Liczenie jednostek tworzących kolonie (CFU): Kwantyfikacja bakterii z ciał much

Streszczenie

Źródło: Koyle, M. L., et al. Hodowla muszki owocowej i Drosophila melanogaster w warunkach aksenicznych i gnotobiotycznych. J. Vis. Exp. (2016).

Mikrobiota Drosophila wpływa na rozwój, odporność i fizjologię zwierzęcia. Ten film opisuje metodę ilościowego oznaczania bakterii u much poprzez określenie jednostek tworzących kolonie z preparatów dla całego ciała. Przedstawiony protokół demonstruje tę technikę na muchach, hodowanych w warunkach gnotobiotycznych przy użyciu czterech gatunków bakterii.

Protokół

Ten protokół jest fragmentem z Koyle et al., Hodowla muszki owocowej Drosophila melanogaster w warunkach aksenicznych i gnotobiotycznych, J. Vis. Exp. (2016).

1. Jaja dechorionate i przejście na bezpłodną dietę

1. Przygotuj komorę bezpieczeństwa biologicznego, spryskując jej wnętrze (w tym boki) 70% etanolem. Przetrzyj spód chusteczką laboratoryjną i sterylizuj kaptur światłem UV przez ~15 min. Wysterylizuj wszystkie materiały niebiologiczne (kubki na próbki, pędzel, kleszcze, pojemnik na odpady, 400 ml wysterylizowanej wody i 100 ml 0,6% podchlorynu sodu) poprzez spryskanie etanolem i natychmiastowe umie....

Wyniki

Plik kodu uzupełniającego: Przykładowe obliczenia. Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).

....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Drożdże piwne	MP Biomedicals, Sp. z o.o.	903312
glukoza	Sigma Aldrich	158968-3KG
agar	Fisher - Laboratorium Naukowe	latać802010 powiedział
100% koncentrat soku winogronowego firmy Welch	Walmart lub inny sklep spożywczy	9116196
Klatka: 32 uncje Półprzezroczysty okrągły pojemnik Deli	Sklep internetowy	999L5032Y
Przezroczysta okrągła pokrywka pojemnika na delikatesy	Sklep internetowy	999YNL500
Butelki magazynowe	Genesee Scientific	32-130
Droso-Wtyczki	Genesee Scientific	49-101
Siatka nylonowa	Genesee Scientific	57-102 Rozdział 57-102
Tuleja z tworzywa sztucznego	Magazyn domowy	100404002
Plastikowa nasadka tulei	Magazyn domowy	100153897
Kubek na próbki	Partnerzy MedSupply	Zobacz materiał K01-207067
Wzmacniacz M4	Eppendorf	4982000322
Probówki wirówkowe 50 ml	Probówki wirówkowe TrueLine	TR2003
Pudełka na żywność	USA Naukowe	2316-5001
Lysing Matrix D luzem	MP Biomedicals, Sp. z o.o.	116540434
Końcówki do pipet z filtrem, 300 μl	USA Naukowe	1120-9810
Szalki Petriego	Sprzedaż produktów laboratoryjnych	M089303
etanol	Decon Laboratories, INC.	Numer katalogowy 2701
pędzel	Sieć sklepów Walmart	Numer katalogowy: 5133
Kleszcze	rybak	Numer katalogowy: 08-882
Wybielacz domowy (6-8% podchlorynu)	Sieć sklepów Walmart	550646751
Uniwersalny pepton	Genesee Scientific	20-260
Ekstrakt drożdżowy	Fisher Naukowy	Zobacz materiał BP1422-500
Fosforan dipotasowy	Sigma Aldrich	Zobacz materiał P3786-1KG
Cytrynian amonu	Sigma Aldrich	25102-500g
Octan sodu	Firma VWR	Numer katalogowy: 97061-994
Siarczan magnezu	Fisher Naukowy	Zobacz materiał M63-500
Siarczan manganu	Sigma Aldrich	Numer katalogowy: 10034-96-5
MRS w proszku	Sigma Aldrich	69966-500G
Czytnik płytek 96-dołkowych	BioTek (epoka)	nie
Probówki wirówkowe 1,7 ml	USA Naukowe	1615-5500
Końcówki do pipet z filtrem, 1 000 μl	USA Naukowe	Lata 1122-1830
Płytki 96-dołkowe	Greiner Bio-One	655101
Koraliki ceramiczne	MP Biomedicals, Sp. z o.o.	6540-434
Homogenizator tkanek	MP Biomedicals, Sp. z o.o.	116004500
Szafa bezpieczeństwa biologicznego klasy 1	Thermo Scientific	wzoru 1395

: SZT. SZT. powiedział: szt.