Dożylne podawanie terapeutycznych nanocząstek w modelu glejaka mysiego

Streszczenie

Źródło: Kim, B. D., et al. Dostarczanie nanocząstek ładunku oligonukleotydowego w modelu zwierzęcym glejaka wielopostaciowego. J. Vis. Exp. (2024)

Ten film pokazuje dożylne wstrzyknięcie terapeutycznych nanocząstek myszy z glejakiem. Metoda umożliwia celowane dostarczanie przez barierę krew-mózg i wspiera nieinwazyjne obrazowanie w celu oceny biodystrybucji nanocząstek i skuteczności terapeutycznej w guzach mózgu.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Podawanie MN-anty-miR10b

UWAGA: W tym badaniu zastrzyki wykonywano raz w tygodniu przez 6 tygodni, począwszy od 7 dni po implantacji, ale ten sam protokół można stosować dla różnych częstotliwości wstrzyknięć.

1. Zważ mysz i oblicz objętość MN (nanocząstki magnetycznej)-anty-miR10b, którą należy podać myszy. Dawki MN-anty-miR10b podaje się w dawce 20 mg Fe (żelaza)/kg w mysich modelach GBM (glejak wielopostaciowy). Na przykład mysz o wadze 20 g otrzymuje dawkę 80 μl 5 mg Fe/ml MN-anty-miR10b. Myszy kontrolne otrzymują równą objętość PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami) zgodnie z tym schematem dawkowania.
2. Przygotować strzykawkę 28G z dawką MN-anti-miR10b i upewnić się, że w roztworze do wstrzykiwań nie ma pęcherzyków powietrza.
3. Znieczulij mysz poniżej 2%-4% izofluranu do indukcji i 1,5%-2% do konserwacji z natężeniem przepływu 1,5 l/min w pudełku indukcyjnym. Przesuń mysz do stożka nosowego i kontynuuj podawanie znieczulenia. Sprawdź głębokość znieczulenia i nałóż maść weterynaryjną.
4. Wysterylizuj ogon chusteczką z 70% izopropanolem i pozostaw nadmiar alkoholu do wyschnięcia.
5. Obróć ogon, aby ustawić boczne żyły ogonowe na szczycie ogona. Następnie, kierując się w stronę żyły, wbij igłę w ogon i wytwórz podciśnienie, odciągając tłok.
6. Wprowadzić igłę, aż krew dostanie się do strzykawki, co oznacza pomyślne wejście do żyły.
7. Powoli wstrzyknąć MN-anty-miR10b i wycofać igłę po całkowitym podaniu. Uciskać miejsce wstrzyknięcia gazą, aż do ustania krwawienia.
8. Zdejmij mysz ze stożka nosowego. Monitoruj mysz do czasu całkowitego wyzdrowienia i chodzenia.
   UWAGA: Podanie nanocząstek w bolusie może spowodować niewydolność oddechową. Uważnie monitoruj mysz i natychmiast stosuj lekkie uciskanie klatki piersiowej, jeśli występują oznaki niewydolności oddechowej.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Atymiczna naga mysz "J:NU"	Jackson Laboratory	RRID:IMSR_JAX:007850	Model myszy z obniżoną odpornością
70% chusteczka nasączona alkoholem izopropoylowym	Cardinal	MW-APL	Miejscowa chusteczka antyseptyczna do implantacji guza i iniekcji żyły ogonowej
Isoflurane	Covetrus	11695067772	Anethesia
Waporyzator izofluranowy	SOMNI Scientific	VS6002	Aparat anestezjologiczny
Strzykawka insulinowa 1CC 29G X 1/2"	Becton, Dickinson	324704	Strzykawka do wstrzykiwań D-Lucyferyny i wstrzykiwań nanocząstek do żyły ogonowej