Okulistyczne podawanie leków do nieinwazyjnej neuromodulacji w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Zhan, J., et al. Nieinwazyjne strategie przewlekłej manipulacji aktywnością neuronalną kontrolowaną przez DREADD. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film przedstawia nieinwazyjną metodę dostarczania leków okulistycznych do ukierunkowanej neuromodulacji. Lek jest dostarczany w postaci kropli do oczu, wchłaniany do krążenia, przenika przez barierę krew-mózg i aktywuje określone receptory neuronalne.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Powtarzalne podawanie N-tlenku klozapiny (CNO) za pomocą kropli do oczu

1. Przyzwyczaj zwierzęta do obchodzenia się z nimi, szorując każdą mysz 3 minuty dziennie przez 3-4 dni przed podaniem kropli do oczu.
2. Rozpuścić N-tlenek klozapiny (CNO, 5 mg) w 1 ml jałowego 0,9% roztworu soli fizjologicznej (roztwór podstawowy: 5 mg CNO/ml). Roztwór należy przechowywać w lodówce w temperaturze 4°C.
3. Zważ każdą mysz przed rozpoczęciem eksperymentu, aby określić ilość CNO, która ma zostać dostarczona. Użyj 1-3 μl kropli (na oko), aby osiągnąć 1,0 mg CNO/kg masy ciała.
   UWAGA: Na przykład mysz o wadze 20 g powinna otrzymywać obustronne (po 2 μl każdy) krople do oczu.
4. Krople do oczu należy podawać w fazie nieaktywności (światła) myszy, 2 godziny przed wyłączeniem świateł (czas zeitgeber (ZT) 10). W przypadkach, gdy CNO musi być dostarczone podczas aktywnej (ciemnej) fazy myszy, należy zapewnić obecność słabego czerwonego światła w celu prawidłowego obchodzenia się ze zwierzętami.
   UWAGA: Należy podjąć środki ostrożności, aby uniknąć zakłócenia cyklu okołodobowego (i światła/ciemności) zwierząt doświadczalnych.
   1. Używając mikropipety P10, załaduj wymaganą ilość (1-3 μL) roztworu CNO, aby uzyskać 1,0 mg CNO/ kg.
      UWAGA: Do każdej kropli do oczu należy używać nowej i sterylnej końcówki do pipety. W tym zestawie eksperymentów wykonano obustronne krople do oczu CNO; jeśli jednak wymagane jest niższe stężenie CNO, można również zastosować jednostronne krople do oczu.
   2. Unieruchom mysz za pomocą karku.
   3. Powoli wyrzucaj roztwór, aż na końcówce pipety utworzy się stabilna kropla.
   4. Ostrożnie zbliżyć kroplę do rogówki oka myszy, aż do podania roztworu. Końcówka pipety nigdy nie powinna stykać się z okiem myszy.
   5. Zwolnij mysz, umieszczając ją z powrotem w klatce domowej.
5. Powtarzaj tę procedurę codziennie przez 5 dni.
   UWAGA: Czas ten można dostosować zgodnie z wymaganiami eksperymentalnymi.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	Liofilizowany proszek ≥96% (elektroforeza w żelu agarozowym)
Myszy C57BL/6J	Laboratorium Jacksona	#000664	samce myszy, 3 miesiące
Naczynia włosowate	Drummond Firma naukowa	#3-000-203-G/X	Średnica zewnętrzna: 1,14 cala.
Tlenek N klozapiny	Sigma	#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	Izofluran,
mikrowtryskiwacz	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - Programowalny wtryskiwacz nanolitrowy
Media montażowe	Invitrogen	#P36930	Odczynnik przeciwblaknięcia Prolong Gold

USP III