Test składania jaj: metoda ilościowego określania zachowania C. elegans podczas składania jaj

Streszczenie

Źródło: Lee, S. Y. i Kang, K. Pomiar wpływu substancji chemicznych na wzrost i reprodukcję Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

C. elegans podczas składania jaj może dostarczyć ważnych informacji w badaniach rozwojowych, reprodukcyjnych i anatomicznych. Ten film przedstawia ważne etapy testu składania jaj i pokazuje próbkę eksperymentu, w którym lek jest testowany pod kątem toksyczności reprodukcyjnej.

Protokół

Lee i Kang, Pomiar wpływu substancji chemicznych na wzrost i reprodukcję Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1. Test składania jaj przez C. elegans

1. Jaja zsynchronizowane z wiekiem wysiadywać na płytce NGM zawierającej DMSO lub etopozyd przez 64 godziny (przed pierwszym urodzeniem) aż do stadium młodego dorosłego osobnika w temperaturze 20 °C.
   UWAGA: Użycie robaków z eksperymentów pomiaru wzrostu jest opcjonalne. Wygodnie jest wykonać jednocześnie pomiar wzrostu i test składania jaj.
2. Przenieść 5 dorosłych robaków na nową płytkę NGM bez chemikaliów (warunek 1, obróbka chemiczna w określonym czasie, od stadium jaj do młodego dorosłego osobnika) lub nową płytkę NGM zawierającą tę samą chemiczną obróbkę wstępną (warunek 2, ciągłe narażenie na chemikalia przez cały okres doświadczalny), a następnie inkubować je przez 24 godziny
   UWAGA: Zaleca się wykonywanie powtórzeń przy użyciu 3-5 płytek NGM do każdego zabiegu; Powtórzenia te można wykorzystać do analizy statystycznej.
3. Przenieś na nową płytkę NGM zgodnie z powyższym opisem i policz liczbę jaj każdego dnia. Policz robaki, które wypełzły z domu, umarły i wykluły się wewnętrznie.
4. Powtarzaj te kroki, aż robaki przestaną składać jaja, zwykle w ciągu 5 dni.
5. Oblicz liczbę jaj złożonych na robaka z każdej płytki i sumuj te wartości codziennie przez 5 dni, aby określić całkowitą liczbę złożonych jaj.
   UWAGA: Wyklucz z obliczeń liczbę robaków, które wypełzły i wykluły się wewnętrznie.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Caenorhabditis elegans N2	Centrum Genetyki Caenorhabditis (CGC)		Dzika czcionka
Dimetylosulfotlenek	Sigma, Stany Zjednoczone	Zobacz materiał D2650
Escherichia coli OP50	Centrum Genetyki Caenorhabditis (CGC)
Etopozyd	Sigma, Stany Zjednoczone	E1383
35 × szalka Petriego 10 mm	SPL Life Sciences, Korea Południowa	Numer katalogowy 10035
Mikroskop stereoskopowy	Nikon, Japonia	SMZ800N