Trwałe dostarczanie czynnika wzrostu nerwów za pomocą porowatego filmu krzemowego w komórkach guz chromochłonnego szczura 12

Streszczenie

Źródło: Rosenberg, M., et al. Projektowanie porowatych filmów krzemowych jako nośników czynnika wzrostu nerwów. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film demonstruje zastosowanie degradowalnej nanostrukturalnej porowatej folii krzemowej (PSi) do przedłużonego uwalniania czynnika wzrostu nerwów (NGF) w celu wspierania różnicowania komórek PC12. NGF jest adsorbowany na porach folii poprzez oddziaływania elektrostatyczne i jest stopniowo uwalniany do mediów w wyniku dyfuzji i degradacji rusztowania. To kontrolowane dostarczanie sprzyja przeżyciu komórek PC12 i ułatwia wzrost i rozgałęzianie się neurytów przez dłuższy czas.

Protokół

1. Wytwarzanie utlenionych porowatych nośników krzemowych (PSiO₂)

1. Wytnij wafel krzemowy (Si) (jednostronnie polerowany na powierzchni <100> i mocno domieszkowany borem, typ p, 0,95 mΩ·cm) na próbki o średnicy 1,5 cm × 1,5 cm za pomocą pisaka z diamentową końcówką.
2. Próbki krzemu utleniać w piecu rurowym w temperaturze 400 °C przez 2 godziny w otaczającym powietrzu (szybkość ogrzewania: 25 °C/min, chłodzenie naturalne).
3. Zanurzyć próbki Si w roztworze wodnego kwasu fluorowodorowego (HF) (48%), podwójnie destylowanej wody (ddH₂O) i etanolu (99,9%) (1:1:3 v/v/v) na 5 minut; następnie trzykrotnie przepłukać próbki etanolem i wysu....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule Nazwa Firma Numer katalogowy Komentarze AcetonGadot830101375 AmfoterycynaPrzemysł biologiczny03-028-1B Wodny HF (48%)Merck101513 AZ4533 fotorezystorMetal Chem, Inc.AZ4533 Frakcja BSA vMP biomedicals216006950 roztwór BSA (10%)Biological Industries03-010-1B Kolagen typu lCorning Inc. 354236 CollagenaseEncoLS004176 Szkiełka nakrywkowe z tworzywa sztucznego powlekane kolagenemNUNC Thermanox1059846 D-(+)-glukozaSigma-Aldrich ChemicalsG8170 Dispase-IISigma-Aldrich Chemicals4942078001 Absolut etanolu (99,9%)Merck818760 FBSBiological Industries04-121-1A Guanidine-HClSigma-Aldrich ChemicalsG7294 Mieszanka odżywcza Ham's F-12Thermo Scientific11765054 HBSSThermo Scientific14185-045 HEPES (1M)Thermo Scientific15630-056 HSBiological Industries04-124-1A L-15 średniSigma-Aldrich ChemicalsL5520 LamininThermo Scientific23017015 L-glutaminaBiological Industries03-020-1A Mysi β-NGFPeprotech450-34-20 Normalny osioł surowica (NDS)Sigma-Aldrich ChemicalsG9023 PapainaSigma-Aldrich Chemicalsp-4762 PBS (pH 7,4) Przygotowana przez rozpuszczenie 10 mM Na₂HPO₄, 1,8 mM KH₂PO₄, 137 mM NaCl i 2,7 mM KCl w wodzie podwójnie destylowanej (ddH₂O, 18 MΩ·cm).PBS X10Biological Industries02-020-1A Linia komórkowa PC12ATCCCRL-1721 Penicylina–streptomycynaPrzemysł biologiczny03-032-1B Poli-L-lizynaSigma-Aldrich ChemicalsP4832 Odczynnik PrestoBlueThermo ScientificA13261 RPMI mediumBiological Industries01-100-1A Wafel SiSiltronix Corp. Wysoce domieszkowany B, typ p, rezystywność 0,00095 Ω cm, zorientowany na <100>Azydek soduSigma-Aldrich ChemicalsS2002 Wodorotlenek sodu (NaOH)Sigma-Aldrich ChemicalsS8045 Kwas garbnikowySigma-Aldrich Chemicals403040 Triton X-100Chem-Impex International Inc.Rok 1279