia u larw Drosophila poprzez ocenę ich zdolności do kopania i drążenia tuneli. Korzystając z tej techniki, naukowcy mogą odróżnić larwy doświadczające niedoboru tlenu od tych z deficytami rozwojowymi. Przykładowy protokół przedstawia konfigurację tego testu.

Podczas barwienia wyimaginowanych krążków Drosophila, często przeprowadza się zgrubną sekcję, podczas której dyski są odsłonięte, ale pozostają przyczepione do ciała. Po zabarwieniu interesujące dyski są izolowane i montowane. Przykładowy protokół demonstruje procedurę wyimaginowanego rozwarstwienia i montażu dysku skrzydłowego.

Połączenie nerwowo-mięśniowe Drosophila (NMJ) jest używane jako model do badania morfologii i funkcji synaps. Ten film opisuje ważne cechy, które naukowcy określają ilościowo, aby scharakteryzować NMJ. Przykładowy protokół demonstruje oprogramowanie zdolne do automatycznego wykonywania kwantyfikacji.

Ten film opisuje dwufotonową laserową ablację aksonów u larwy Drosophila melanogaster oraz przykładowy protokół wywoływania obrażeń i obrazowania miejsca urazu.

Ten film opisuje, jak przygotować filety larwalne używane do wizualizacji neuronów sensorycznej arboryzacji dendrytycznej (da) i związanych z nimi komórek naskórka. Przedstawiony protokół pokazuje szczegółowo, jak usunąć tkankę mięśniową ze ściany ciała przy jednoczesnym zachowaniu morfologii komórek, co poprawia barwienie immunologiczne i wizualizację inaczej zasłoniętych neuronów da i komórek naskórka.

Molimimfa Drosophila służy zarówno jako krew, jak i płyn śródmiąższowy, krążąc po całym ciele podczas stadium larwy i dorosłego osobnika. Ten film opisuje protokół pobierania larw hemolimfy w celu ilościowego określenia krążących komórek.

Larwy Drosophila są wrażliwe na światło i reagują na zmiany w otaczającym świetle. Ten film opisuje test, który testuje ich zdolność do unikania światła, zwany testem plamki świetlnej. Prezentowany protokół pokazuje, jak skonfigurować test z niebieską diodą LED i pokazuje, jak rejestrować zachowanie zwierzęcia w odpowiedzi na spotkanie ze światłem.

Ten film opisuje gruczoł pierścieniowy Drosophila, złożoną strukturę endokrynną ważną dla biosyntezy i wydzielania ekdysteroidów i innych hormonów. Przedstawiony protokół demonstruje jego rozwarstwienie, utrwalenie i barwienie immunologiczne.

Larwy Drosophila mają dedykowane neurony czuciowe - nocyceptory - których reakcja na potencjalnie szkodliwe bodźce termiczne wyzwala u zwierzęcia zachowania awersyjne - lub tak zwane "nocyfensywne". Ten film opisuje metodę oceny nocycepcji termicznej poprzez rejestrowanie zachowania larw w odpowiedzi na miejscowe przyłożenie sondy ciepła do naskórka. Metoda ta jest zatem nazywana testem lokalnej sondy ciepła.

Muszki owocowe Drosophila potrafią rozróżniać niewielkie zmiany temperatury i dlatego wybierają środowiska o sprzyjających warunkach termicznych. Ten film opisuje test behawioralny, który testuje preferencje temperaturowe larw Drosophila na liniowym gradiencie termicznym.

Ten film opisuje gruczoł limfatyczny Drosophila - główne miejsce hematopoezy u larw muchy - i pokazuje przykładowy protokół do preparowania i montowania narządu do immunohistochemii i obrazowania fluorescencyjnego.

Ten artykuł opisuje technikę usuwania poczwarki owada przy jednoczesnym zachowaniu wewnętrznej poczwarki w stanie nienaruszonym, a tym samym nadającej się do dalszych badań. Przykładowy protokół przedstawia procedurę z Drosophila guttifera; jednak technika ta ma zastosowanie do innych gatunków Drosophila.

Ten film opisuje, jak przeprowadzić sekcję i wyizolować kompleks oko-mózg od poczwarek Drosophila. Przedstawiony protokół pokazuje, że procedura pozwala uzyskać wysokiej jakości tkankę, kompatybilną na przykład z barwieniem immunologicznym, a także innymi eksperymentami z ekspresją genów.

Mięśnie lotu Drosophila są używane jako modelowy system dla rozwoju i fizjologii mięśni. Ten film opisuje muskulaturę lotu dorosłych osobników i przedstawia protokół analizy rozwijających się pośrednich mięśni lotu, które są odpowiednie do sekwencjonowania RNA z poczwarek.

Ten film opisuje klasyczny test warunkowania, który testuje uczenie się i pamięć u Drosophila, zwany warunkowaniem zalotów. Test opiera się na zmniejszeniu zalotów samców po doświadczeniu odrzucenia przez niereceptywną samicę przed kryciem. Przykładowy protokół przedstawia konfigurację procedury, która może być wykorzystana do oceny pamięci krótko- i długotrwałej.

Ten film opisuje prostą metodę ilościowego oznaczania lokomocji muchy i pokazuje przeprowadzony test wspinaczki. Test wspinaczki muchowej jest ogólnym testem funkcji motorycznych, który opiera się na negatywnej odpowiedzi geotaksji.

Ten film opisuje sekcję gruczołów dodatkowych od samców much i pokazuje przykład, w którym izolowany gruczoł zostanie zdysocjowany na zawiesinę pojedynczej komórki.

Ten film opisuje ogólną anatomię jajnika Drosophila i przedstawia metodę preparowania jajników do obrazowania na żywo lub stałego.

Ten artykuł opisuje sekcję przednich kanalików Malpighiego (MT) od samicy muchy Drosophila oraz przykładowy protokół od Rossano et al. (2017), w którym MT są przygotowywane do obrazowania na żywo w komorze perfuzyjnej.

Ten film opisuje test wyspowy, metodę behawioralną używaną do badania lokomocji Drosophila. Protokół próbki zawiera konfigurację testu zgodną z półautomatyczną analizą obrazu.

Naukowcy używają protokołu długości życia Drosophila do mierzenia, jak różne warunki eksperymentalne wpływają na długowieczność muszek i generowania krzywych przeżycia w tym procesie, aby określić ilościowo wyniki eksperymentu. Protokół próbki obejmuje test stosowany do badania wpływu narażenia na długowieczność substancji chemicznych zaburzających funkcjonowanie układu hormonalnego lub EDC, takich jak 17-α-etynyloestradiol (EE2).

Ten film opisuje test karmienia muszek owocowych, w którym kolorowy pokarm jest używany do monitorowania karmienia oraz wpływ, jaki dodane związki mogą mieć na aktywność żywieniową. Przykładowy protokół testuje działanie kilku substancji chemicznych zaburzających funkcjonowanie układu hormonalnego (EDC).

Ten film opisuje metodę montażu nienaruszonych mózgów dorosłych much pod zjeżdżalnią mostkową i pokazuje protokół wykonywany na immunologicznie barwionych mózgach do mikroskopii fluorescencyjnej.

Ten film opisuje metodę przesiewową w celu identyfikacji transgenicznych muszek Drosophila, których genom został zmodyfikowany za pomocą CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 to potężne narzędzie do edycji genomu, które zrewolucjonizowało sposób, w jaki naukowcy mogą manipulować genomem organizmu. W przykładowym protokole zobaczymy, jak zidentyfikować mutanty generowane przez CRISPR, w których insercja sekwencji transaktywacyjnej zastępuje pierwszy ekson genu bezgałęziowego (bnl), tworząc w ten sposób linię...

Skaningowa mikroskopia elektronowa (SEM) to potężne narzędzie do obrazowania - przede wszystkim - cech powierzchni próbki biologicznej. Właściwe przygotowanie próbki ma jednak kluczowe znaczenie dla uzyskania wysokiej jakości obrazów. Ten film skupia się na etapach odwadniania i suszenia podczas przygotowywania nienaruszonej dorosłej Drosophila do SEM.

Ten film opisuje, jak zanurzyć głowy Drosophila w parafinie za pomocą metody kołnierza, techniki przygotowującej głowy muchy do seryjnego cięcia. Skrawki parafinowe służą do badań histologicznych anatomii mózgu oraz do oceny neurodegeneracji. Prezentowany protokół pokazuje, w jaki sposób można przetworzyć wiele much w jednym preparacie, zwiększając w ten sposób efektywność czasową i minimalizując artefakty eksperymentalne.

Ten film opisuje, jak wykonać zastrzyk żywym dorosłym muchom i zawiera przykładowy protokół, w którym oznaczone cząstki i błękit trypanowy są wstrzykiwane do brzuchów muchy w celu zbadania fagocytozy.

Ten film opisuje test preferencji smakowych, metodę behawioralną używaną do pomiaru atrakcyjności lub unikania kolorowych roztworów, które smakują inaczej, poprzez ocenę zabarwienia brzucha muchy po spożyciu preferowanej substancji. Przedstawiony protokół przedstawia procedurę zastosowaną do pomiaru preferencji muszek w stosunku do roztworów o różnych stężeniach sacharozy.

Ten film opisuje test CApillary FEeder, czyli CAFE, metodę behawioralną, która mierzy spożycie pokarmu i preferencje niepohamowanych muszek owocowych. Przedstawiony protokół pokazuje, jak przeprowadzić test przy minimalnym parowaniu z wypełnionych płynem naczyń włosowatych używanych do dostarczania pokarmu i śledzenia jego spożycia.

Ten film opisuje, jak przeprowadzić sekcję i wyizolować mózg dorosłego Drosophila - procedura niezbędna do wizualizacji narządu, który w przeciwnym razie jest zasłonięty przez naskórek, oko i tkankę tchawicy. Przykładowy protokół przedstawia szczegółową demonstrację dającą wysokiej jakości preparaty, które można stosować do barwienia immunologicznego i metod obrazowania w neurobiologii Drosophila.

Mikrobiota Drosophila wpływa na rozwój, odporność i fizjologię zwierzęcia. Ten film opisuje metodę ilościowego oznaczania bakterii u much poprzez określenie jednostek tworzących kolonie z preparatów dla całego ciała. Przedstawiony protokół demonstruje tę technikę na muchach, hodowanych w warunkach gnotobiotycznych przy użyciu czterech gatunków bakterii.

Ten film opisuje metodę preparowania, naprawiania i montowania dorosłej nogi Drosophila przy jednoczesnym zachowaniu jej nerwowo-mięśniowej nienaruszonej do analizy obrazowej.

Ten film opisuje, jak śledzić swobodnie chodzące muchy, aby ocenić ich ogólną zdolność poruszania się. Prezentowany protokół demonstruje konfigurację testu i analizę danych za pomocą oprogramowania do śledzenia wideo.

Ten film opisuje jedną z metod budowy aspiratora much, który może być używany do przenoszenia owadów między pomieszczeniami bez znieczulenia. Aspirator w przykładowym protokole został przygotowany do eksperymentu mającego na celu ilościowe określenie indywidualnych zachowań...

Ten film opisuje obrazowanie in vivo wapnia w neuronach Drosophila za pomocą GCaMP. Prezentowany klip protokołu pokazuje, jak rejestrować zmiany we fluorescencji GCaMP z neuronów ciała grzyba podczas eksperymentu kondycjonowania węchowego.

Muszki owocowe mają złożony system węchowy, potrafią rozróżniać setki substancji zapachowych i używać swojego węchu do kierowania decyzjami behawioralnymi. Ten film opisuje czterokierunkowy test olfaktometryczny, metodę badania węchowych reakcji behawioralnych u much. Prezentowany klip protokołu pokazuje, jak radzić sobie z muchami testowymi i jakie są krytyczne kroki podczas wykonywania testu.

Agresja jest wrodzonym zachowaniem, a wcześniejsze doświadczenie w walce wpływa na strategię walki i wynik późniejszych zawodów w muchach. Ten film opisuje test używany do badania agresywnego zachowania Drosophila. Przykładowy protokół obejmuje test wykonywany w konfiguracji, która eliminuje obsługę much, a tym samym zmniejsza stres u zwierząt, który w przeciwnym razie wpłynąłby na wydajność badanych.

Ten film opisuje metodę testowania węchowych zachowań eksploracyjnych u muszki owocowej, zwaną labiryntem Y. Prezentowany klip z protokołem pokazuje, jak skonfigurować i przeprowadzić test.

Ten film opisuje system monitorowania aktywności Drosophila (DAM) używany do śledzenia aktywności lokomotorycznej. Naukowcy wykorzystują dane dotyczące aktywności zebrane z DAM do badania rytmów okołodobowych u muszek owocowych. Prezentowany klip protokołu pokazuje, jak ładować muchy do urządzenia i rejestrować dane dotyczące aktywności do eksperymentów okołodobowych.

Optogenetyka umożliwia użycie światła do manipulowania neuronami, które są genetycznie modyfikowane do wyrażania specyficznych opsyn, wrażliwych na światło białek, których aktywacja światłem powoduje zmianę stanu neuronu. Tutaj opisujemy podejście optogenetyczne u Drosophila przy użyciu opsyny Channelrhodopsin2. Przykładowy protokół zawiera test optogenetyczny ustawiony do badania obwodów neuronalnych stojących za zachowaniem ucieczki muchy.

W tym filmie podkreślamy sekcję jelita dorosłego Drosophila i zbiór jelit środkowych nadających się do dysocjacji pojedynczych komórek i FACS w celu wyizolowania jelitowych komórek macierzystych.

Ten film opisuje dorosłe serce muchy, inaczej zwane naczyniem grzbietowym Drosophila. Przedstawiony protokół przedstawia procedurę preparacji preparatów z żywym sercem.

Samice Drosophila wybierają między substratami i wybierają miejsca, które są atrakcyjne do składania jaj. Ten film opisuje test behawioralny, który testuje ich podejmowanie decyzji, zwany testem preferencji składania jaj. Prezentowany klip demonstruje procedurę z niestandardową konfiguracją, która umożliwia naukowcom nie tylko testowanie zachowania wielu samic w tym samym czasie, ale jest również kompatybilna z nagrywaniem wideo i konfiguracjami optogenetycznymi.