Ten film przedstawia wstępne traktowanie makrofagów pęcherzykami błony zewnętrznej (OMV) Legionella pneumophila w celu zbadania ich wpływu na replikację bakterii. Zmieniając sygnalizację immunologiczną gospodarza, OMV sprawiają, że makrofagi są bardziej podatne na infekcje. Wyższa liczba kolonii w leczonych komórkach, w porównaniu z komórkami nieleczonymi, wskazuje, że OMV sprzyjają replikacji L. pneumophila wewnątrz makrofagów.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Oznaczanie replikacji Legionella pneumophila w makrofagach poddanych działaniu pęcherzyków błony zewnętrznej
507 wyświetleń
⸱
29 sierpnia 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
1. Wstępne leczenie makrofagów
- Przygotuj komórki THP-1 (komórki Tohoku Hospital Pediatrics-1, ludzka linia komórkowa białaczki monocytowej).
UWAGA: THP-1 to monocytowa linia komórkowa pochodząca od pacjenta z białaczką.- Dodaj 2x105 komórek THP-1 na 24 dołki i różnicuj je, dodając 20 nM 12-mirystynianu 13-octanu (PMA) do komórek podobnych do makrofagów. Inkubować przez 24 godziny w temperaturze 37 °C.
- Zastąp pożywkę 500 μl świeżej pożywki i inkubuj przez kolejne 24 godziny; optymalna pożywka dla komórek THP-1 składa się z Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 o wysokiej zawart....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10 cm petridish | Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Niemcy) | 82.1473 | |
| Węgiel aktywowany | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Niemcy) | X865.2 | |
| Agar-agar, Kobe I | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Niemcy) | 5210.2 | |
| Agar Columbia z 5 % krwią owczą | Becton Dickinson GmbH (Heidelberg, Niemcy) | 254005 | |
| Azotan żelaza nonahydrat | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Niemcy) | 5632.1 | |
| Surowica cielęca płodu (FCS) | Life Technologies GmbH (Darmstadt, Niemcy) | 10270-106 | |
| Inkubator dwutlenku węgla Heracell 240i | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Brunszwik, Niemcy) | 40830469 | |
| Heraeus Multifuge X3R | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Niemcy) | 75004515 | |
| Pętla inokulacyjna | Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Niemcy) | 86.1567.010 | |
| L. pneumophila Corby | --- | --- | Uprzejmie dostarczone przez prof. dr Antje Flieger (RKI, Berlin, Niemcy) |
| L. pneumophila Corby ΔflaA | ------ | Uprzejmie dostarczone przez prof. dr Klausa Heunera (RKI, Berlin, Niemcy) | |
| mBMDM | --- | --- | Uprzejmie dostarczone przez prof. dr Markusa Schnare'a (Philipps Univeristy Marburg, Marburg, Niemcy) i prof. dr Carstena Kirschninga (University Duisburg Essen, Essen, Niemcy) |
| PBS | Biochrom GmbH (Berlin, Niemcy) | L 1825 | |
| Phorbol 12-mirystynian 13-octan | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen, Niemcy) | P8139-1MG | |
| Wytrząsarka obrotowa (MaxQ 6000) | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Brunszwiku, Niemcy) | SHKE6000 | |
| RPMI 1640 high glucose | Life Technologies GmbH (Darmstadt, Niemcy) | 11875-093 | |
| Saponin | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Niemcy) | 9622.1 | |
| Ultrospec 10 | Biochrom Ltd (Cambridge, Anglia) | 80-2116-30 | |
| THP-1 | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen, Niemcy) | 88081201-1VL | |
| Sorvall Discovery 100 SE | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Brunszwik, Niemcy) | ||
| Ekstrakt drożdżowy | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Niemcy) | 2363.2 |
