C. elegans (C. elegans) Rozwarstwienie blastomerów: metoda usuwania skorupki jaja i dysocjacji komórek embrionalnych

Abstract

Źródło: Hsu, C. R., et al. In vitro Rekonstrukcja przestrzennych wzorców kontaktu komórek z izolowanymi zarodkami Caenorhabditis elegans, blastomerami zarodkowymi i adhezyjnymi kulkami polistyrenu.J. Vis. Exp.(2019).

Ten film przedstawia metodę izolowania blastomerów C. elegans z wczesnych zarodków. Otrzymane komórki nadają się do hodowli komórkowej lub eksperymentów ex vivo.

Protocol

Ten protokół jest fragmentem Hsu et al, In Vitro Rekonstrukcja przestrzennych wzorców kontaktu komórek z izolowanymi zarodkowymi blastomerami Caenorhabditis elegans i adhezyjnymi kulkami polistyrenu, J. Vis. Exp.(2019).

1. Izolacja blastomeru zarodka
2. Nosić rękawice i fartuch laboratoryjny, aby uniknąć skaleczenia i kontaktu z roztworem wybielającym.
   1. Trzymaj każdy koniec mikrokapilary (pojemność; 10 μl) prawą i lewą ręką.
   2. Pociągnij mikrokapilę w kierun....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Zespół rurki aspiratora	Drummond	21-180-13	Do izolacji blastomerów.
Caenorhabditis elegans szczep: N2, typ dziki	Centrum Genetyki Caenorhabditis	N2	Szczep użyty w tym badaniu
Caenorhabditis elegans szczep: KSG5, genotyp: zuIs45; itIs37	w domu	Zobacz materiał KSG5	Szczep użyty w tym badaniu
Kalibrowane mikropipety, 10 μL	Drummond	21-180-13	Do izolacji blastomerów
CD Koncentrat lipidowy	Technologie życiowe	11905031	Do izolacji blastomerów. Praca w kapturze do hodowli tkankowych.
Clorox	Clorox	N. A.	Do izolacji blastomerów. Otwórz nową butelkę, gdy leczenie podchlorynem nie działa dobrze.
Uchwyt na szkiełko nakrywkowe	Na miejscu	Nie	Do izolacji blastomerów.
Mikroskop preparacyjny: Zeiss Stemi 508 ze statywem M. Źródłem światła jest wbudowana dioda LED. Powiększenie okularu wynosi 10X.	Carl Zeiss	Stemi 508	Do izolacji blastomerów.
Płodowa surowica bydlęca, kwalifikowany One Shot, pochodzenie z Kanady	Gibco (firma Gibco)	A3160701	Do izolacji blastomerów. Praca w kapturze do hodowli tkankowych.
igły podskórne ogólnego zastosowania i precyzyjnego ślizgu, rozmiar 25	Bd	14-826AA	Do izolacji blastomerów
inulina	Alfa Aesar	AAA1842509	Do izolacji blastomerów
MEM Roztwór witaminowy (100x)	Gibco (firma Gibco)	11120052	Do izolacji blastomerów.
Multitest Slide 10 Well	MP Biomedycyna	ICN6041805	Do izolacji blastomerów
Penicylina-Streptomycyna (10 000 U/ml)	Gibco (firma Gibco)	15140148	Do izolacji blastomerów.
Poliwinylopirolidon	Odczynniki biologiczne Fisher	Zobacz materiał BP431-100	Do izolacji blastomerów
Chlorek potasu	Sklep biologiczny	Zobacz materiał POC888	Do izolacji blastomerów
Sterylne podłoże Drosophila Schneidera	Gibco (firma Gibco)	21720024	Do izolacji blastomerów. Praca w kapturze do hodowli tkankowych.
Chlorek sodu	Sklep biologiczny	SOD001	Do izolacji blastomerów
roztwór wodorotlenku sodu, 10 N	Fisher Chemiczny	Zobacz materiał SS255-1	Do izolacji blastomerów
Filtry strzykawkowe, PTFE, niesterylne	Basix (Język Basix)	13100115	Do izolacji blastomerów.
Tygon S3 Rurki laboratoryjne,, Formulacja E-3603, Średnica wewnętrzna 3.175 mm	Saint Gobain Performance Plastics	89403-862	Do izolacji blastomerów.
Tygon S3 Rurki laboratoryjne,, Formulacja E-3603, Średnica wewnętrzna 6.35 mm	Saint Gobain Performance Plastics	Numer katalogowy: 89403-854	Do izolacji blastomerów.