Test minimalnej dawki rumieniowej: metoda pomiaru wrażliwości na promieniowanie UV w modelach mysich

Streszczenie

Źródło: Amaro-Ortiz, A. et al. Farmakologiczna indukcja melaniny naskórka i ochrona przed oparzeniami słonecznymi w humanizowanym modelu myszy. J. Vis. Exp. (2013)

Ten film opisuje metodę pomiaru wrażliwości na promieniowanie UV w humanizowanym modelu myszy - modelu myszy, który naśladuje ludzką skórę. Określamy minimalną dawkę rumieniową (MED) promieniowania UV, które może powodować rumień lub obrzęk skóry. Metoda może pomóc w ustaleniu skuteczności leków stosowanych w celu zmniejszenia wrażliwości na promieniowanie UV.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

Określenie wrażliwości na promieniowanie UV poprzez obliczenie "minimalnej dawki rumieniowej" (MED)

1. Należy stosować zwierzęta, które zostały wstępnie poddane działaniu podłoża lub forskoliny. Znieczulić zwierzęta za pomocą dootrzewnowego wstrzyknięcia standardowej mieszaniny ketaminy i ksylazyny.
2. Przygotuj kawałek taśmy UV-okluzyjnej do badania MED. Aby wygenerować otwory w taśmie, użyj wytrzymałego dziurkacza z okrągłym wycięciem o powierzchni 1 cm² (rysunki 1A i B). Posiadanie otworów o określonej wielkości i symetrycznym rozmieszczeniu w taśmie ułatwia rozpoznanie zmian skórnych po napromieniowaniu. Na każdy otwór w taśmie nałóż mały, ale łatwo odłączany kawałek taśmy, który można usunąć w określonych momentach podczas ekspozycji na promieniowanie UV, aby umożliwić podawanie różnych dawek promieniowania UV.
3. Gdy zwierzęta zostaną odpowiednio uspokojone, umieść taśmę na powierzchni grzbietowej. Lubrykant do oczu powinien być zawsze stosowany w znieczuleniu.
4. Włącz źródło UV składające się z dwóch lamp Westinghouse F15T8UV-B o szczytowej mocy 313 nm i zakresie 280-370 nm. Pozwól, aby lampa zrównoważyła się do stałej mocy UV, mierzonej przez fotometr UV z czujnikiem UVB (zwykle nagrzewanie się lamp zajmuje kilka minut).
5. Na podstawie szybkości transmisji promieniowania UV zmierzonej za pomocą fotometru UV oblicz czas ekspozycji na promieniowanie UV dla każdej żądanej dawki. Na przykład moc UVB naszej lampy wynosi 2,4 mW/^cm2. W związku z tym, aby podać 5 kJ/m², skóra musiałaby być wystawiona na działanie promieniowania UVB przez 208 sekund (czyli 3 minuty i 28 sekund), jak obliczono poniżej:
   
6. Umieść uspokojone zwierzęta (każde z założoną taśmą okluzyjną) powierzchnię brzuszną w dół, aby zapewnić równomierną ekspozycję na promieniowanie UV. Aby podać wybrane dawki promieniowania UV, należy kolejno usuwać małe taśmy okluzyjne zakrywające otwory, aby wystawić 1^cm2 obszary skóry na działanie odpowiednich dawek promieniowania. Dlatego, korzystając z powyższego przykładu, jeśli 40 kJ/^m2 jest największą dawką w doświadczeniu, to zwierzę znajdowałoby się pod lampą przez łącznie 27 minut i 47 sekund, a skóra w stanie 40 kJ/^m2 nie miałaby przez cały czas nałożonej taśmy. Jednak taśma pokrywająca warunek 5 kJ/^m2 zostanie usunięta, gdy do końca ekspozycji pozostało 208 sekund. Czas usuwania taśmy powinien być taki, aby każdy warunek kończył się jednocześnie.
7. Po ekspozycji na promieniowanie UV należy ostrożnie odkleić taśmę od skóry grzbietowej, uważając, aby nie rozerwać skóry nagłymi lub zbyt silnymi ruchami. Umieść zwierzęta w ciepłym, cichym miejscu, aby umożliwić powrót do zdrowia po znieczuleniu.
8. Monitoruj myszy przez 24-48 godzin, aby szukać dyskretnych obszarów rumienia (zaczerwienienia) lub obrzęku (obrzęku) odpowiadających miejscom anatomicznym narażonym na określoną dawkę promieniowania UV. Dokumentuj wyniki skóry na zdjęciach.
9. Wartość MED odpowiada minimalnej dawce promieniowania UV, która wywołuje stan zapalny zdefiniowany przez rumień i/lub obrzęk całego odsłoniętego kręgu skóry. Należy pamiętać, że pigmentacja skóry może stanowić wyzwanie w określeniu MED, jednak rumień i obrzęk można ogólnie ocenić, częściowo dzięki określonemu kształtowi otworów w taśmie podczas ekspozycji na promieniowanie UV.

Wyniki

Rysunek 1. Melanizacja wywołana przez forskolinę chroni przed stanem zapalnym zależnym od promieniowania UV, co określono za pomocą testu minimalnej dawki rumieniowej (MED). Panie przewodniczący, panie i panowie! Umiejscowienie taśmy okluzyjnej UV i dawki UVB u zwierząt leczonych dwa razy dziennie przez 5 dni (A,C) lub raz dziennie przez 15 dni (B,D,E) podłożem lub ...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Ksylazyna	Wstrzyknięcie w zniekojeniu	LA04612	Shenandoah, Iowa, Stany Zjednoczone
Ketamina HCl, USP	Putney	NDC 26637-411-01	St. Joseph, MO, Stany Zjednoczone
etanol	Laboratoria Dekonu.	Numer katalogowy 2705
Krem do depilacji, Nair	Kościół Dwight	JF-11 4381322	Priceton, Nowy Jork
Bakteriobójcza lampa Hg UV-B	Westinghouse	F15T8UV-B
Fotometr radiometryczny	Międzynarodowe światło	1LT400A	Peabody, Massachusetts, Stany Zjednoczone
Izotezja, Izofluran, USP	Kamerdyner Schein	NCD 11695-6776-1	Dublin, OH, Stany Zjednoczone
Chromametr	Konica Minolta	Silnik CR-400	Ramsey, New Jersey, Stany Zjednoczone
Procesor danych dla chromametru CR-400	Konica Minolta	Przekaźnik DR-400	Ramsey, New Jersey, Stany Zjednoczone