$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
Wykorzystano ośmiotygodniowe dorosłe samce myszy C57BL/6N.
1. Konfiguracja przedoperacyjna
- Upewnij się, że masz odpowiedni zapas autoklawowanych, sterylizowanych narzędzi chirurgicznych, sprzętu, leków przeciwbólowych i leków znieczulających.
- Zapewnij odpowiednią przestrzeń roboczą na stole operacyjnym.
- Przygotuj stół operacyjny, używając spersonalizowanej chirurgicznej deski piankowej pokrytej pieluchą jako łóżka dla myszy. Przymocuj podkładkę rozgrzewającą do płyty piankowej za pomocą taśmy medycznej pokrytej sterylną gazą.
- Twórz zwijacze, zginając igłę do akupunktury za pomocą kleszczy naczyniowych, składając ją na pół, a następnie zginając końcówkę złożonej igły do akupunktury w haczyk. Przymocuj gumowy pasek na końcu igły do akupunktury i użyj pinezki, aby przymocować koniec gumowego paska do płyty piankowej.
- Skalibruj mikroskop stereoskopowy; wybierz mikroskop stereoskopowy o odpowiedniej odległości ogniskowania. Zakryj przyciski zoomu/ostrości wysterylizowaną folią aluminiową, aby chirurg mógł je wyregulować podczas operacji. Wysterylizowana folia aluminiowa została umieszczona na przyciskach zoomu/ostrości, dzięki czemu chirurg mógł z niej korzystać w sterylnych rękawiczkach.
2. Znieczulenie i przygotowanie myszy
- Zważ mysz i znieczul ją zgodnie z jej masą ciała (izofluran 3%). Upewnij się, że mysz nie reaguje, gdy przestrzenie międzypalcowe jej łapy są ściśnięte, aby potwierdzić głębokość znieczulenia. Przez cały czas trwania zabiegu należy zachować odpowiednią głębokość znieczulenia (1% izofluranu).
- Maść okulistyczną nakładać obustronnie na oczy, aby zapobiec podrażnieniu lub wysuszeniu rogówki podczas zabiegu.
- Przygotuj miejsce operacji, goląc sierść na szyi i klatce piersiowej za pomocą automatycznej maszynki do strzyżenia. Usuń i wyczyść luźne włosy.
- Umieść mysz w pozycji leżącej na podkładce rozgrzewającej pokrytej sterylną gazą. Utrzymuj temperaturę myszy na poziomie 37 °C podczas całej operacji. Przymocuj mysz taśmą medyczną, aby kończyny przednie odwodziły się poziomo i zapobiegały poruszaniu się kończyn tylnych i ogona. Na myszach umieszczono wysterylizowaną jednorazową serwetę chirurgiczną z odpowiednim otworem.
3. Procedura operacyjna
- Wstrzyknąć tramadol jako środek przeciwbólowy zapobiegawczy (20 mg/kg, dootrzewnowo lub domięśniowo). Zaznacz poprzeczne nacięcie na górnej krawędzi obojczyka. Użyj trzech cykli naprzemiennego szorowania roztworu do dezynfekcji jodoforu i etanolu w celu dezynfekcji miejsca operowanego. Potwierdź głębokość znieczulenia szczyptą palca u nogi przed zabiegiem.
- Pracując pod mikroskopem, wykonaj 4 mm poprzeczne nacięcie wzdłuż znaku za pomocą sterylnego skalpela. W razie potrzeby należy powiększyć nacięcie podczas zabiegu.
- Tępo przeprowadź sekcję przez powięź podskórną i zidentyfikuj dolną granicę gruczołu podżuchwowego. Pociągnij gruczoł podżuchwowy do góry, aby odsłonić dół nadobojczykowy i mostek.
UWAGA: W tym obszarze mogą znajdować się naczynia krwionośne małego kalibru. Elektrokoagulacja może być stosowana w celu zatrzymania krwawienia. - Wykonaj częściowe środkowe nacięcie sternotomii (~4 mm), nacinając mostek od głowy do ogona wzdłuż linii środkowej. Chroń opłucną, serce i naczynia krwionośne podczas sternotomii.
- Zidentyfikuj mięsień mostkowo-gnykowy. Delikatnie pociągnij mostek za pomocą dwóch małych, niestandardowych zwijaczy wykonanych z igieł do akupunktury i zidentyfikuj mięsień mostkowo-gnykowy nad tchawicą i przełykiem. Cofnij ten mięsień, aby odsłonić tętnicę szyjną, żyłę szyjną wewnętrzną, nerw przeponowy, nerw błędny, tchawicę i przełyk.
UWAGA: Delikatnie cofnij mostek, aby uniknąć otwartej odmy opłucnowej. W przeciwieństwie do ludzi, przełyk myszy nie znajduje się za tchawicą, ale przylega do tchawicy po lewej stronie. - Zidentyfikuj lewy splot ramienny. Na bocznej krawędzi lewej żyły szyjnej wewnętrznej wyciągnij powięź i tkankę tłuszczową na zewnątrz, aby odsłonić splot ramienny. Poszukaj górnego pnia, składającego się z nerwów szyjnych lub C5 i C6, które mają trzy gałęzie. Zidentyfikuj środkowy tułów złożony z nerwu C7 i dolnego tułowia złożonego z C8 i nerwów piersiowych lub T1, wzdłuż górnego tułowia aż do ogona myszy.
UWAGA: Na powierzchni splotu ramiennego znajdują się podłużne naczynia krwionośne. Użyj elektrokoagulacji, aby zapobiec krwawieniu. Oddzielając lewy splot ramienny, należy chronić kanał chylous, aby uniknąć przetoki chylous. - Zbierz lewy nerw C7. Rozciąć przedni i tylny podział środkowego tułowia (nerw C7) dystalnie do poziomu podziału na rdzeń pod obojczykiem i zablokować nerw C7 0,1 ml 2% lidokainy przez miejscową infuzję do pnia nerwowego. Wytnij nerw C7 nożyczkami sprężynowymi Vannas w miejscach jego połączenia ze sznurem bocznym i sznurem tylnym. Przytnij nerw C7 tak, aby długość każdego podziału była podobna.
UWAGA: Przedni i tylny podział nerwu C7 oraz przedni i tylny podział górnego i dolnego pnia biegną na dużą odległość przed zbiegiem, więc nerw C7 powinien być wystarczająco uwolniony przed resekcją. W rzeczywistości nerw C7 nie zawsze jest podzielony na dwie części; Czasami dzieli się go na trzy działy, a w rzadkich przypadkach nawet na cztery. - Usuń lewą blaszkę brzuszną C6. Ostrożnie chroń nerw przeponowy i odetnij przedni mięsień pochyły na poziomie segmentu C6, aby odsłonić korzeń nerwowy C7. Wytnij małe gałęzie nerwu C7 unerwiającego mięsień przykręgosłupowy za pomocą mikrokleszczy. Delikatnie wyciągnij nerw C7 i ostrożnie wytnij blaszkę brzuszną C6.
UWAGA: Między przyśrodkową stroną lewej tętnicy szyjnej a boczną stroną przełyku występuje kostna wypukłość. Ta kostna wypukłość to blaszka brzuszna 6. kręgu szyjnego. Mięsień podłużny bocznej krawędzi blaszki brzusznej C6 jest przednim mięśniem pochyłym, a nerw przeponowy biegnie po powierzchni przedniego mięśnia pochyłego. - Zbierz prawy nerw C7. Przeciąć przedni mięsień pochyły po prawej stronie, podobnie jak po lewej stronie, i przeciąć prawy korzeń nerwowy C7 blisko otworu międzykręgowego. Wypreparuj prawy nerw C7 od jego poziomu podziału.
UWAGA: Ostrożnie przeciąć prawy nerw C7, aby zapobiec uszkodzeniu naczyń krwionośnych pod nerwem. - Przenieś lewy nerw C7.
- Usuń częściowo po obu stronach mięśniowy longus colli obok trzonów kręgów. Dosadnie oddziel i rozszerz przestrzeń między tchawicą-przełykiem a trzonem kręgu.
- Wyślij na pół składany nylonowy szew 5-0 z prawej strony trzonu kręgu na lewą stronę przez drogę przedrdzeniową.
- Połącz lewy nerw C7 rurką infuzyjną i poprowadź nerw na prawą stronę drogą przedrdzeniową.
- Delikatnie cofnij tchawicę i przełyk i połącz przedni i tylny podział lewego nerwu C7 z prawym korzeniem nerwowym C7 bez naprężeń za pomocą szwów nylonowych 12-0. Zszyj epineurium wokół nerwów za pomocą 4-5 szwów, aby silnie skoaptyzować nerwy.
UWAGA: Bardzo ważne jest, aby wybrać plastikową rurkę infuzyjną o odpowiedniej grubości. Zbyt cienka rurka może uszkodzić nerw, a zbyt gruba rurka może uszkodzić tchawicę i przełyk. Ponadto przestrzeń między tchawicą-przełykiem a trzonem kręgu jest przestrzenią w kształcie litery "V", a przecięcie części mięśniowej longus colli może skrócić drogę przenoszenia.
4. Zamknięcie rany
:
- Przepłukać ranę sterylną solą fizjologiczną i osuszyć sterylną gazą.
- Zszyj mostek i zamknij skórę za pomocą szwów monofilamentowych 5-0.
5. Opieka pooperacyjna
- Poczekaj, aż mysz obudzi się ze znieczulenia. Przenieś mysz do czystej klatki bez ściółki, ale ogrzanej kocem ocieplającym. Obserwuj mysz, dopóki nie zacznie chodzić. Stosować tramadol (20 mg/kg, i.p.) jako środek przeciwbólowy pooperacyjny.
- Umieść myszy w klatce regeneracyjnej i monitoruj ją aż do wyzdrowienia. Przywróć wodę i dietę myszy po operacji. Codziennie monitoruj myszy po operacji pod kątem oznak upośledzenia lub infekcji, w tym niedożywienia, zgarbionej postawy i potarganej sierści. Po dwóch tygodniach od zabiegu powinno nastąpić usunięcie szwów.
UWAGA: Maść z erytromycyną należy nakładać na powierzchnię rany codziennie przez trzy kolejne dni. - W przypadku zaobserwowania jakichkolwiek powikłań, takich jak obrzęk rany, należy je natychmiast rozwiązać.