Analiza inwazyjności zPDX: badanie inwazyjnego zachowania przerzutowych komórek rakowych w ksenoprzeszczepach zarodków danio pręgowanego

Streszczenie

Źródło: Ren, J. et al. Inwazyjne zachowanie ludzkich komórek raka piersi u embrionalnego danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film opisuje metodę mikroiniekcji do dostarczania komórek raka piersi do przestrzeni okołobiałkowej transgenicznych embrionów danio pręgowanego. Po inkubacji wizualizujemy zarodek pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby obserwować inwazję, rozprzestrzenianie się i przerzuty komórek rakowych.

Protokół

1. Obraz i analiza procesu przerzutowego

1. Zbierz kilka znieczulonych zarodków za pomocą pipety Pasteura z szeroką końcówką i przenieś je na szklane dno styropianowego naczynia.
2. Usuń nadmiar wody i zachowaj ograniczoną ilość wody jajecznej. Manipuluj zarodkiem na miejscu za pomocą narzędzia do pętli do włosów i umieść osłonę na szklance.
3. Używaj odwróconego mikroskopu konfokalnego w połączeniu z zanurzonymi w wodzie lub suchymi obiektywami długodystansowymi. Ustaw zarodek w taki sposób, aby obszar zainteresowania był jak najbliżej celu.
4. Wykonaj obrazowanie natychmiast po znieczuleniu, aby zmniejszyć ryzyko śmierc....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Pipeta Pasteura z szeroką końcówką (0,5-20 μl)	Eppendorf	F276456I
Mikroskop konfokalny	Księga Leica	SP5 STED
Mikroskop stereoskopowy	Księga Leica	MZ16FA
Tg (fli:EGFP) szczep danio pręgowanego			Dzięki uprzejmości dr Ewy SnaarJagalskiej (Instytut Biologii, Uniwersytet w Lejdzie, Lejda, Holandia)
Naczynie styropianowe ze szklanym dnem	WillCo (Spółka WillCo	GWST-5040
Fluorescencyjny mikroskop stereoskopowy	Księga Leica	Czołg M165 FC
Trikaina (kwas 3-aminobenzoesowy)	SigmaAldrich	A-5040

powiedział: )