Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Wewnątrzkomorowe wstrzyknięcie i elektroporacja in utero embrionów myszy w 15. dniu rozwoju (E15)
W tym artykule
Streszczenie
In utero in-vivo iniekcja i elektroporacja embrionalnej nowokory myszy stanowią potężne narzędzie do manipulacji poszczególnymi komórkami progenitorowymi wyścielającymi ściany komór bocznych. Technika ta jest obecnie powszechnie wykorzystywana do badania procesów uczestniczących w kortykogenezie poprzez nadekspresję lub wyciszanie genów oraz obserwację ich wpływu na proliferację, migrację i różnicowanie komórkowe. W porównaniu z tradycyjnymi strategiami nokautu, elektroporacja in utero zapewnia szybki sposób manipulacji populacją komórek w określonym oknie czasowym. W niniejszym protokole wideo przedstawiamy metodologię eksperymentalną obejmującą przygotowanie myszy do operacji, odsłonięcie rogów macicy poprzez laparotomię, wstrzykiwanie DNA do komór bocznych rozwijającego się zarodka, elektroporację DNA do progenitorów wyścielających ścianę boczną oraz opiekę nad zwierzętami po zabiegu. Nasze laboratorium stosuje ten protokół w przypadku operacji na myszach w dniach embrionalnych E13-E16, jednak najczęściej jest on przeprowadzany w dniu E15, co zaprezentowano w tym filmie.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Przedruki i uprawnienia
