Artykuł metodologiczny

Test populacji bocznej: metoda izolowania bocznej populacji komórek nowotworowych od danio pręgowanego

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Pruitt, M. M., et al. Izolacja populacji bocznej w indukowanej przez Myc ostrej białaczce limfoblastycznej z komórek T u danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2017).

Poniższy protokół opisuje metodę izolowania populacji bocznej komórek nowotworowych ostrej białaczki limfoblastycznej (T-ALL) komórek T, składającej się z komórek macierzystych, od dorosłego danio pręgowanego. W populacji bocznej brakuje wyraźnych markerów komórkowych, dlatego do ich izolacji używamy testu wypływu barwnika Hoechst 33342.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Barwienie fluorescencyjnie znakowanych komórek T-ALL za pomocą Hoechst 33342 w celu identyfikacji populacji bocznej

  1. Rozcieńczyć Hoechst 33342 1:10 wolnym od nukleazH2O, aby uzyskać stężenie robocze 1 mg/ml. Barwnik należy przechowywać w temperaturze 4 °C i w ciemności.
  2. Przygotować 100 mM roztwór werapamilu, rozpuszczając 49,1 mg w 1 ml dimetylosulfotlenku (DMSO).
    nuta: Werapamil jest inhibitorem transporterów ABC i stanowi ważną kontrolę w eksperymentach populacyjnych ubocznych. Dodanie werapamilu do próbek zahamuje zdolność transporterów ABC do wypływu barwnika Hoechst 33342. W związku z tym prawdziwa popula....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Surowica płodowa bydlęca (FBS)HyClone Laboratories, Inc.Fisher Scientific - SH3007103500 ml
sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)Gibco firmy Life TechnologiesNumer katalogowy 1001-023pH 7,4 (1x) - 500 ml
Hoechst 33342Technologie życioweZobacz materiał H357010 ml
WerapamilSigma Nauki przyrodniczeZobacz materiał V46291 gramów
Dimetylosulfotlenek (DMSO)Sigma Nauki przyrodniczeZobacz materiał D8418100 ml
Jodek propidynyTechnologie życioweZobacz materiał P356610 ml
Sortownik komórek FACSAria FusionBD Nauki biologiczne
powiedział: powiedział:

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Efluks barwnika Hoechsttransportery ABCsorter kom rek aktywowany fluorescencjbarwienie jodkiem propidynykom rki nowotworowe rybek zebrafishostra bia kowa bia aczka limfoblastyczna T kom rkowaizolacja kom rek macierzystychkontrola werapamilemprotok sortowania kom rek

Powiązane artykuły