Heterotopowe przeszczepienie serca u myszy

Podsumowanie

Model heterotopowego przeszczepienia serca u myszy został uznany przez wielu badaczy za istotną metodę badania mechanizmów odrzutu i odpowiedzi immunologicznej. Jednak techniki z nią związane wciąż stanowią wyzwanie. Dzięki modyfikacji standardowych metod z sukcesem przeprowadziliśmy ponad 1000 przeszczepów.

Streszczenie

Heterotopowe przeszczepianie serca u myszy jest szeroko stosowane od czasu wprowadzenia tej metody przez dr. Corry'ego i dr. Russella w 1973 roku. Jest ona szczególnie cenna w badaniu odrzutów i odpowiedzi immunologicznej, zwłaszcza w obliczu dostępności nowszych myszy transgenicznych i z nokautem genów oraz opracowania licznych odczynników immunologicznych. Model przeszczepu serca jest mniej rygorystyczny niż modele przeszczepu skóry, choć pod względem technicznym bardziej wymagający. Opracowaliśmy zmodyfikowaną technikę i przeprowadziliśmy ponad 1000 udanych przypadków heterotopowego przeszczepiania serca u myszy. Podczas wykonywania anastomozy aorty wstępującej i aorty brzusznej, dwa szwy stabilizujące zostają umieszczone w proksymalnym i dystalnym wierzchołku aorty brzusznej biorcy oraz aorty wstępującej dawcy; następnie, przy użyciu nici 11-0, wykonuje się anastomozę po obu stronach aorty za pomocą szwów ciągłych. Szwy stabilizujące ułatwiają wykonanie anastomozy, a rozmiar nici 11-0 jest optymalny, aby zapobiec krwawieniu i zakrzepicy.

Podczas wykonywania anastomozy tętnicy płucnej i żyły głównej dolnej, w proksymalnym i dystalnym wierzchołku żyły głównej dolnej biorcy oraz tętnicy płucnej dawcy zakłada się dwa szwy stabilizujące. Lewą ścianę żyły głównej dolnej i tętnicę płucną dawcy zamyka się szwami ciągłymi wewnątrz żyły głównej dolnej; po zawiązaniu jednego węzła przy proksymalnym szwie stabilizującym, prawą ścianę żyły głównej dolnej i tętnicę płucną dawcy zamyka się szwami ciągłymi na zewnątrz żyły głównej dolnej, używając nici 10-0. Metoda ta jest łatwiejsza w wykonaniu, ponieważ anastomoza jest tworzona po jednej stronie żyły głównej dolnej, a nici 10-0 mają odpowiedni rozmiar, aby uniknąć krwawienia i zakrzepicy. W niniejszym artykule przedstawiamy szczegóły techniki uzupełniające materiał wideo.

Protokół

Przygotowanie dawcy i pobranie serca:

1. Myszy podaje się znieczulenie poprzez dood brzuszne wstrzyknięcie pentobarbitalu, a następnie umieszcza się ją w pozycji grzbietowej na polu operacyjnym.
2. Wykonuje się długie cięcie w linii środkowej brzucha. Zawartość jamy brzusznej odsuwa się za pomocą pozostawionej gazy, aby odsłonić aortę brzuszną oraz żyłę główną dolną.
3. W celu heparynizacji do żyły głównej dolnej wstrzykuje się 1 ml heparyny (10 j./ml).
4. Wykonuje się torakotomie: żebra przecina się po obu stronach kręgosłupa, a przednią ścianę klatki piersiowej unosi, aby odsłonić serce.
5. Żyłę główną dolną, żyłę główną górną oraz żyłę nieparzystą podwiązuje się jedwabną nicią 6-0 i przecina powyżej podwiązań.
6. Aortę wstępującą i tętnicę płucną oddzielono i przecięto tak dystalnie, jak to możliwe.
7. Żyły płucne zostają podwiązane i przecięte dystalnie od wiązań.
8. Serce poddaje się perfuzji w temperaturze 4°C^o roztwór soli fizjologicznej
9. Serce przechowuje się w lodowatym roztworze soli fizjologicznej.

Przygotowanie biorcy i transplantacja

1. Myszy podaje się znieczulenie poprzez dostawodnieuwkowy wtrysk pentobarbitalu, a następnie kładzie ją na plecach w polu operacyjnym.
2. Wykonuje się długie cięcie w linii środkowej brzucha. Treść jamy brzusznej odsuwa się za pomocą gazy poza obszar brzucha, aby odsłonić aortę brzuszną oraz żyłę główną dolną.
3. Odnogi aorty brzusznej i żyły głównej dolnej zostają odsłonięte i podwiązane szwami 10-0.
4. Podwiązania proksymalne i dystalne umieszcza się odpowiednio wokół aorty i żyły głównej dolnej.
5. Wenotomię żyły głównej dolnej biorcy wykonuje się za pomocą igły 30 G. Otwór zostaje następnie rozszerzony za pomocą mikronożyczek do długości równej tętnicy płucnej dawcy.
6. Aortotomię aorty brzusznej biorcy wykonuje się za pomocą igły 30 G.
7. Otwartą aortę brzuszną i żyłę główną dolną przemywa się roztworem soli fizjologicznej.
8. Serce dawcy umieszcza się po lewej stronie brzucha biorcy i przykrywa gazą.
9. Szwy stabilizujące zakłada się w punktach proksymalnym i dystalnym aorty brzusznej biorcy oraz wstępującej aorty dawcy.
10. Anastomozę prawej strony aorty brzusznej biorcy i wstępującej aorty dawcy wykonuje się za pomocą szwów ciągłych.
11. W pierwszej kolejności wykonuje się dwa szwy stabilizujące w punkcie proksymalnym i dystalnym żyły głównej dolnej biorcy oraz tętnicy płucnej dawcy w celu wykonania anastomosis tętnicy płucnej dawcy i żyły głównej dolnej biorcy.
12. Lewą ścianę żyły głównej dolnej i tętnicy płucnej dawcy zamyka się szwami ciągłymi wewnątrz żyły głównej dolnej.
13. Po zawiązaniu jednego węzła szwem stabilizującym w punkcie proksymalnym, prawą ścianę żyły głównej dolnej i tętnicę płucną dawcy zamyka się szwami ciągłymi na zewnątrz żyły głównej dolnej.
14. Serce dawcy przekłada się na prawą stronę brzucha biorcy. Prawą ścianę anastomosis aorty brzusznej biorcy i wstępującej aorty dawcy zamyka się szwami ciągłymi.
15. Po wykonaniu anastomosis usuwa się podwiązanie dystalne, aby sprawdzić, czy nie występuje krwawienie z miejsca zespolenia.
16. Jeśli krwawienie z anastomosis jest minimalne lub nie występuje, usuwa się podwiązanie proksymalne. Serce dawcy natychmiast wypełnia się krwią, zmienia kolor na czerwony i zaczyna ponownie bić.
17. Jelita wprowadza się z powrotem do jamy brzusznej, którą zamyka się szwami ciągłymi 6-0.
18. Myszy biorcy umieszcza się w ciepłym miejscu. Po godzinie biorca budzi się z narkozy.

 

Dyskusja

Wyniki

Z powodzeniem przeprowadziliśmy ponad 1000 przypadków heterotopowego przeszczepu serca u myszy, osiągając ponad 90% skuteczności u różnych szczepów, w tym u myszy typu dzikiego, transgenicznych oraz z nokautem genowym.

Dyskusja

Od czasu, gdy dr Corry i dr Russell wprowadzili heterotopowe przeszczepy serca u myszy w 1973 roku, model ten okazał się szczególnie wartościowy w badaniu odpowiedzi immu...