$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1.Konfiguracja pola magnetycznego za pomocą jednowymiarowej manipulacji polem magnetycznym
- Włącz jednostkę napędową (Rysunek 1A).
- Umieść zwinięty tunel w miejscu, w którym zostanie wykonany protokół reotaktyczny (sekcja 3), ale trzymaj go odłączonego od aparatu pływackiego (rysunek 1A). Umieść sondę magnetyczną połączoną z gaussometrem/teslasometrem wewnątrz tunelu i sprawdź, jakie napięcie jest niezbędne do uzyskania wybranej wartości pola magnetycznego wzdłuż głównej osi tunelu.
UWAGA: Ze względu na właściwości magnetyczne elektromagnesu, pole jest w miarę równomierne wewnątrz tunelu; Można to sprawdzić, powoli przesuwając sondę zarówno w poziomie, jak i w pionie.
- Odłącz sondę i podłącz tunel przepływowy do aparatu pływackiego.
- Zacznij od protokołu reotaktycznego (sekcja 3).
2. Konfiguracja pola magnetycznego za pomocą trójwymiarowej manipulacji polem magnetycznym
- Włącz sterowniki procesora, przetwornika cyfrowo-analogowego i cewki (Rysunek 1B).
- Ustaw wybrane pole magnetyczne na każdej z trzech osi (x, y i z).
- Umieść tunel na środku zestawu par Helmholtza.
- Zacznij od protokołu reotaktycznego (sekcja 3).
3. Test reotaksji danio pręgowanego w komorze przepływowej
- Przenieś od jednej do pięciu ryb do tunelu przepływowego za pomocą zbiornika o pojemności 2 litrów z zasłoniętymi bokami i dnem.
- Włącz pompę i ustaw natężenie przepływu w tunelu na 1,7 cm/s.
nuta: Ta wolno płynąca woda utrzyma natlenienie wody w tunelu i ułatwi zwierzętom powrót do zdrowia.
- Pozwól zwierzętom zaaklimatyzować się w tunelu pływackim przez 1 godzinę.
- Rozpocznij nagrywanie wideo zachowania ryb w tunelu.
nuta: Użyliśmy kamery (np. Yi 4K Action) z pilotem (np. Bluetooth) i zapisaliśmy wideo jako .mpg (30 klatek/s).
- Rozpocznij stopniowe zwiększanie natężenia przepływu zgodnie z wybranym protokołem eksperymentalnym (1,3 cm/s w tym badaniu; Rysunek 2).
UWAGA: W tym protokole zastosowaliśmy niskie natężenia przepływu, które dla danio pręgowanego wahają się od 0 do 2,8 BL (długości ciała)/s. Te prędkości przepływu mieszczą się w dolnym zakresie natężeń przepływu, które indukują ciągłe zorientowane pływanie u danio pręgowanego (3%-15% krytycznej prędkości pływania [Ucrit]). Stosowanie niskich natężeń przepływu (zgodnie z protokołem Bretta) jest związane ze specyficznymi cechami behawioralnymi tego gatunku w obecności prądów wodnych. Danio pręgowany ma tendencję do pływania wzdłuż głównej osi komory, często skręcając, nawet w obecności przepływu wody, i ma tendencję do pływania zarówno w górę, jak i w dół rzeki. Na to zachowanie wpływa natężenie przepływu wody, zanikające przy stosunkowo dużych prędkościach (>8 BL/s), gdy zwierzęta stale pływają przodem do prądu (pełna pozytywna odpowiedź reotaktyczna). Przemieszczenia pionowe i poprzeczne są bardzo rzadkie.
- Wykonaj morfometrię zwierząt (płeć i długość całkowita [TL], długość widelca [FL] lub BL) na zdjęciach ryb w komorze morfometrycznej.
- Wybierz odpowiednie zdjęcie.
- Otwórz obraz w programie ImageJ.
- Zwróć uwagę na płeć zwierzęcia (samce danio pręgowanego są smukłe i mają tendencję do żółtawego koloru, podczas gdy samice są bardziej zaokrąglone i mają zwykle niebiesko-białe ubarwienie).
- Kliknij przycisk Analizuj > Ustaw skalę i ustaw skalę obrazu w centymetrach, używając całej długości tunelu w poziomie jako odniesienia.
- Kliknij przycisk Analizuj > Zmierz i zapisz długość liniową zwierzęcia.
- Obliczyć jego masę ciała (m.c.).
nuta: BW jest obliczany na podstawie relacji płeć-FL-BW wcześniej zbudowanych w laboratorium lub na podstawie metadanych. Cała procedura pozwala uniknąć stresu manipulacyjnego u zwierząt.
