Dysocjacja mechaniczna: metoda uzyskiwania żywotnych komórek z tkanki

Streszczenie

Źródło: Garaud et. al., Prosty i szybki protokół nieenzymatycznego dysocjacji świeżych tkanek ludzkich do analizy naciekających limfocytów. J. Vis. Exp. (2014).

Ten film opisuje nieenzymatyczną dysocjację świeżej tkanki ludzkiej w celu uzyskania żywotnych komórek. Technika ta służy do analizy jakościowej i ilościowej komórek CD45 dodatnich (limfocytów/leukocytów) obecnych w różnych prawidłowych i złośliwych tkankach ludzkich.

Protokół

1. Przygotowanie homogenatu tkankowego

1. Wycięte tkanki (złośliwe i normalne tkanki wycięte z sali operacyjnej) są umieszczane w laboratorium patomorfologicznym przez przeszkolony personel w celu natychmiastowego odbioru. Guz, NANT (pobrany jak najdalej od guza) i normalne fragmenty tkanek są rutynowo przetwarzane w ciągu 1 - 3 godzin od wycięcia chirurgicznego w laboratorium BSL2 przy użyciu standardowych procedur bezpieczeństwa biologicznego dla tkanek ludzkich. Schemat blokowy protokołu jest zilustrowany na rysunku 1.
2. Zważ wszystkie fragmenty tkanek (normalne, NANT i guz) i zmierz długość, szerokość i wysokość (długość x szeroko....

Wyniki

Rysunek 1: Schemat blokowy protokołu.Przedstawiono naszą procedurę przetwarzania świeżych tkanek ludzkich oraz niektóre podejścia analityczne, które można następnie wykorzystać do oceny limfocytów naciekających tkanki ludzkie

.

Rycina 2: Wybarwiony H&E obraz odcisku tkanki guza piersi.Ten.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Dysocjator GentleMacs	Miltenyi Biotec	130-093-235	BD Medimachine jest w pewnym sensie odpowiednikiem
Wirówka 5810 R	Eppendorf		lub inna standardowa wirówka stołowa
Wirówka 5417 R	Eppendorf		lub inna standardowa mikrowirówka
Szafa bezpieczeństwa biologicznego Esco klasy II A2	ESCO na świecie		lub inny standardowy kaptur BSL2
Mikroskop odwrócony	Nikon zaćmienie TS100		lub inny mikroskop kompatybilny z hemacytometrem
Bürker Chamber Marienfield		Numer katalogowy: 640210	lub inny standardowy hemacytometr
Cytometr przepływowy Navios	Beckman Coulter		lub inny cytometr przepływowy (zalecany 8-10 kolorów)
Rurka C-Tube GentleMacs	Miltenyi Biotec	Numer telefonu 130-096-344	BD Medimachine korzysta z Filcon
Naczynie do hodowli komórkowych	Sarstedt	72 710	lub inne niepirogenne wyroby z tworzyw sztucznych
Skalpel jednorazowy	Swann-Morton	510	lub standardowy sterylny skalpel jednorazowego użytku
Sitko do komórek BD 40 μm	Becton Dickinson	734-0002	lub inne niepirogenne wyroby z tworzyw sztucznych
Tubka BD Falcon 50 ml	Becton Dickinson	Numer katalogowy: 352070	lub inne niepirogenne wyroby z tworzyw sztucznych
BD Falcon Tubka 15 ml	Becton Dickinson	352097	lub inne niepirogenne wyroby z tworzyw sztucznych
BD FACS Probówka 5 ml	Becton Dickinson	352008	lub inne niepirogenne wyroby z tworzyw sztucznych
Sterylna pipeta Pasteura 5 ml	Firma VWR	612-1685	lub inne niepirogenne wyroby z tworzyw sztucznych
Probówka do mikrofuge 1,5 ml	Eppendorf	7805-00	lub inne niepirogenne wyroby z tworzyw sztucznych
X-Vivo 20	Lonza	BE04-448Q	Zalecane podłoże bez serum
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami	Lonza	BE17-516F	standardowy fizjologiczny PBS
Trypan niebieski	Firma VWR	Numer katalogowy: 17942E	lub inna życiowa plama

powiedział: powiedział: powiedział: osób szt. powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: Rozdział powiedział: