Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.
1. Aspiracja szpiku kostnego i przygotowanie próbki
- Przygotowanie pacjenta i materiału
- Napełnij jedną lub dwie strzykawki o pojemności 10 ml 1% lidokainą za pomocą igły o rozmiarze 16. Wymień igłę na igłę o rozmiarze 21.
- Umieść dwie krople 5% EDTA na szkiełku zegarka.
- Ustawić szkiełka podstawowe (n=15 ze spójną numeracją pacjentów i datą) do przygotowania rozmazu.
- Ułóż pacjenta w bocznej pozycji odleżynowej. Zlokalizuj górny tylny grzbiet biodrowy i zaznacz długopisem.
nuta: Ogólnie rzecz biorąc, tylny górny kręgosłup biodrowy znajduje się na szerokość jednej ręki dystalnie do grzebienia biodrowego i na szerokość jednej ręki bocznie do linii środkowej. U kobiet rzeczywisty kręgosłup może być nieco bardziej boczny, u niektórych mężczyzn nieco bardziej przyśrodkowy.
- Zdezynfekuj skórę chlorheksydyną 0,5-1% w etanolu od zamierzonego obszaru biopsji na zewnątrz okrężnymi ruchami.
- Otwórz opakowanie sterylnych rękawiczek, załóż sterylne rękawiczki i połóż opakowanie na stole, aby stworzyć sterylne pole. Otwórz opakowanie z igłą do aspiracji i umieść je na sterylnym polu.
- Naciekają skórę i tkankę podskórną, a na końcu okostną. W okostnej podawać lidokainę w taki sposób, aby znieczulić obszar o średnicy 1 cm.
nuta: Odpowiednie podawanie lidokainy do okostnej jest jednym z najważniejszych czynników wpływających na komfort pacjenta. Sprawdź, czy okostna została odpowiednio znieczulona, stukając wprowadzoną igłą w zamierzone miejsce biopsji i zapytaj, czy pacjent odczuwa ból. Uwaga: Dzieci są w pełni znieczulone podczas całego zabiegu.
- Trzymać igłę do zasysania (15 Ga x 2,8") bliższym końcem dłoni i palcem wskazującym przyłożyć do boku metalowego trzonka igły w pobliżu końcówki; ta pozycja zapewnia lepszą kontrolę.
- Wprowadzić igłę ruchem obrotowym (szybkim naprzemiennym ruchem pronacyjnym/supinacyjnym) przez skórę w kierunku kręgosłupa biodrowego i doprowadzić igłę do kontaktu z tylnym kręgosłupem biodrowym.
- Upewnij się, że igła została wprowadzona do znieczulonego obszaru okostnej; pacjent powinien odczuwać tylko ucisk, a nie ból. Jeśli pacjent odczuwa ból, zmień położenie igły lub podaj więcej lidokainy.
- Używając delikatnego, ale mocnego nacisku, przesuwaj igłę, obracając ją na przemian w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara i przeciwnym do ruchu wskazówek zegara. Wejście do jamy szpiku jest na ogół wykrywane przez zmniejszony opór.
- Wyjąć trzpień z igły. Podłączyć pustą strzykawkę o pojemności 10 ml do igły.
- Zastosować podciśnienie, wycofując tłok strzykawki delikatnym pociągnięciem. Ostrzeż pacjenta, że może odczuwać skurcze i ból podczas odsysania szpiku. Jeśli nie zostanie uwolniona wystarczająca ilość kolców szpiku kostnego, należy wykonać kolejną aspirację za pomocą jednego szybkiego pobrania. Większość kolców znajdzie się w pierwszych 1-2 ml uzyskanych z początkowego pociągnięcia. Odsysać tylko 1-2 ml, aby uniknąć rozcieńczania próbki.
nuta: Rozcieńczenie spowoduje hemodilucję i może zakłócić wyniki MRD.
- Wyjąć strzykawkę i umieścić trzpień w igle do aspiracji. Wyrzuć część szpiku do szkiełka zegarkowego, a resztę do probówki o pojemności 8 ml pokrytej heparyną.
nuta: Odwróć każdą probówkę natychmiast po umieszczeniu aspiratu szpiku w probówce z próbką, aby zapewnić odpowiednią antykoagulację. Koagulacja szpiku kostnego jest często przyczyną nieodpowiedniego materiału. Dodatkowy szpik kostny można odessać z tego samego miejsca, ale najlepiej, aby igła była wysunięta na 5-10 mm przed pobraniem nowego aspiratu. Najlepiej nie wykonywać więcej niż 2 losowania na poziom wstawiania. Upewnij się, że oznaczyłeś probówki rosnącymi liczbami reprezentującymi pierwsze, drugie i/lub kolejne losowania. Powszechną zasadą jest użycie pierwszego losowania do najbardziej odpowiedniej analizy diagnostycznej.
- Alternatywnie, wycofać igłę z miejsca wprowadzenia i ponownie wprowadzić ją do jamy szpiku w odległości kilku milimetrów od pierwotnego miejsca wprowadzenia i powtórzyć procedurę.
nuta: Nie zasysaj więcej niż 1-2 ml na pociągnięcie, aby uniknąć znacznego zanieczyszczenia krwi.
- Powtarzaj tak często, jak potrzebny jest materiał. Po odessaniu materiału potrzebnego do określonego protokołu badania klinicznego należy usunąć igłę do szpiku kostnego.
nuta: W przypadku powolnej lub w inny sposób utrudnionej aspiracji szpiku kostnego pomocne może być użycie strzykawek, które zostały wstępnie przepłukane antykoagulantem. W przypadku suchego kranu należy wykonać biopsję trepanacyjną, która wykracza poza zakres niniejszego rękopisu.
2. Przygotowanie wymazów do badania morfologicznego
- W celu optymalnej oceny morfologicznej należy pobrać kolce (np. za pomocą plastikowej szpatułki) z aspiratu w szkiełku zegarkowym i umieścić je na szkiełku podstawowym.
- Delikatnie umieścić kolejne szkiełko szkiełkowe na szkiełku podstawowym ze szkiełkiem i delikatnie przesunąć; unikaj jakiegokolwiek nacisku.
nuta: Tylko w przypadku bardzo dużych kolców szpiku kostnego można wywierać niewielki nacisk, aby zmniejszyć grubość rozsiewającej się komórki. Procedura korzysta z pomocy asystenta, który może zająć się probówkami z próbkami. Kluczowe znaczenie ma dokładne oznakowanie probówek numerem pacjenta i numerem sekwencyjnego pobrania szpiku kostnego.
- Dokładnie wysuszyć szkiełko, a następnie wykonać barwienie May Giemsa Grünwald (patrz tabela materiałów). Zbadać pod mikroskopem świetlnym pod kątem morfologii (patrz rysunek 1).
UWAGA: Rycina 1A przedstawia rozmazy zdrowego szpiku kostnego składającego się z różnych funkcjonalnych typów komórek, podczas gdy Rysunek 1B przedstawia pacjenta z AML z głównie blastami białaczkowymi. Aby lepiej określić resztkowe obciążenie białaczką, należy przeprowadzić immunofenotypowanie.
