Osadzanie dorosłych głów Drosophila w parafinie: przygotowanie tkanki do histologii

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Masowa histologia do ilościowego określenia neurodegeneracji u Drosophila . J. Vis. Exp. (2016).

Ten film opisuje, jak zanurzyć głowy Drosophila w parafinie za pomocą metody kołnierza, techniki przygotowującej głowy muchy do seryjnego cięcia. Skrawki parafinowe służą do badań histologicznych anatomii mózgu oraz do oceny neurodegeneracji. Prezentowany protokół pokazuje, w jaki sposób można przetworzyć wiele much w jednym preparacie, zwiększając w ten sposób efektywność czasową i minimalizując artefakty eksperymentalne.

Protokół

Ten protokół jest fragmentem Sunderhausa i Kretzschmara, Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila, J. Vis. Exp. (2016).

1. Mocowanie głowy na kołnierzach i zatapianie w parafinie

UWAGA: Wszystkie etapy procesu utrwalania powinny być wykonywane w dygestorium. Benzoesan metylu, choć nie stanowi zagrożenia dla zdrowia, ma bardzo wyraźny zapach, który może być przytłaczający, jeśli nie jest obsługiwany pod wyciągiem.

Przed znieczuleniem muszek należy uzupełnić 50 ml roztworu Carnoya, dodając 15 ml chlo....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rysunek 1: Sekcje seryjne parafiny. A) Stosując metodę obroży, muchy eksperymentalne i kontrolne można przetwarzać jako jedną próbkę, nawlekając je na jedną obrożę. Bezokie muchy sinusoidalne są wstawiane w celu orientacji (strzałki). B) Schemat przedstawiający orientację głowic muchowych w kołnierzu. C) Na tym obrazie sekcje z różnych głowic muchowych są zorie.......