Method Article

Test lokomocji larw: wysokoprzepustowa metoda badania neurobehawioralnej toksyczności związku w larwach danio pręgowanego

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Zhang B., et al. Badanie neurobehawioralnych skutków zanieczyszczeń środowiska na larwy danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2020)

Ten artykuł opisuje behawioralną reakcję danio pręgowanego na toksyczne związki poprzez monitorowanie lokomocji larw. W protokole przeanalizowano również przykład reakcji larw danio pręgowanego na zanieczyszczenie środowiska.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Przygotowanie do testu zachowania

  1. Przenieś 800 μl roztworu ekspozycyjnego do każdej studzienki 48-dołkowej mikropłytki.
    nuta: Użyj 16 dołków dla każdej grupy (tj. roztwór kontrolny, grupa 5 μg/L i grupa 50 μg/L).
  2. Za pomocą końcówki pipety o pojemności 1 ml przenieś 200 μl roztworu ekspozycyjnego z jedną larwą ze szklanej szalki Petriego do jednego dołka z 48-dołkową mikropłytką.
  3. Przenieś 4 ml roztworu ekspozycyjnego do każdej studzienki mikropłytki 6-dołkowej.
    nuta: Użyj jednej 6-dołkowej mikropłytki dla każdej grupy.
  4. Za pomocą końcówki pipety o pojemności 1 ml przenieś 200 μl roztworu ekspozycyjnego z dwiema larwami do każdej studzienki mikropłytki 6-dołkowej.
    nuta: Każda grupa składa się z sześciu powtarzających się grup.
  5. Upewnij się, że temperatura w pomieszczeniu testowym wynosi 28 °C na 2 godziny przed badaniem.
    nuta: Testy behawioralne są zwykle wykonywane w godzinach popołudniowych.

2. Test lokomocji i kąta ścieżki

  1. Zapisz protokół i zgaś światło w pomieszczeniu testowym.
  2. Zaaklimatyzuj larwy w systemie przez 10 minut i kliknij kolejno przycisk "Eksperyment" "Wykonaj", a następnie wybierz folder, w którym zapisywane są pliki eksperymentu i wprowadź nazwę wyniku.
  3. Kliknij kolejno przycisk "Tło" "Start", aby rozpocząć test.
  4. Kliknij kolejno przycisk "Eksperyment" "Zatrzymaj", aby zatrzymać eksperyment po jego zakończeniu.
    nuta: System wyświetla przetestowane dane po zatrzymaniu systemu. Dane obejmują śledzoną odległość w trzech klasach prędkości i liczby kątów ścieżki w ośmiu klasach kątów na minutę. Dla badania lokomocji w przedstawionym przykładzie oblicza się całkowitą odległość w każdym okresie świetlnym (10 min) i porównuje różnicę między grupą kontrolną a grupami leczonymi.
  5. Przenieś 48-dołkową mikropłytkę z powrotem do inkubatora światła w celu przeprowadzenia innych eksperymentów.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Mikropłytka 48-dołkowa Corning 3548Obudowa Embyros
Mikropłytka 6-dołkowa Corning 3471Obudowa Embyros
Skrzynka na zebra punkt widzenia Skrzynka Zebra Instrument behawioralny
Laboratorium Zebra punkt widzenia Laboratorium Zebra Oprogramowanie behawioralne
pipeta Eppendorf 3120000267Rozwiązanie transferowe
SZT. SZT. powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Zebrafish LarvaeLocomotion AssayNeurobehavioral ToxicityEnvironmental PollutantHigh Throughput MethodBehavioral TestingLight Dark CycleDistance TraveledCompound Exposure48 Well Plate

Related Articles