In vivo (in vivo) Elektroporacja: specyficzna dla danego miejsca metoda transfekcji danio pręgowanego

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Durovic, T., et al. Metoda elektroporacji do dostarczania in vivo plazmidowego DNA u dorosłego danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje elektroporację in vivo, która jest techniką dostarczania DNA do komórek ependymoglialnych u dorosłych ryb pręgowanych.

Protokół

1. Elektroporacja

Wyjąć rybę z zestawu do wstrzykiwań, trzymając ją w gąbce.
Zanurz wewnętrzną stronę końcówki elektrod w żelu ultradźwiękowym.
Przykryj kresomózgowie ryb niewielką ilością żelu do ultradźwięków.
Umieść głowę ryby między elektrodami, umieszczając elektrodę dodatnią po brzusznej stronie głowy ryby, a elektrodę ujemną po stronie grzbietowej (rysunek 1C), nadal trzymając ciało ryby w gąbce. Wyznacza to kierunek przepływu prądu niezbędnego do elektroportowania wyściółki umieszczonej w strefie podkomorowej.
Delikatnie i precyzyjnie dociśnij elektrody do kresomózgowia (ryc. 1 C). Zarządzaj prądem za pomocą pedału nożnego. Przytrzymaj elektrody na miejscu, aż wszystkie pięć impulsów zostanie zakończonych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Ryc. 1: Schematyczne przedstawienie przekroju koronalnego kresomózgowia danio pręgowanego. (A) Schemat przekroju koronalnego kresomózgowia danio pręgowanego, podkreślający położenie komórek wyściółki, które wyściełają powierzchnię komory i budują brzuszną ścianę komory. Grzbietowa warstwa wyściółki łączy dwie półkule i pokrywa komorę (V), znajdującą się pomiędzy dwiema warstwami komórek: wyściółką i wyś...