Test unikania danio pręgowanego i thigmotaxsji: wysokoprzepustowa metoda badania zachowania larw w odpowiedzi na awersyjny bodziec wzrokowy

Abstract

Źródło: Richendrfer, H., et al. Zautomatyzowane wysokoprzepustowe analizy behawioralne u larw danio pręgowanego. J. Vis. Exp.(2013)

Film opisuje unikanie i testowanie metodą thigmotaxis larw danio pręgowanego. Film bada zachowanie larw danio pręgowanego w odpowiedzi na wizualny bodziec awersyjny.

Protocol

1. Przechwytywanie obrazu

1. W każdym pasie płytek można umieścić do 20 larw. Zazwyczaj używa się 5 larw na pas, aby ułatwić jak najdokładniejsze śledzenie prędkości pływania i zmniejszyć liczbę larw potrzebnych na eksperyment. Tory mogą być wypełnione wodą jajeczną z lub bez farmaceutyków lub toksyn, w zależności od eksperymentu. Pasy ruchu nie powinny być jednak wypełniane do końca, dopóki nie zostaną umieszczone w szafach do obrazowania; Zapobiegnie to przepełnieniu. Aby zapewnić spójność, larwy powinny mieć okres aklimatyzacji wynoszący dziesięć minut po umieszczeniu ich w foremkach agarozowych i umieszczeniu na ekranie laptopa. Skuteczne przenoszenie larw z szalki Petriego na pas agarozy pomoże zmniejszyć stres larw. Najłatwiej jest, gdy larwy są trzymane w płytkich zbiornikach lub na szalkach Petriego.
2. W szafkach fotograficznych znajduje się aparat cyfrowy Canon używany do fotografii poklatkowej oraz laptop. Kamerę należy umieścić w górnej części obudowy i skierować w stronę dolnej części obudowy, gdzie należy umieścić laptopa z ekranem o przekątnej 15,6 cala z ekranem skierowanym do góry (Rysunek 1). Cztery płytki należy umieścić ręcznie bezpośrednio na ekranie laptopa. W tym czasie pasy ruchu można uzupełnić wodą jajeczną lub obróbką chemiczną, tak aby znajdowały się na poziomie górnej części pasa (w celu wyeliminowania cieni na krawędziach pasów na zdjęciach).
3. Prezentacja PowerPoint jest używana jako bodziec awersyjny dla larw. W przeszłości ruchome czerwone kule pokazywano larwom danio pręgowanego na 6 lub 12 płytkach wielodołkowych. Bieżący program PowerPoint rozpoczyna się od pustego białego tła przez 15 minut, po którym następuje 15-minutowy ruchomy czerwony pasek w górnej połowie płyty (Rysunek 2). Aby wyeliminować przegrzanie larw, najlepiej kupić laptopa, którego temperatura ekranu nie przekracza 28 °C. Aby uniknąć parowania cieczy w obrębie pasów agarozy, maksymalny czas obrazowania powinien być ograniczony do mniej niż jednej godziny.
4. Aparat cyfrowy powinien być zaprogramowany do fotografii poklatkowej, robiąc zdjęcia co 6 sekund, co daje łącznie 300 zdjęć na eksperyment. Jednak częstotliwość i długość można dostosować w zależności od eksperymentu i kwantyfikacji behawioralnej. W przeszłości stosowano wydłużone czasy obrazowania przy użyciu dłuższych odstępów między poszczególnymi obrazami. Kamerę można ustawić na niższą rozdzielczość do obrazowania z prędkością wideo (30 klatek na sekundę). Podczas gdy niższa rozdzielczość ogranicza nagrania do jednej płytki wielodołkowej, nagrania wideo są odpowiednie do obrazowania szybkich wydarzeń pływackich.

Results

Rysunek 1. Szafy do obrazowania. Szafy do obrazowania zostały specjalnie zbudowane w naszym laboratorium i służą do wysokoprzepustowych analiz behawioralnych. Aparat cyfrowy o rozdzielczości 15 megapikseli został przymocowany do górnej części szafki skierowanej w dół, aby zbierać poklatkowe zdjęcia larw na wielopasmowych płytkach umieszczonych na ekranie laptopa. Pomiędzy płytami a ekranem znajduje się plastikowy dyfuzo...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Szafy obrazowania	Wieże WoodCraft
Agarozy	rybak	Zobacz materiał BP1356-100
Aparat cyfrowy	Canon EOS	Buntownik T1i
Laptopy	Acer Aspire		Każdy jest dobry, o ile ma 15,6 cala. Ekran LCD o rozdzielczości 1366 x 768 pikseli i jasności 220 cd/m2.
Płytki jednodołkowe	rybak	Numer katalogowy: 12-565-493
PowerPoint 2010	Firmy Microsoft
Dyfuzor z tworzywa sztucznego	Pendaflex (Lek Pendaflex	Numer katalogowy: 52345