Stereotaktyczny przeszczep zawiesiny komórek nerwowych myszy z urazowym uszkodzeniem mózgu

Streszczenie

Źródło: Furmanski, O., et al. Kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych. J. Vis. Exp. (2019 rok)

W tym filmie indukowane przez człowieka pluripotencjalne komórki nerwowe pochodzące z komórek macierzystych są stereotaktycznie wstrzykiwane do granicy istoty szarej i istoty białej kory głębokiej w mysim modelu urazowego uszkodzenia mózgu. Przeszczepione komórki integrują się z tkanką, wspomagając regenerację funkcjonalną i naprawę obwodów w uszkodzonym mózgu.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Stereotaktyczne przeszczepienie zawiesiny komórkowej

1. Procedurę przeszczepu komórek należy rozpocząć około 24 godziny po kraniektomii.
2. Przygotuj sprzęt do przeszczepu komórek i materiały chirurgiczne
   1. Napełnij strzykawkę o pojemności 1 ml sterylnym roztworem soli fizjologicznej do irygacji ran. Podłączyć igłę 25 G do strzykawki, aby kontrolować irygację.
   2. Napełnij strzykawkę o pojemności 1 ml roztworem CsA (cyklosporyny A) w celu immunosupr....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
strzykawki	Becton Dickinson (BD)	309659
1,7 ml probówki z klapką	Denville	C2170
10 mikrolitrów strzykawka	Hamilton	7635-01
25G Igły do strzykawek Precision Glide	Becton Dickinson (BD)	305122
70% etanolu			Produkt do wyboru; różni się w zależności od regionu
Zawiesina doustna acetaminofenu	Tylenol (dla dzieci)		Rozcieńczyć do 1 mg/ml w wodzie
Parownik znieczulający	Vetland	0521-11-22
Ściereczka		do obsługi zwierząt	Zakup w domu towarowym
Betadine	Purdue Products	NDC-67618-151-32
Sprężony tlen			Produkt do wyboru; różni się w zależności od regionu
Cyklosporyna A	Sigma-Aldrich	30024-100mg
Dimetylosulfotlenek (DMSO)	Sigma-Aldrich	D8418-500ml
DMEM	Invitrogen (ThermoFisher)	A14430-01
Taśma izolacyjna	3M Corporation		Zakup w domu towarowym
Pęseta drobnoziarnista	Fine Science Tools	11254-20
Kleszcze	Fine Science Tools	91106-12
Pipety kapilarne szklane, 1 mm OD, 0,58 mm ID	World Precision Instruments	1B100F-3
Zestaw mikrosilnika obrotowego o dużej prędkości	Foredom Electric Co.	K.1070 - K.107018
Ideal Micro Drill Frez Zestaw 5	Cell Point Scientific	60-1000
Impact One Stereotaktyczny impaktor do CCI	Leica Biosystems	39463920
Isoflurane	Baxter	NDC-10019-360-60
Zegary laboratoryjne	Fisher Scientific	14-649-17
Mikropipeta ściągacz	MicroData Instruments, Inc.	PMP-102	Wystarczy dowolny ściągacz
Szkiełka nasadkowe do mikroskopu	Fisherbrand	12-545-E Średni
		uchwyt do montażu szkiełek mikroskopowych	Produkt do wyboru
Lustro			Zakup w domu towarowym
Uchwyt igły hemostat	Fine Science Tools	12002-12
Okulistyczny maść	Falcon Pharmaceuticals	NDC-61314-631-36
Okulistyczne nożyczki sprężynowe	Fine Science Tools	15018-10
Plastikowe pudełko			Zakup w domu towarowym
Plastikowy cylinder			Zakup w domu towarowym
Pompa strzykawkowa z napędem QSI	Stoelting	53311
Wyjmowana igła złączka zaciskowa	Hamilton	55750-01
Mała rama stereotaktyczna dla gryzoni	Stoelting	51925
Małe nożyczki	Fine Science Tools	14060-09
StemPro Accutase	Invitrogen (ThermoFisher)	A1110501
Sterylne podkładki nasączone alkoholem	Fisherbrand	06-669-62
Sterylne waciki bawełniane/Końcówki Q Kendall	Tyco Healthcare	540500
Sterylna sól fizjologiczna	Hospira	NDC-0409-1966-07
Stopery (2)	Fisher Scientific	06-662-56
Szkiełka mikroskopowe Superfrost Plus Gold	Fisherbrand	15-188-48
Szwy - jedwab 5.0 z zakrzywioną igłą	Oaza	MV-682

>1 ml