Stereotaktyczne podejście Cisterna Magna do dostarczania terapeutycznego w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Joshi, K., et al. Stereotaktyczne podejście chirurgiczne do mikroiniekcji ogonowego pnia mózgu i górnego odcinka szyjnego rdzenia kręgowego za pośrednictwem Cisterna magna u myszy. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film demonstruje stereotaktyczne podejście cisterna magna do ukierunkowanego dostarczania do pnia mózgu i górnego rdzenia kręgowego. Dzięki dostępowi do cisterna magna wypełnionego płynem mózgowo-rdzeniowym, podejście to umożliwia precyzyjne wstrzykiwanie w miejsca, do których trudno jest dotrzeć przy użyciu standardowych metod stereotaktycznych.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Otwarcie błony cysterny

:

1. Użyj kątowych kleszczy Dumonta, aby chwycić oponę twardą, która rozciąga się od kości potylicznej do atlasu. Chwyć oponę twardą w pobliżu kości potylicznej i użyj nożyczek sprężynowych, aby zrobić mały otwór (~0,5 do 1,5 mm) w oponie twardej.
   UWAGA: W tym miejscu rostralnym przestrzeń między pniem mózgu a leżącą nad nią oponą twardą jest najszersza, zapewniając dużo miejsca na bezpieczną manipulację oponą twardą.
2. Użyj nożyczek sprężynowych, aby podnieść oponę twardą i dalej ją otworzyć. Rozmiar okna zależy od celu.
   UWAGA: Większe okno będzie potrzebne podczas wykonywania wielu wstrzyknięć wzdłużnych lub wstrzyknięć dwustronnych; Małe okienko będzie wystarczające przy wykonywaniu pojedynczych wstrzyknięć jednostronnych lub w linii środkowej.
3. Po otwarciu opony twardej spuść nadmiar płynu mózgowo-rdzeniowego za pomocą sterylnej końcówki wskazującej.

2. Identyfikacja punktów orientacyjnych i punktu zerowego

1. Spójrz na grzbietową powierzchnię pnia mózgu ze szczegółowymi punktami orientacyjnymi przez otwartą oponę twardą. Niedosuwka, punkt, w którym kanał centralny otwiera się do komory dożylnej, jest standardowym przednio-tylnym i przyśrodkowym punktem zerowym.

3. Wstrzyknięcie celu

1. : Opuść pipetę lub strzykawkę do celu za pomocą ramienia stereotaktycznego i roztworu do wstrzykiwania, tak jak w przypadku standardowych podejść stereotaktycznych. Pozostawić na miejscu na 1-5 minut po wstrzyknięciu, aby uniknąć śladu igły w przypadku stosowania objętości od 3 do 50 nL. Następnie podnieść pipetę lub strzykawkę za pomocą ramienia stereotaktycznego.
2. Powtórz krok 3.1. dla wielu celów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Kleszcze kątowe, Dumont 5/45	FST	11251-35	Tylko po to, aby chwycić dura
Nożyczki sprężynowe, Vannas 2,5mm z dołączonym pudełkiem	FST	15002-08	Nożyczki tylko do otwierania opony twardej, pudełko do podnoszenia ciała
Stereotaktyczny mikromanipulator	Kopf	1760-61	Dołączony do uchwytu elektrody w celu regulacji pozycji na podstawie współrzędnych
Zespół ramy stereotaktycznej "U" i wewnątrzkomórkowej płyty podstawy	Kopf	1730-B, 1711	Rama do operacji
Sterylne aplikatory z bawełnianą końcówką	Puritan	25-806 10WC	Wchłanianie krwi z pola operacyjnego