Rozwarstwienie soczewki oka: technika obserwacji morfologii soczewki danio pręgowanego

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Vorontsova I. et al, Ocena lokalizacji jądra soczewki danio pręgowanego i integralności szwów. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje protokół, który został opracowany do analizy soczewek dorosłych i larw danio pręgowanego w celu analizy morfologii soczewki korowej i integralności strukturalnej szwów soczewki.

Protokół

1. Sekcja soczewek larw i dorosłych ryb danio pręgowanego

Znieczulaj ryby od 6 dpf larw do dorosłości tricainą, aż przestaną reagować na dotyk, ale nadal będą wykazywać silne bicie serca. Zmierz standardową długość ryby zgodnie z Schillingiem (2002) do inscenizacji.
Natychmiast wyciąć oczy za pomocą nożyczek do mikropreparacji i umieścić w naczyniu separacyjnym w PBS (rysunek 1 pokazany dla oczu dorosłych).
1. Zrób niestandardową miskę 35 mm wypełnioną silikonem do sekcji soczewek. Po związaniu silikonu należy wyciąć wgłębienie o średnicy około 2-3 mm i głębokości 0,5 mm w celu unieruchomienia oczu/soczewek dorosłych podczas sekcji.
Sekcja soczewek dorosłego danio pręgowanego
1. Umieść dorosłe oko w naczyniu divot tylną stroną do góry wypełnioną PBS. Unieruchomij oko, wprowadzając kleszcze pod kątem <45° przez tarczę nerwu wzrokowego. Uważaj, aby nie naciąć ani nie ścisnąć obiektywu. Wykonaj dwa lub trzy promieniste nacięcia przez siatkówkę i twardówkę od tarczy nerwu wzrokowego do strefy rzęskowej za pomocą nożyczek preparacyjnych.
2. Oderwij siatkówkę i twardówkę jak płatki kwiatów i odwróć oko, rogówką do góry. Unieruchomić soczewkę pośrednio poprzez manipulację twardówką i rogówką płaską stroną nożyczek, jednocześnie odciągając siatkówkę i przyczepione tkanki za pomocą kleszczy. Ostrożnie odetnij nadmiar tkanki z soczewki.
  nuta: Bardzo ważne jest, aby dokładnie przeanalizować, aby uzyskać niezmiennie zdrowe soczewki.
Sekcja soczewek larwalnych danio pręgowanego
1. Umieść oko larwy tylną stroną do góry na płaskiej części silikonowego naczynia wypełnionego PBS i użyj zaostrzonej igły wolframowej, aby wykonać promieniste nacięcia przez siatkówkę i twardówkę, jednocześnie unieruchamiając oko inną igłą wolframową lub kleszczami.
  nuta: Uważaj, aby nie uszkodzić obiektywu.
  1. Naostrz elektrolitycznie końcówkę drutu wolframowego o długości 2,1 cm, zawieszając końcówkę drutu w 10% (w/v) NaOH i przykładając prąd przemienny o niskim napięciu14. Umieść igłę w pipecie Pasteura, topiąc szklany koniec za pomocą palnika Bunsena.
    nuta: Można również użyć alternatywnych narzędzi do drobnego rozwarstwiania.
    ostrożność: NaOH jest.
2. Delikatnie wyjmij soczewkę z oka zdysocjowanego stroną igły i ostrożnie odciągnij przyczepioną chusteczkę.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Obrazy mikroskopowe z mikroskopu preparacyjnego typu rybie oko; Widok przedni/tylny, usuwanie soczewek, podziałka 2 mm.
Rycina 1: Rozwarstwienie soczewki danio pręgowanego. (A) Oczy są wycinane ze znieczulonych ryb i umieszczane tylną stroną do góry (B). (C) Oczy są unieruchamiane za pomocą kleszczy przez tarczę nerwu wzrokowego (od) i wykonuje się dwa do trzech promieniowych...