Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
1.8K wyświetleń
⸱
30 kwietnia 2023
Źródło: Hossian, A. K. M. N. et al., Analiza kombinatorycznych zabiegów miRNA w celu regulacji cyklu komórkowego i angiogenezy. J. Vis. Exp. (2019).
Ten film opisuje protokół ekstrakcji RNA z transfekowanych komórek raka płuc transfekowanych miRNA. Podejście to można wykorzystać do identyfikacji skojarzonej aktywności leczenia miRNA w zatrzymywaniu cyklu komórkowego i angiogenezie.
1. transfekcja miR-143 i miR-506
UWAGA: Używaj rękawiczek lateksowych, okularów ochronnych i fartucha laboratoryjnego podczas wykonywania opisanych eksperymentów. W razie potrzeby należy używać komory bezpieczeństwa biologicznego z włączonym wentylatorem szafy, nie blokując dróg oddechowych ani nie zakłócając laminarnego przepływu powietrza. Zawsze ustawiaj szybę ochronną na odpowiedniej wysokości, zgodnie z opisem producenta.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| A549 Komórki niedrobnokomórkowego raka płuc | Kontroler ATCC (Kontroler T | ATCC CCL-185 | |
| Tłumik Ambion Kontrola negatywna nr 1 siRNA | Ambion | Zobacz materiał AM4611 | |
| has-miR-143-3p mimik miRNA | Abm | MCH01315 | |
| has-miR-506-3p mimik miRNA | Abm | MCH02824 | |
| Płodowa surowica bydlęca (FBS) | Fisher Naukowy | 10438026 | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanem hyklonu (PBS) | Fisher Naukowy | SH30256FS | |
| DMEM 4,5 g/L glukozy, bez pirogronianu sodu, z L-glutaminą | Firma VWR | VWRL0100-0500 | |
| Invitrogen UltraPure Woda destylowana wolna od DNaz/ RNaz | Invitrogen | 10-977-015 | |
| Zestawy Quick-RNA | Badania Zymo | Czynnik R1055 | |
| Etanol, absolutny (200 dowodów), klasa biologii molekularnej, | Odczynniki biologiczne Fisher | BP2818500 | |
| -80 °C Zamrażarka | Firma VWR | VWR40086A | |
| Kropla nano | Thermo Scientific | NanoDrop jeden C | |
| Płytka 96-dołkowa | CELLTREAT Naukowy | 50-607-511 | |
| Penicylina-streptomycyna 10/10 | Antlanta Biologicals | Zobacz materiał B21210 | |
| Inkubator CO2 | Thermo Scientific | HERAcell 150i | |
| DNAZA | Badania Zymo | E1010 | |
| Mieszanka odżywcza F-12K (Kaighn's Mod.) z L-glutaminą, Corning | Corning | 45000-354 | |
| Płodowa surowica bydlęca - Premium | Antlanta Biologicals | S11150 | |
| Matchine wirówka z kontrolowaną temperaturą | Thermo Scientific | Zobacz materiał ST16R | |
| Mikrowirówka matchine z kontrolowaną temperaturą | Eppendrof | Zobacz materiał 5415R |
