Napompowanie agarozy w całym płucu: metoda przygotowania płuc do obrazowania na żywo ex vivo

Streszczenie

Źródło: Van den Bijgaart R.J.E. et al., Ex vivo Live Imaging of Lung Metastasis and Their Microenvironment, J. Vis. Exp. (2016)

Ten film opisuje metodę przygotowania płuc do obrazowania na żywo ex vivo w celu zbadania interakcji między komórkami rakowymi a komórkami zrębu, przy użyciu agarozy do inflacji. W protokole próbki opisano procedurę inflacji agarozy przed obserwacją żywych interakcji komórkowych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przygotowanie płuc do obrazowania na żywo ex vivo

UWAGA: Staraj się pracować tak sterylnie i ostrożnie, jak to tylko możliwe, aby uniknąć niepotrzebnych problemów dla komórek odpornościowych w płucach.

1. Wstrzyknąć myszowi dootrzewnowo (i.p.) śmiertelne przedawkowanie środka znieczulającego dozwolonego przez protokół zwierzęcy zatwierdzony przez IACUC, np. 1 ml 2,5% Avertin. Poczekaj, aż mysz przestanie....

Wyniki

Rysunek 1. Protokół przygotowania płuc do obrazowania na żywo.(A) Odsłonięcie tchawicy po przygotowaniu myszy. (B) Mały wycinek wykonany w odsłoniętej tchawicy równolegle do pierścieni chrzęstnych. (C) Igła 20 G wprowadzona 4-5 mm do tchawicy. (D) Wkroplenie do płuc 400 μl 2% agarozy o niskiej temperaturze to.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Znieczulenia	nie	nie	Znieczulenie zatwierdzone przez IACUC, stosowane do znieczulenia i/lub eutanezji
PBS, sterylne USP	Amresco INC	Zobacz materiał K813-500ML	Ultra czysty gatunek do iniekcji dożylnej
1X PBS	Zakład hodowli komórkowych UCSF	nie
Platforma styropianowa	nie	nie	Będzie używany jako deska do rozwarstwiania
Cienkie nożyczki ostre	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy 14060-11
Igła 20 G x 1, krótki skos	Bd	305178
Kleszcze	Sklep chirurgiczny Roboz	Złącze RS-5135
1 ml strzykawka bez igły	Bd	309659
Agaroza o niskiej temperaturze topnienia	Lonza	Numer katalogowy: 50111	Aby przygotować 10 ml roztworu, odważ 0,2 g agarozy, dodaj do 10 ml 1 x PBS i podgrzej do rozpuszczenia. Agaroza zestala się w temperaturze pokojowej, więc trzymaj w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C, aż zostanie użyta do nadmuchiwania.
RPMI-1640 pożywka bez czerwieni fenolowej	Technologie życiowe	Numer katalogowy 11835-030
24-dołkowa płytka obrazowa	E&K naukowy	EK-42892
Szkiełka szklane, 15 mm	Fisher Naukowy	22-031-144
Cyfrowy regulator CO2 i temperatury	Okolab	DGTCO2BX	http://www.oko-lab.com
Komora klimatyczna	Okolab	nie	http://www.oko-lab.com
Mikroskop konfokalny z wirującym dyskiem Cell Observer	Zeiss	nie
powietrze	Uniwersytet Kalifornijski (UCSF)	nie
tlen	Uniwersytet Kalifornijski (UCSF)	nie
dwutlenek węgla	Uniwersytet Kalifornijski (UCSF)	nie

powiedział: