Przygotowanie płuc myszy do cytometrii przepływowej: generowanie zawiesiny komórkowej z tkanki płucnej do analizy cytometrii przepływowej

Abstract

Źródło: Moll, H. P., et al. Ortotopowy przeszczep komórek gruczolakoraka płuc w celu zbadania ekspresji PD-L1. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje przygotowanie zawiesiny komórek płuc myszy do analizy metodą cytometrii przepływowej w celu zbadania ekspresji PD-L1 komórek gruczolakoraka płuc.

Protocol

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przygotowanie płuc do cytometrii przepływowej

1. W pożądanym eksperymentalnym punkcie końcowym uspokoić mysz poprzez podskórne wstrzyknięcie mieszaniny ketaminy (100 mg/kg masy ciała) i ksylazyny (10 mg/kg masy ciała) i poddać ją eutanazji przez zwichnięcie szyjki macicy.
2. Namocz tuszę w 70% etanolu i zabezpiecz mysz na desce sekcyjnej za pomocą taśmy.
3. Wykonaj brzuszne nacięcie linii środkowej i delikatnie odwróć skórę, aby odsłonić mięśnie ściany klatki p....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Linia komórkowa gruczolakoraka płuc myszy			Izolowane we własnym zakresie
Myszy C57Bl/6			Można użyć F1 krzyża dwóch teł (8-12 tygodni)
Myszy 129S
RPMI 1640 Średni	Technologie życiowe	11544446
Surowica cielęca płodu	Technologie życiowe	11573397
Roztwór penicyliny/streptomycyny	Technologie życiowe	11548876
L-glutamina	Technologie życiowe	11539876
Ketasol (100 mg/ml ketaminy)	Ogris Pharma	Numer katalogowy: 8-00173
Ksylasol (20 mg/ml ksylazyny)	Ogris Pharma	Numer katalogowy: 8-00178
kleszcze	Roboz powiedział:	Złącze RS8260
Nożyczki do tęczówki dla studentów	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy: 91460-11
DNaza I (bez RNaz)	Laboratoria biologiczne w Nowej Anglii	Zobacz materiał M0303S
Kolagenaza typu I	Technologie życiowe	17100017
Bufor Lizy ACK	Lonza	10-548E