Caenorhabditis elegans (nicień)

W tym filmie pokazujemy metodę wytwarzania rozwojowo zsynchronizowanej populacji bezpłodnych dorosłych C. elegans. Przykładowy protokół synchronizuje robaki w celu zbadania wskaźników zużycia tlenu u żywych zwierząt.

Ten film opisuje technikę szybkiego badania pojedynczego nicienia pod kątem markera genetycznego za pomocą badania przesiewowego PCR. W przykładowym protokole przeprowadzamy badania przesiewowe pod kątem edycji genomu opartej na CRISPR.

Ten film opisuje tradycyjną, opartą na płytkach metodę pomiaru długości życia C. elegans. Przykładowy protokół mierzy długość życia robaków poddanych działaniu RNAi.

C. elegans podczas składania jaj może dostarczyć ważnych informacji w badaniach rozwojowych, reprodukcyjnych i anatomicznych. Ten film przedstawia ważne etapy testu składania jaj i pokazuje próbkę eksperymentu, w którym lek jest testowany pod kątem toksyczności reprodukcyjnej.

Ten film opisuje mikroiniekcję, powszechną metodę tworzenia transgenicznych szczepów C. elegans. W przykładzie zobaczymy mikroiniekcję użytą do wprowadzenia kompleksu rybonukleoproteinowego (RNP) do edycji genów zasad CRISPR.

Ten film opisuje freeze-cracking, metodę umożliwiającą barwienie tkanek C. elegans do barwienia przeciwciałami poprzez naruszanie naskórka.

Podczas obrazowania na żywo C. elegans, można użyć podkładki agarozowej, aby utrzymać nicień nieruchomo bez jego uszkadzania lub suszenia. Ten film opisuje, jak przygotować prostą podkładkę montażową do mikroskopii.

Ten film przedstawia koncepcje związane z obrazowaniem wapnia i zawiera przykładowy protokół obrazowania poklatkowego robaków znajdujących się w formowanych studzienkach agarozowych.

Tutaj wprowadzamy test do pomiaru SWIP, behawioralnego fenotypu C. elegans, który występuje podczas energicznych ruchów, takich jak pływanie. Przykładowy protokół omawia zarówno ręczne, jak i automatyczne podejścia do analizy.

Ten film przedstawia test habituacji dotyku, behawioralną metodę C. elegans służącą do oceny mechanosensacji i ilościowego określania czasu do przyzwyczajenia.

Ten film przedstawia chemotaksję u nicienia C. elegans i pokazuje przykładowy protokół testujący chemotaktyczną awersję do siarczanu miedzi.

Badacze mogą uruchomić ruch na żądanie u C. elegans, stosując pole elektryczne, które robaki wyczuwają i na które reagują. Ten film przedstawia zachowanie elektrotaktyczne i pokazuje przykładowy protokół, który jest wykonywany w urządzeniu mikroprzepływowym.

Ten film opisuje użycie oprogramowania do nagrywania ruchu robaków na arenie. Przykładowy protokół mierzy wpływ ekspozycji na etanol na poruszanie się robaków.

Ten film opisuje metodę preparowania gonad od dorosłych hermafrodytów C. elegans, w wyniku czego powstają tkanki odpowiednie do barwienia immunologicznego i obrazowania fluorescencyjnego.

Ten film przedstawia test krótkoterminowego przeżycia, który testuje leczenie ostrej toksyczności lub testuje szczep genetyczny pod kątem odporności na stan toksyczny. Przykładowy protokół pokazuje przykładowy test przeżycia, w którym robaki są testowane pod kątem ich odporności na stres oksydacyjny wywołany przez parakmet (PQ).

C. elegans mają dwa rodzaje mięśni, pojedynczy sarkomer i wiele sarkomerów, czyli mięśnie prążkowane. Ten film opisuje układ mięśni poprzecznie prążkowanych, które są odpowiedzialne za poruszanie się robaka i zawiera przykładowy protokół pomiaru morfologii mięśni za pomocą oprogramowania do analizy obrazu.

Ten film przedstawia metodę laserowego ranienia, która jest używana do powodowania bardzo precyzyjnych uszkodzeń naskórka robaka. Przykładowy protokół pochodzi z badania reakcji i naprawy ran.

Ten film przedstawia metodę wizualizacji i pomiaru integralności światła jelita C. elegans poprzez karmienie robaków dekstranem znakowanym FITC. Przykładowy protokół pokazuje test wykonany na robakach 3,3'-diindolilometanu (DIM) i karmionych patogenami.

Ten film opisuje protokół barwienia lipidów w całych, utrwalonych robakach za pomocą barwnika Nile Red. Aby zobaczyć neutralne lipidy w rdzeniu kropelek lipidów, zobrazuj zielone widma emisji barwionego C. elegans.

Ten film opisuje metodę dysocjacji całych robaków do jednokomórkowej zawiesiny odpowiedniej dla FACS lub immunoprecypitacji nienaruszonych komórek.

Tutaj opisujemy technikę używaną do wizualizacji genomowego DNA u stałych, nienaruszonych nicieni. Film zawiera przykładowy protokół liczenia chromatyny w niezapłodnionych oocytach C. elegans.

Ten film przedstawia metodę izolowania blastomerów C. elegans z wczesnych zarodków. Otrzymane komórki nadają się do hodowli komórkowej lub eksperymentów ex vivo.

Ten film przedstawia metodę izolacji i sterylnego hodowania embrionalnych komórek C. elegans in vitro.

Ten film opisuje zasady leczenia RNAi u C. elegans i demonstruje protokół do eliminacji lin-35 w transgenicznym szczepie robaków.

RNAi to potężne narzędzie genetyczne dostępne dla badaczy C. elegans. W tym filmie przedstawiono metodę leczenia większej liczby robaków RNAi niż karmienie płytkami przy użyciu płynnych warunków hodowli.

Nicienie mogą być łatwo rozmnażane w laboratorium - po części dlatego, że hermafrodyty mogą rozmnażać się przez samozapłodnienie. Jednak krzyżówki genetyczne i inne eksperymenty mogą wymagać dużej liczby samców. Ten film opisuje metodę wzbogacania samców C. elegans.

Mikroiniekcja transgenów zwykle skutkuje powstawaniem szczepów C. elegans z dużymi matrycami pozachromosomalnymi, co skutkuje zmienną ekspresją i transgenem. Promieniowanie UV może wywołać integrację chromosomalną macierzy i bardziej stabilną transgenową transmisję.